专利名称：一种从制革废皮边角料中提取未变性天然胶原的方法
技术领域：
本发明涉及一种从制革废皮边角料中提取未变性天然胶原的方法，属于制革固体废弃物高附加值转化领域。
背景技术：
据不完全统计，我国每年加工猪、牛等皮革1.7亿张，约产生70万吨的边角料废弃物(不含铬)。其中主要是原皮修边边角料、片灰皮或硝皮产生的边角料。这些固体废弃物是造成皮革工业污染严重的重要因素之一。由于它们的主要成分是胶原蛋白，利用皮边角料提取优质胶原蛋白，深度开发成高附加值产品，不仅可以为制革工业提供了解决固体废弃物污染的途径，更为重要的是，动物质资源的综合开发和高值利用，必将产生巨大的经济、环境和社会效益。
牛皮制革主要采用片灰碱皮技术，因此产生了大量的废灰碱皮边角料。而对于档次比较低的猪皮而言，由于采用硝皮工艺可以提高对胶原纤维的松散作用，使裸皮的厚度差异变小，反绒革起绒好，绒毛细致，所以近几年来，很多猪皮制革都采用了片硝皮工艺，从而产生了大量的废硝皮边角料。(赵令仪猪皮服装革硝皮工艺的利弊分析。四川皮革，1997，29)以牛皮的废灰碱皮边角料和猪皮的废硝皮边角料为原料提取未变性天然胶原可以大大提高这些废弃物的利用价值，变废为宝。
国内外的大量研究显示，皮边角料废弃物主要用于制造胶原的降解产物。在早期阶段，制革厂产生的废灰碱皮边角料多用来制作胶水，它的附加值不高，而且对环境造成了严重的污染，因此逐渐被淘汰。(Purps，Klaus.MASCHINENLEIMLEDER AUS DER LEDERHER STELLUNG.Left bracket Glue Stock fromLeather Production right bracket.Bundesminist Forsch Technol ForschungsberTechnol Forsch Entwickl，1977，754)皮边角料废弃物的综合利用逐渐向较高的附加值领域发展。美国专利报道了用中性或碱性蛋白酶消解原料皮和灰碱皮的皮边角料可以制得明胶(United States Patent4220724)，用戊二醛作为交联剂与明胶反应可以制得食用级的胶原肠衣。用甘油作为可塑剂与明胶混合便可以得到机械性能比较好的凝胶膜，该膜可以用作非食品的包装材料(Taylor，M.M.；Liu，C.K.；Latona，N..Enzymatic modification of hydrolysis productsFrom collagen using a microbial transglutaminase.II.Preparation offilms.JALCA，2002，97(6)225～234)。有关研究也证明了制革厂修边、切削产生的皮边角料是制作胶原基化妆品的原料。(Novel technique for the preparation ofcollagen derivatives for cosmetic-part 1Preparation and characterisation of collagenproducts Ranqanayaki，M.D.；Ranqanathan，T.S.；Jayaraman，K.S..Research andIndustry，1988，33(3)205～210)从制革厂的废皮边角料中得到水解胶原，然后按一定的比例加到聚乙烯醇中，所得薄膜的透水性能和生物降解能力都有所提高。该薄膜更适宜作医用包装袋。(Alexy，P.；Bakos，D.；Crkonova，G.；Kramarova，Z.Poly(vinyl alcohol)-collagen hydrolysate thermoplastic blendsII.Water penetrationand biodegradability of melt extruded films。Polymer Testing，2003，22(7)811～818)国内在皮边角料废弃物的利用方面也由大量的报道。将片灰碱皮产生的边角料经脱钙，酸碱处理后，用多种酶结合降解，然后经分离、浓缩、喷雾干燥后得到食用级的水解胶原蛋白粉(张铭让、林炜、穆畅道等，从皮边角料中提取胶原及其在食品中的应用.四川食品与发酵，2000，361～65)。用不同的单一酶和复合酶水解经过物理和化学方法预处理的皮边角废料，最终得到5种不同分子量分布范围的胶原蛋白多肽样品，其中高分子量胶原多肽适宜作为凝胶剂或保水剂用于制作可食性胶原膜和化妆品面膜。