一种细胞培养瓶的制作方法
【技术领域】
[0001]本实用新型涉及生物制药设备领域的一种细胞培养瓶。
【背景技术】
[0002]细胞培养瓶是生物制药行业进行细胞培养生产药物的重要耗材，特别是在重组蛋白生产领域，对细胞培养瓶的无菌、透气性要求相当高，因而受到医药行业和医疗器械行业研究人员的广泛青睐。细胞培养瓶，可以根据材质分为玻璃细胞培养瓶和塑料细胞培养瓶；根据培养瓶底部形状可以分为圆形、正方形、长方形、三角形等。根据细胞培养瓶的容积可以有5-1000ml等多种规格。根据细胞生长方式可分为的贴壁细胞培养瓶和悬浮细胞培养瓶。
[0003]生物制药业的迅速发展，使哺乳动物细胞悬浮培养成为主流的重组蛋白生产技术。哺乳动物细胞悬浮培养通常使用一次性塑料细胞培养瓶，因为这种培养瓶安全性高、发展成熟，瓶盖有密封盖、透气盖等可供选择；然而一次性培养瓶的使用成本也非常高，不仅给研究者带来沉重的经济负担，也造成研究和生产过程中的严重资源浪费；而玻璃细胞培养瓶可以反复高压灭菌，使用成本大大降低，但目前玻璃细胞培养瓶只有螺旋式密封盖，在进行细胞培养时需要将密封盖旋松，以保证细胞培养物的通所量和PH稳定，这样的操作不仅不方便，还会使培养过程中的污染风险大大增加。
[0004]因此，需要一种可反复使用的玻璃细胞培养瓶，其同时具有无菌透气瓶盖，以满足培养过程中在无菌条件下进行气体交换。
【实用新型内容】
[0005]本实用新型的目的是为了克服现有技术的不足，提供一种可以反复使用的细胞培养瓶，其能保证在细胞培养过程中无菌条件的气体交换。
[0006]实现上述目的的一种方案是，一种细胞培养瓶，包括瓶体和瓶盖，所述瓶盖通过螺口与瓶体连接。
[0007]所述瓶盖材质为高密度聚乙烯(High Density Polyethylene，简称为“HDPE”)，利用冲压床在瓶盖中心开环形孔，在瓶盖内安装直径与瓶盖内径相同的圆片形疏水微孔滤膜，以便为细胞培养瓶中进行培养的细胞提供无菌气体交换，减少细胞培养瓶中细胞被污染的风险。所述疏水微孔滤膜可从市场购买，过滤孔径通常为0.1-0.45 μ m，优选0.22ym;所述滤膜为常用于细胞开放培养的疏水滤膜，尤其适合在CO2培养箱中进行细胞培养，尤其适用于需要进行长期细胞培养的实验。
[0008]进一步地，为了固定安装在瓶盖内的微孔滤膜，使用直径与瓶盖内径相同的硅胶密封垫，冲压出相同孔径的环形孔，用于压紧固定滤膜；硅胶密封垫可用平头镊子取出和放回，便于滤膜的更换。
[0009]进一步地，为了保证无菌条件下的透气性，同时防止培养基过度蒸发，需要根据瓶体的容积限制瓶盖开孔大小，一般开孔直径为瓶盖直径的1/10-1/3，优选1/5。
[0010]进一步地，安装于瓶盖内的疏水微孔滤膜可在反复高压10-20次后更换新的滤膜，以保证无菌条件下的气体交换。
[0011]进一步地，瓶体是由玻璃制成的；
[0012]进一步地，瓶体是由硼硅玻璃制成的。
[0013]再进一步地，瓶口为外螺纹口 ；瓶盖相应地为内螺纹口。
[0014]再进一步地，所述瓶体可以进行硅烷化以减少细胞吸附。
[0015]采用了本实用新型的一种细胞培养瓶的技术方案，即玻璃制可反复高压的瓶体、通过外螺纹瓶口与可反复高压的内螺纹瓶盖连接，所述瓶盖中间适当开孔，瓶盖内安装优选0.22 μπι孔径的疏水微孔滤膜，并用同样开孔的硅胶密封垫压紧固定。因此，所述细胞培养瓶在无菌条件下可实现良好的透气性，并且可以避免培养基过度蒸发，整个细胞培养瓶可经彻底清洗、高压灭菌后反复使用，大大降低了悬浮细胞培养成本，为使用悬浮细胞培养制备的生物药物研制和开发提供了经济的细胞培养模式。
【附图说明】
[0016]图1为本实用新型的一种细胞培养瓶的主视图。
[0017]图2为本实用新型的一种细胞培养瓶的组成部件图。其中
[0018]1:瓶身；2:螺纹瓶口 ；3:开孔螺纹瓶盖
[0019]图3为本实用新型的一种细胞培养瓶的瓶盖俯视图。
