一种精制珍贵稀有人参皂苷的制备方法及用图
【专利摘要】本发明涉及天然药物化学领域，公开了一种利用人参属植物提取物生成珍贵稀有人参皂苷制备方法及用途。包括以下步骤：将人参属植物切片或粉碎后采用溶剂回流提取，过滤提取液后，将提取液浓缩得到浸膏；对浸膏采用脱农残和脱重金属处理；制取人参二醇组皂苷，浓缩干燥成粉末后灭菌，然后冷却至一定温度；将经灭菌的人参二醇组皂苷粉末与发酵菌种混匀，用无菌液体培养基和蒸馏水调节水分，充分混匀后密封，置于恒温培养箱中发酵得到人参二醇组皂苷发酵产物。本发明工艺简单，操作方便，大量获得稀有并具有抗肿瘤和抗抑郁活性物质珍贵稀有人参皂苷。
【专利说明】
一种精制珍贵稀有人参皂苷的制备方法及用途
技术领域
[0001]本发明属于天然药物化学生物转化领域，具体涉及一种利用人参属植物发酵生成珍贵稀有人参皂苷的制备方法及抗肿瘤、提高免疫力、联合放化疗药物增效减毒和抗抑郁方面的应用。
【背景技术】
[0002]人参属植物提取物中主要成分为人参皂苷，人参皂苷按照母核的不同分为三种类型:原人参二醇型、原人参三醇型和齐墩果酸型。
[0003]人参二醇组皂苷是以原人参二醇为母核的系列人参皂苷的统称，是人参属植物中抗肿瘤、提高免疫力和抗抑郁等生理活性最显著的物质。
[0004]现代药理研究发现，人参皂苷的抗肿瘤活性与人参皂苷分子侧链糖基的结合位置和数量有关，并且抗肿瘤活性随着糖基数量的减少而增加，短糖链的人参二醇皂苷发酵产物具有很强的抗肿瘤和抗抑郁活性。
[0005]珍贵稀有短糖链人参皂苷是在人参属植物中含量极低，却具显著生理活性的一类皂苷，主要是:原人参二醇、人参皂苷Rg3、人参皂苷F2、人参皂苷Rh2和人参皂苷CK。药理实验证实，珍贵稀有短糖链人参皂苷具有抑制多种癌细胞生长、抗抑郁、激活氯离子通道、抑制被激活的钠通道去极化、抑制人胚肾、HEK-293细胞伸张和幽门螺旋杆菌生长等诸多活性。
【发明内容】
[0006]本发明的目的是提供一种利用人参属植物发酵生成珍贵稀有人参皂苷的制备方法及抗肿瘤、提高免疫力、联合放化疗药物增效减毒和抗抑郁方面的应用。本发明工艺简单，操作方便，产品干燥容易，最重要的是在菌种发酵过程中实现人参二醇组皂苷的生物转化，得到抗肿瘤和抗抑郁活性物质珍贵稀有人参皂苷。
[0007]本发明的目的通过采用以下技术方案实现
一种精制珍贵稀有人参皂苷的制备方法，包括以下步骤:
a.将人参属植物切片或粉碎；
b.用有机提取溶剂回流提取，过滤，滤液减压浓缩，得到人参属植物浸膏；
c.对人参属植物浸膏采用脱农残和脱重金属工艺；
d.对人参属植物浸膏进行纯化处理，制备人参二醇组皂苷，并干燥成粉末；
e.将人参二醇组皂苷粉末低温灭菌，然后冷却至一定温度；
f.将经灭菌的人参二醇组皂苷粉末与发酵菌种混匀，菌种添加量为1%-100%，用无菌液体培养基和蒸馏水调节水分，充分混匀后密封，置于恒温培养箱中发酵得到人参二醇组皂苷发酵产物。
[0008]进一步地，所述的人参属植物为人参，西洋参或者三七。
[0009]进一步地，所述的有机提取溶剂是水、乙醇或者甲醇。
[0010]进一步地，所述的脱农残工艺为超临界萃取，脱重金属工艺为螯合树脂D751或D403o
[0011 ]进一步地，所述的制备人参二醇组皂苷工艺为柱层析，层析材料为大孔树脂。
[0012]进一步地，所述的e步骤中人参属植物提取物粉末灭菌温度为40_100°C。
[0013]进一步地，所述的f步骤中发酵体系的水分为30%_90%，发酵时间为4_24h，发酵温度为 20-80 °C。