中、低分子量胶原多肽既可直接作为基料用于各种饮料、美容食品和化妆品的生产，又可作为保湿剂、乳化稳定剂和发泡剂。(王碧、贾冬英、罗红平等.皮边角废料提取胶原蛋白的功能特性.中国皮革，2002，31(15)13～16)综上所述，从制革产生的皮边角料废弃物中提取的产物都是水解胶原，它不具有生物活性，附加值不高。未变性天然胶原具有独特的生物相容性、生物降解性和低抗原性，在烧伤、创伤、硬组织修复方面有很大的应用前景。(ChiH.Lee，Anuj Singla and Yugyung Lee，Biochemical application of collagen，InternationJournal of Pharmaceutics，2001，2211-22)因此从皮边角料废弃物中提取未变性天然胶原可以大大提高它的利用价值。
发明内容
本发明的目的是针对现有技术的不足提供一种从制革废皮边角料中提取未变性天然胶原的方法。其特点是用有机溶剂和非离子表面活性剂脱除猪片硝皮边角料中的脂肪，用脱钙液脱除牛片灰碱皮边角料中的钙，于低温和酸性条件下用蛋白酶提取获得未变性天然胶原。
本发明的目的由以下技术实现，其中所述原料份数除特殊说明外，均为重量份数。
从制革废皮边角料中提取未变性天然胶原的方法1、原料的预处理将猪片硝皮边角料，绞碎，取100份，用2-5份的30-35℃的温水洗3-5次，用与水以任意比例混合的非离子表面活性剂5-15份溶液中浸泡3-6小时，重复两次，过滤，用10-50份的有机溶剂中搅拌处理12-24小时，过滤，所得沉渣作为提取原料，备用；或将牛片灰碱皮边角料，绞碎，取100份，用碱溶液调节pH＝8-12使皮溶胀24-48小时，用浓度为15-60g/L，溶液pH＝8-12的H2O2漂白3-8小时，再用150-250份的脱钙液脱钙24-48小时，自来水充分掏洗，过滤得沉渣，备用；2、未变性天然胶原的提取将上述已预处理的原料100份，加入蛋白酶0.5-3份，用酸调节pH＝2-4，于温度4-6℃搅拌1-3天，得到未变性天然胶原蛋白液。
3、未变性天然胶原的纯化将上述胶原蛋白液，用16000-20000rpm高速离心机分离，除去滤渣，上层清液加入0.5-3MNaCl盐析，所得沉淀经离心分离后用0.1-2M乙酸溶解，如此反复盐析处理2次，再经膜透析处理，获得5-8％未变性天然猪皮或牛皮胶原蛋白液。
有机溶剂为异丙醇、乙二醇乙醚或丙酮中的任一种。
非离子表面活性剂为脂肪酸聚氧乙烯醚或烷基酚聚氧乙烯醚中的任一种。
脱钙液为0.1-1.0M EDTA脱钙液或0.2-1.2MHCl脱钙液中的任一种。
蛋白酶为胃蛋白酶、537蛋白酶或真菌复合酶中的任一种。
制得的未变性天然胶原用粘度法测其变性温度，测试结果详见图1和图2，结果表明猪皮未变性天然胶原的变性温度为32-39℃，牛皮未变性天然胶原的变性温度为35-40℃。用SDS-PAGE测试胶原蛋白的分子量及其分布，结果详见图3。所得未变性天然胶原可以用于高级美容化妆品和保健品领域。
本发明具有如下优点1.发明在降低制革固废物污染的同时，找出了一条制革废皮边角料的高附加值利用途径。
2.本发明用有机溶剂和非离子表面活性即脱除猪皮硝皮边角料中的脂肪；用脱钙液脱除牛皮片灰碱皮边角料中的钙；在酸性条件下于温度4-6℃用蛋白酶提取获得未变性天然胶原。
3.本发明制得的天然胶原不同于水解胶原，它具有独特的生物相容性、生物降解性和低抗原性，在食品、化妆品、生物工程等领域有广阔的应用前景。
图1为猪皮胶原的折算粘度(F)-温度(T)2为牛皮胶原的折算粘度(F)-温度(T)3猪皮胶原的SDS-PAGE电泳图，其中M为标准样品，1为猪皮胶原，2为牛皮胶原具体实施方式
下面通过实施例对本发明进行具体描述，有必要在此指出的是本实施例只用于对本发明进行进一步说明，不能理解为对本发明保护范围的限制，该领域的技术熟练人员可以根据上述本发明的内容作出一些非本质的改进和调整。
实施例1取猪片硝皮渣，绞碎，用30-35℃的温水洗3次，取碎屑100g，加入由脂肪酸聚氧乙烯醚2g、烷基酚聚氧乙烯醚3g配成的溶液浸泡3小时，温度为32℃，过滤后加入异丙醇10g常温振荡24小时，过滤。用酸调节pH＝2，加入胃蛋白酶2g，于温度4-6℃搅拌24小时。离心除去滤渣，上清液中加入0.7M的NaCl盐析，用0.5M乙酸溶解沉淀，如此反复盐析1次，再经膜透析处理，得到浓度为5％的未变性天然猪皮胶原溶液约600g。