[0020]3:开孔螺纹瓶盖；4:环形开孔密封垫；5:疏水微孔滤膜。
[0021]图4为使用本实用新型的一种细胞培养瓶培养CHO的细胞活率和细胞密度图。其中a为商品化一次性细胞培养瓶培养细胞；b为本实用新型细胞培养瓶清洗消毒I次后培养细胞；c为本实用新型细胞培养瓶清洗消毒10次后培养细胞。
[0022]【具体实施方式】:
[0023]请参阅图1、图2和图3，本实用新型的发明人为了能更好地对本实用新型的技术方案进行阐述，下面通过具体的实施例，并结合附图进行详细说明。
[0024]请参阅图1和图2，本实用新型的一种细胞培养瓶(图1)，包括瓶体I和外螺纹瓶口 2，特殊的内螺纹瓶盖3，瓶盖3通过螺纹与瓶口 2紧密连接(图2)，构造无菌条件防止细胞培养瓶内培养的细胞受到污染。
[0025]瓶盖3的中心有环形开孔(图3)，内部安装疏水微孔滤膜，并用同样开孔的硅胶密封垫压紧固定。这样设计的目的在于，既保证瓶盖的透气性，又可以创造无菌条件，并防止培养基蒸发，同时可通过清洗、更换疏水微孔滤膜后经高压灭菌，实现细胞培养瓶可反复使用的目的，大大降低悬浮细胞培养的成本，减少生物制药研究开发的资源损耗。
[0026]本实施例中，不同容积的细胞培养瓶，配备不同直径的瓶盖(图2)，这样设计的目的在于保证细胞培养瓶内与外部环境的气体交换，特别适合在CO2培养箱中进行细胞培养。
[0027]本实施例中，采用经过清洗和高压灭菌的所述细胞培养瓶，在CO2培养箱中培养CHO细胞，温度控制在37 °C，0)2所浓度为5%，摇床转速为120rpm，初始细胞密度为3X 105cells/ml ;每24小时取样，进行细胞计数和活率测定，结果如附图4所示，细胞活率均保持在95%以上，细胞生长曲线也与商品化一次性细胞培养瓶相当，证实所述细胞培养瓶的设计是合理可行的。
【主权项】
1.一种细胞培养瓶，包括瓶体、瓶口和瓶盖，所述瓶盖通过瓶口的螺纹与所述瓶体连接，其特征在于，所述瓶盖为开孔设计，开孔直径为瓶盖直径的1/10-1/3，瓶盖内安装大小与瓶盖直径相同的微孔滤膜，所述瓶体由玻璃制成，瓶体的径高比为2:1?1:1。2.根据权利要求1所述的细胞培养瓶，其特征在于所述瓶盖的材质为高密度聚乙烯，为中心开环形孔设计。3.根据权利要求1所述的细胞培养瓶，其特征在于开孔直径为瓶盖直径的1/5。4.根据权利要求1所述的细胞培养瓶，其特征在于，微孔滤膜的过滤孔径为0.1?0.45 μ m。5.权利要求4所述的细胞培养瓶，其特征在于，微孔滤膜的过滤孔径为0.22 μ m06.权利要求4或5所述的细胞培养瓶，其特征在于，所述微孔滤膜以同样开孔的硅胶密封圈压紧固定。7.根据权利要求6所述的细胞培养瓶，其特征在于，微孔滤膜安装1-3层且滤膜可随意更换。8.根据权利要求1所述的细胞培养瓶，其特征在于所述瓶体由硼硅玻璃制成。9.根据权利要求1所述的细胞培养瓶，其特征在于:所述瓶体的径高比为3:2。
【专利摘要】本实用新型公开了可应用于生物制药领域的一种细胞培养瓶，由玻璃制可反复高压的瓶体、通过外螺纹瓶口与可反复高压的内螺纹瓶盖连接构成，所述瓶盖中间适当开孔，瓶盖内安装疏水微孔滤膜，并用同样开孔的硅胶密封垫压紧固定。其技术效果在于，疏水微孔滤膜可以定期更换，玻璃瓶体可以反复清洗，所有部件可以反复高压灭菌，使得所述细胞培养瓶在无菌条件下可实现良好的透气性，并且可以避免培养基过度蒸发，所述细胞培养瓶可以反复使用，大大降低了悬浮细胞培养成本，为使用悬浮细胞培养制备的生物药物研制和开发提供了经济的细胞培养模式。
【IPC分类】C12M1/12, C12M3/02, C12M1/24
【公开号】CN204918617
【申请号】CN201520384970
【发明人】万德有, 刘蕴慧, 冯红茹, 崔新玲, 高新
【申请人】北京和实康明医药科技有限公司
【公开日】2015年12月30日
【申请日】2015年6月5日