[0014]进一步地，所述发酵过程中，发酵菌种水解多糖链人参属植物提取物皂苷的C-3和C-20位的糖基，转化为部分无糖链的抗肿瘤活性物质人参二醇组皂苷发酵产物。
[0015]进一步地，所述的一种精制珍贵稀有人参皂苷制备方法，其特征在于所述发酵过程中人参属植物提取物发酵菌种来自真菌、细菌或放线菌如黑根霉Rhizopus sp菌种。
[0016]进一步地，所述人参二醇组皂苷发酵产物包含原人参二醇、人参皂苷Rg3、人参皂苷F2、人参皂苷Rh2和人参皂苷CK等
本发明人参皂苷的菌种发酵是将人参属植物提取物作为营养基质，通过微生物的生化反应过程对人参皂苷进行结构修饰，产生新的活性成分。该方法工艺简单，操作方便，产品干燥容易，成本低廉，具有高专一性、高效性、环境友好，适合工业放大等特点，实现了珍贵稀有人参皂苷的制备。
[0017]【附图说明】:
以下图可作为附件材料上报。
[0018]图1、珍贵稀有人参皂苷制备流程图【具体实施方式】:
为了更清楚的理解本发明，下面通过具体的实施例进一步做详细描述这些实施例仅用于对本发明进一步说明，二不用于限制本发明的范围。
[0019]实施例1
人参属植物人参切片，用70%乙醇回流提取，过滤，滤液减压浓缩，得到人参浸膏，对人参浸膏采用超临界萃取脱农残，即选用10%乙醇作为夹带剂，夹带剂与原料的比为0.5:1，超临界萃取的萃取为30MPa、萃取60摄氏度，采用超临界萃取设备，C02循环使用，流速设定5kg/h，平均用量为15kg。对人参浸膏采用螯合树脂脱农残，500g浸膏加水稀释至5L，搅拌，静置12h，取上清液过D751树脂，95%乙醇洗脱，合并洗脱液，真空旋转浓缩至无醇味，加水至2L，经大孔树脂DlOl吸附，40-50%乙醇洗脱流份，经浓缩后得到干燥粉末，121°C灭菌15min，冷却至室温，低温灭菌，灭菌温度为40-100°C，然后冷却至室温;将1g灭菌后的人参属植物提取物粉末与2.2g菌种混匀；加入液体培养基和蒸馏水调节水分，发酵体系的水分为30%-90% ；充分混匀后密封，置于30 0C恒温培养箱中发酵8d得到珍贵稀有人参皂苷。
[0020]实施例2
人参属植物三七切片，用80%乙醇回流提取，过滤，滤液减压浓缩，得到人参浸膏，对人参浸膏采用超临界萃取脱农残，即选用15%乙醇作为夹带剂，夹带剂与原料的比为0.8:1，超临界萃取的萃取为30MPa、萃取60摄氏度，采用超临界萃取设备，C02循环使用，流速设定5kg/h，平均用量为15kg。对人参浸膏采用螯合树脂脱农残，500g浸膏加水稀释至5L，搅拌，静置12h，取上清液过D403树脂，95%乙醇洗脱，合并洗脱液，真空旋转浓缩至无醇味，加水至2L，经大孔树脂DlOl吸附，40-50%乙醇洗脱流份，经浓缩后得到干燥粉末，低温灭菌，灭菌温度为40-1OO °C，然后冷却至室温;配置液体培养基，121°C灭菌15min，冷却至室温;将1g灭菌后的人参属植物提取物粉末与2.2g菌种混匀；加入液体培养基和蒸馏水调节水分，发酵体系的水分为30%-90%;充分混匀后密封，置于40°C恒温培养箱中发酵1d得到珍贵稀有人参皂苷；
[0021] 实施例3