实施例2取猪片硝皮渣，绞碎，用30-35℃的温水洗3次，取碎屑100g，放入由脂肪酸聚氧乙烯醚10g、烷基酚聚氧乙烯醚5g配成的溶液中浸泡24小时，温度为34℃，过滤后加入丙酮50g常温振荡48小时，过滤。用酸调节pH＝4，加入537蛋白酶5g，于温度4-6℃搅拌48小时。离心除去滤渣，上清液中加入2.1M的NaCl盐析，用1.0M乙酸溶解沉淀，如此反复盐析3次，再经膜透析处理，得到浓度为8％的未变性天然猪皮胶原溶液约600g。
实施例3取牛片灰碱皮边角料，绞碎，取100g，用2M NaOH溶液调节pH＝8使皮溶胀24小时，用浓度为30g/L溶液pH＝8的H2O2漂白3小时，再用200g0.5M EDTA脱钙液脱钙24小时，自来水充分掏洗，过滤得沉渣，用酸调节pH＝2.5，加入胃蛋白酶2g，于温度4-6℃搅拌24小时。离心除去滤渣，上清液中加入0.7M的NaCl盐析，用0.5M乙酸溶解沉淀，得到浓度为5％的牛皮未变性天然胶原溶液约600g。
实施例4取牛片灰碱皮边角料，绞碎，取100g，用2M NaOH溶液调节pH＝12使皮溶胀48小时，用浓度为60g/L溶液pH＝10的H2O2漂白8小时，再用250g的1.0M HCl脱钙液脱钙48小时，自来水充分掏洗，过滤得沉渣，用酸调节pH＝3，加入537蛋白酶5g，于温度4-6℃搅拌48小时，离心除去滤渣，上清液中加入2.1M的NaCl盐析，用0.5M乙酸溶解沉淀，得到浓度为8％的牛皮未变性天然胶原溶液约650g。
权利要求
1.一种从制革废皮边角料中提取未变性天然胶原的方法，其特征在于该方法包括以下步骤(1)原料的预处理将猪片硝皮边角料，绞碎，取100重量份，用2-5重量份的30-35℃的温水洗3-5次，用与水以任意比例混合的非离子表面活性剂5-15重量份溶液中浸泡3-6小时，重复两次，过滤，用10-50重量份的有机溶剂中搅拌处理12-24小时，过滤，所得沉渣作为提取原料，备用；或将牛片灰碱皮边角料，绞碎，取100重量份，用碱溶液调节pH＝8-12使皮溶胀24-48小时，用浓度为15-60g/L溶液pH＝8-12的H2O2漂白3-8小时，再用150-250重量份的脱钙液脱钙24-48小时，自来水充分掏洗，过滤得沉渣，备用；(2)未变性天然胶原的提取将上述已预处理的任意一种原料100重量份，加入蛋白酶0.5-6重量份，用酸调节pH为2-4，于温度4-6℃搅拌1-3天，得到未变性天然胶原蛋白液；(3)未变性天然胶原的纯化将上述胶原蛋白液，用16000-20000rpm高速离心机分离，除去滤渣，上清液中加入0.5-3M的NaCl盐析，沉淀经离心分离后用0.1-2M乙酸溶解，如此反复盐析1-3次，再经膜透析处理，获得5-8％未变性天然猪皮或牛皮胶原蛋白液。
2.如权利要求1所述从制革废皮边角料中提取未变性天然胶原的方法，其特征在于有机溶剂为异丙醇、乙二醇乙醚或丙酮中的任一种。
3.如权利要求1所述从制革废皮边角料中提取未变性天然胶原的方法，其特征在于非离子表面活性剂为脂肪酸聚氧乙烯醚或者烷基酚聚氧乙烯醚。
4.如权利要求1所述从制革废皮边角料中提取未变性天然胶原的方法，其特征在于脱钙液为0.1-1.0M EDTA或者0.2-1.2M HCl中的任一种。
5.如权利要求1所述从制革废皮边角料中提取未变性天然胶原的方法，其特征在于蛋白酶为胃蛋白酶、537蛋白酶或真菌复合酶中的任一种。
6.如权利要求1所述方法制备得到未变性天然胶原。
全文摘要
一种从制革废皮边角料中提取未变性天然胶原的方法，其特点是按重量份将猪片硝皮边角料100份，用2－5份的30－35℃的水洗3－5次，用非离子表面活性剂5－15份溶液浸泡3－6小时，重复两次，过滤，用10－50份的有机溶剂处理12－24小时，过滤得沉渣；或将牛片灰碱皮边角料100份，用碱调节pH＝8－12使皮溶胀24－48小时，用浓度为15－60g/L溶液pH＝8－12的H
文档编号C09H3/00GK1948412SQ200610022188
公开日2007年4月18日 申请日期2006年11月6日 优先权日2006年11月6日
发明者李国英, 赵帅, 李 东, 李洋 申请人:四川大学