一种植物叶片dna高通量快速提取磨样器的制造方法
【专利说明】-种植物叶片DNA高通量快速提取磨样器 -、技术领域
[0001 ]本实用新型设及一种植物叶片DNA高通量快速提取磨样器。 二、【背景技术】
[0002] 随着基因组计划的飞速发展，许多植物的基因组不断测序完成，如水稻、玉米、普 通小麦、西瓜、番茄、马铃馨等。随着基因组测序的完成，科学家们更加广泛、深入的开展了 重要基因的定位、克隆和功能研究。而基因定位需要大量的从植物中提取DNA，进行PCR扩 增。传统的DNA提取方法是借助于研鉢研磨或磨样机将植物样品研磨成粉末，然后再用DNA 提取试剂（如SDS、CTAB和TPS等）或DNA提取试剂盒提取。传统方法的优点是：可W提取高质 量、高浓度的DNA。但亦有明显的缺点，那就是样品仅能单个提取、步骤繁多、提取过程需要 设计数小时。在基因定位特别是精细定位过程中，针对一个基因的定位就需要提取几千乃 至上万个DNA样品。传统的DNA提取需要花费数天甚至数周来提取DNA。然而运些样品在定位 过程中，特别是精细定位过程中，仅需要用到一次或少数几次，就被丢弃。
[0003] 鉴于此，有些科学家发明了 DNA快速提取方法，许多公司更是开发了 DNA快速提取 试剂盒或者是直接PCR提取试剂盒。运些快速方法的共同特点是：用剪刀将样品剪碎放入 200化的96孔PCR板中，置于PCR仪中加热5~10分钟即可完成DNA提取，极大的节约了DNA提 取时间。
[0004] 然而，将样品装到96孔板中的过程中，要用剪刀将每个样品分别剪碎、装入96孔 PC財反的各个加样孔中，非常耗时、费工。将植物样品直接放置的96孔PC財反中，不需要用剪 刀逐个剪碎，采用一种高通量的96孔磨样器将96个样品一次性全部磨碎，可W简化工作程 序，节省大量时间和人力，是一个急需改进的技术问题。 Ξ、
【发明内容】
[0005] 技术问题
[0006] 本实用新型目的为了解决DNA快速提取方法或DNA直接PCR过程中，植物样品需要 先用剪刀逐个剪碎，非常费时、费工的问题，而提供了一种植物叶片DNA高通量快速提取磨 样器。
[0007] 技术方案
[000引一种植物叶片DNA高通量快速提取磨样器，其特征在于，由一个基座和手柄、若干 个磨样头和连接杆构成，磨样器基座为长方体，磨样器基座为热绝缘材料，是用来固定连接 杆和手柄的装置，基座上部与手柄连接，基部下部与连接杆相连，连接杆下部与磨样头连 接。
[0009]所述磨样器各部件的连接方式有两种:一种是磨样头、连接杆、基座和手柄是分别 加工的独立部件，磨样器由磨样头、连接杆、基座和手柄依次通过螺栓连接成；另一种是利 用注射模具诱注系统直接诱注成型的整体部件，磨样器由磨样头、连接杆、基座和手柄依次 自然诱注连接形成。
[0010]所述磨样头是破碎植物叶片的部件，形状为圆锥型、圆台型、球型、球缺型、楠球 型、扁球型、高球型或圆柱型;连接杆为圆柱体，是用来连接磨样头和基座的部件。
[0011 ] 所述磨样头直径为0.2cm~0.28cm;连接杆直径为0.1 cm~0.52cm;连接杆和磨样 头露出基座部分总长度为2cm~10cm。
[0012] 所述磨样头共96个，通过96根连接杆与基座基部连接;其排列方式为8行，12列，相 邻两根连接杆横向间距为0.37cm~0.9cm，相邻两根连接杆纵向间距为0.37cm~0.9cm，与 20化L的96孔PCR板及96孔PCR仪完全匹配。
[0013] 磨样器手柄为手持部分。
[0014] 有益效果
[0015] 本实用新型提供的植物叶片DNA高通量快速提取磨样器可W-步完成96孔PCR板 上所有样品破碎，达到DNA快速提取或直接PCR实验要求，极大节约的磨样时间和人力需求。 同时，磨样器对叶片的破碎效果要好于剪刀裁剪，能得到更碎的样品，因而更有利于DNA提 取，能得到更高浓度的DNA。 四、
【附图说明】
[0016] 图1本实用新型所诉的一种植物叶片DNA高通量快速提取磨样器侧视结构示意图
[0017] 图2本实用新型所诉的一种植物叶片DNA高通量快速提取磨样器俯视结构示意图 [001引图中：1磨样头;2连接杆;3基座;4手柄。 五、
【具体实施方式】
[0019] 植物叶片DNA高通量快速提取磨样器由磨样头1、连接杆2、基座3和手柄4四部分构 成（图1，图2)。其特征在于磨样头1、连接杆2、基座3和手柄4依次连接而成。磨样头1共96个， 通过96根连接杆与基座基部连接（图1，图2)，其排列方式为8行，12列，A-H:横向袖値样头 及其连接杆;Ι-ΧΠ :纵向12列磨样头及其连接杆，与20化L的96孔PCR板及96孔PCR仪完全匹 配(图2)。
[0020] 在使用时，先将样品装入20化L的96孔PCR板中，再将PCR板在液氮中速冻1~2min 后，手持磨样器将磨样头对准96孔PC財反孔，向下按压1至2次，即可将板孔中的样品破碎。其 工作原理是:液氮速冻使叶片变脆，用磨样器按压叶片时，磨样头的压力将叶片破碎。磨样 器对叶片的破碎效果要好于剪刀。