人参属植物西洋参切片，用75%乙醇回流提取，过滤，滤液减压浓缩，得到人参浸膏，对人参浸膏采用超临界萃取脱农残，即选用10%乙醇作为夹带剂，夹带剂与原料的比为0.8:1，超临界萃取的萃取为30MPa、萃取60摄氏度，采用超临界萃取设备，C02循环使用，流速设定5kg/h，平均用量为15kg。对人参浸膏采用螯合树脂脱农残，500g浸膏加水稀释至5L，搅拌，静置12h，取上清液过D751树脂，95%乙醇洗脱，合并洗脱液，真空旋转浓缩至无醇味，加水至2L，经大孔树脂DlOl吸附，40-50%乙醇洗脱流份，经浓缩后得到干燥粉末，低温灭菌，灭菌温度为40-100°C，然后冷却至室温;配置液体培养基，121°C灭菌15min，冷却至室温将8g灭菌后的二醇组皂苷粉末与2.5g菌种混匀；加入液体培养基和蒸馏水调节水分，发酵体系的水分为30%-90% ；充分混匀后密封，置于50 0C恒温培养箱中发酵12d得到珍贵稀有人参皂苷。
【主权项】
1.一种精制珍贵稀有人参皂苷的制备方法及用途，包括以下步骤: a、将人参属植物切片或粉碎； b、用有机提取溶剂溶液回流提取，过滤，滤液减压浓缩，得到人参属植物浸膏； C、对人参属植物浸膏采用脱农残和脱重金属工艺； d、对人参属植物浸膏进行纯化处理，制备人参二醇组皂苷，并干燥成粉末； e、将人参二醇组皂苷粉末低温灭菌，然后冷却至一定温度； f、将经灭菌的人参二醇组皂苷粉末与发酵菌种混匀，菌种添加量为1%_100%，用无菌液体培养基和蒸馏水调节水分，充分混匀后密封，置于恒温培养箱中发酵得到人参二醇组皂苷发酵产物精制珍贵稀有人参皂苷。2.根据权利要求1所述的一种精制珍贵稀有人参皂苷的制备方法，其特征在于所述的人参属植物为人参，西洋参或者三七的一种或几种的混合物。3.根据权利要求1所述的一种精制珍贵稀有人参皂苷的制备方法，其特征在于所述的有机提取溶剂是水、乙醇或甲醇。4.根据权利要求1所述的一种精制珍贵稀有人参皂苷的制备方法，其特征在于所述的脱农残工艺为超临界萃取，脱重金属工艺为螯合树脂D751或D403。5.根据权利要求1所述的一种精制珍贵稀有人参皂苷的制备方法，其特征在于所述的制备人参二醇组皂苷纯化工艺为柱层析，层析用材料为大孔树脂。6.根据权利要求1所述的一种精制珍贵稀有人参皂苷的制备方法，其特征在于所述的e步骤中人参属植物提取物粉末灭菌温度为40-100°C。7.根据权利要求1所述的一种精制珍贵稀有人参皂苷的制备方法，其特征在于所述的f步骤中发酵体系的水分为30%-90%，发酵时间为4-24h，发酵温度为20-80 °C。8.根据权利要求1所述的一种精制珍贵稀有人参皂苷的制备方法，其特征在于所述发酵过程中，发酵菌种水解多糖链人参属植物提取物皂苷的C-3和C-20位的糖，转化产物以无糖链皂苷原人参二醇为主，以短糖链皂苷人参皂苷Rg3、人参皂苷F2、人参皂苷Rh2、人参皂苷CK为辅的一类混合物。9.根据权利要求1所述的一种精制珍贵稀有人参皂苷的制备方法，其特征在于所述发酵过程中人参属植物提取物发酵菌种来自真菌、细菌或放线菌如黑根霉Rhizopus sp菌种。10.根据权利要求1所述的一种精制珍贵稀有人参皂苷的制备方法，其特征在于所述精制珍贵稀有人参皂苷主要为原人参二醇、人参皂苷Rg3、人参皂苷F2、人参皂苷Rh2、人参皂苷CK等。11.根据权利要求1所述的一种精制珍贵稀有人参皂苷的制备方法，其特征在于所述用途主要是抗肿瘤、提高免疫力、联合放疗或化疗药物可增效减毒和抗抑郁。12.根据权利要求1所述的一种精制珍贵稀有人参皂苷的制备方法，其特征在于所述用途，主要用于食品添加剂、保健品及药品。
【文档编号】C12P33/20GK106086146SQ201610501690
【公开日】2016年11月9日
【申请日】2016年6月30日
【发明人】赵兴增, 王相云, 单宇, 李龙柱, 冯煦
【申请人】江苏省中国科学院植物研究所