[0021] 下面W水稻叶片来具体说明磨样器使用方法:抽穗期，取水稻剑叶叶片分别置于 200化的96孔PCR板中，置于-20°C冰箱备用。提DNA前，取出装有水稻叶片的96孔PCR板，打开 盖子置于液氮中1~2min，用磨样器按压2次。用8通道移液器向96孔板的每个加样孔中加入 40化PDlBuffeHlYansGen)，盖上盖子后，置于PCR仪中95°C加热lOmin，再用8通道移液器 向96孔板的每个加样孔中加入40化PD2Buffer(化ansGen)。至此，已经完成DNA提取，可进 行后续的PCR反应或将DNA置于4°C或-20°C冰箱备用。PCR按W下体系配制（1化L PCR反应体 系）：反应体系如下：DNA l化，RM3170-F(2.扣M)0.8μL，RM3170-R(2.5μM)0.8化，2X T班打泌iiect?PCR SuperMiX (TransGen)扣L，d地2〇 2.4化。RM3170 引物序列为：RM3170-F: 5 ' -GCCGGTAGATGCAGTATTGC-3' ；RM3170-R:5'-GTGCACAGTCACGCAGAAAG-3' dPCR反应条件为：94 °C预变性5min，94°C变性30s，58°C退火30s，72°C延伸60s，35个循环，最后72°C延伸lOmin。 PCR产物用8. ο % (w/v)的聚丙締酷胺凝胶150V电泳化30min，银染后，即得到清晰的PCR条 带。
【主权项】
1. 一种植物叶片DNA高通量快速提取磨样器，其特征在于，由一个基座和手柄、若干个 磨样头和连接杆构成，磨样器基座为长方体，磨样器基座为热绝缘材料，是用来固定连接杆 和手柄的装置，基座上部与手柄连接，基部下部与连接杆相连，连接杆下部与磨样头连接。2. 根据权利要求1所述的一种植物叶片DNA高通量快速提取磨样器，其特征在于，磨样 器各部件的连接方式有两种:一种是磨样头、连接杆、基座和手柄是分别加工的独立部件， 磨样器由磨样头、连接杆、基座和手柄依次通过螺栓连接成;另一种是利用注射模具浇注系 统直接浇注成型的整体部件，磨样器由磨样头、连接杆、基座和手柄依次自然浇注连接形 成。3. 根据权利要求1或2所述的一种植物叶片DNA高通量快速提取磨样器，其特征在于，磨 样头是破碎植物叶片的部件，形状为圆锥型、圆台型、球型、球缺型、椭球型、扁球型、高球型 或圆柱型;连接杆为圆柱体，是用来连接磨样头和基座的部件。4. 根据权利要求3所述的一种植物叶片DNA高通量快速提取磨样器，其特征在于，磨样 头直径为0.2cm~0.28cm;连接杆直径为0. lcm~0.52cm;连接杆和磨样头露出基座部分总 长度为2cm~10cm 〇5. 根据权利要求1或2所述的一种植物叶片DNA高通量快速提取磨样器，其特征在于，磨 样头共96个，通过96根连接杆与基座基部连接;其排列方式为8行，12列，相邻两根连接杆横 向间距为0.37cm~0.9cm，相邻两根连接杆纵向间距为0.37cm~0.9cm，与200yL的96孔PCR 板及96孔PCR仪完全匹配。6. 根据权利要求3所述的一种植物叶片DNA高通量快速提取磨样器，其特征在于，磨样 头共96个，通过96根连接杆与基座基部连接;其排列方式为8行，12列，相邻两根连接杆横向 间距为0.37cm~0.9cm，相邻两根连接杆纵向间距为0.37cm~0.9cm，与200yL的96孔PCR板 及96孔PCR仪完全匹配。7. 根据权利要求4所述的一种植物叶片DNA高通量快速提取磨样器，其特征在于，磨样 头共96个，通过96根连接杆与基座基部连接;其排列方式为8行，12列，相邻两根连接杆横向 间距为0.37cm~0.9cm，相邻两根连接杆纵向间距为0.37cm~0.9cm，与200yL的96孔PCR板 及96孔PCR仪完全匹配。
【专利摘要】本实用新型涉及一种植物叶片DNA高通量快速提取磨样器，属于生物技术领域。由一个基座和手柄、若干个磨样头和连接杆构成，磨样器基座为长方体，磨样器基座为热绝缘材料，是用来固定连接杆和手柄的装置，基座上部与手柄连接，基部下部与连接杆相连，连接杆下部与磨样头连接。磨样头共96个，通过96根连接杆与基座基部连接；其排列方式为8行，12列，相邻两根连接杆横向间距为0.37cm~0.9cm，相邻两根连接杆纵向间距为0.37cm~0.9cm，与200μL的96孔PCR板及96孔PCR仪完全匹配。本实用新型提供的植物DNA高通量快速提取磨样器可以一步完成96孔PCR板上所有样品破碎，达到DNA快速提取或直接PCR实验要求，极大节约的磨样时间和人力需求。
【IPC分类】C12M1/00
【公开号】CN205170820
【申请号】CN201520956473
【发明人】张所兵, 林静, 张云辉, 宋春凤, 方先文
【申请人】江苏省农业科学院
【公开日】2016年4月20日
【申请日】2015年11月26日