一种栀子提取物及其制备方法
【专利摘要】本发明提供了栀子的提取方法，它包括如下操作步骤：取栀子，加水，减压条件下，于50℃沸腾提取，合并提取液，即可。本发明还提供了栀子提取物及其制备方法。本发明还提供了栀子提取物的检测方法。本发明栀子提取物能在低温沸腾动态条件下提取，提高提取物中西红花苷Ⅰ含量，降低其他杂质溶出量，提取物质量提高。本发明检测方法，能够有效将栀子提取物中的多个成分有效分离，峰形良好，基线平稳，为栀子提取物的质量控制提供了可靠的基础。
【专利说明】一种栀子提取物及其制备方法
【技术领域】
[0001]本发明涉及一种桅子提取物，属药物制剂领域。
【背景技术】
[0002]桅子为菌草科植物Gardenia jasminoides Ellis的干燥成熟果实,为临床常用中药材，内服具有泻火除烦、清热利湿、凉血解毒，外用具有消肿止痛等功效。
[0003]桅子含有环烯醚萜苷类化合物(如环烯醚萜苷)、萜类苷(如西红花苷类)和有机酸类等活性成分。其中，西红花苷类成分包括西红花酸、西红花苷1、西红花苷II和西红花苷III等，是桅子和名贵中药材西红花共同含有的化合物，具有抑制肿瘤细胞生长、治疗心血管疾病、保护肝肾等药理作用。西红花为鳶尾科植物番红花Crocus sativus L的干燥柱头，药材产量低，因而价格非常昂贵。而桅子药材中西红花苷类成分含量较高，且桅子药材产量高、价格便宜，是获取西红花苷类成分的不错途径。
[0004]西红花苷类还是桅子黄色素的主要成分，桅子黄色素是从桅子中提取的自然界唯一存在的水溶性类胡萝卜素类天然色素。具有着色力强、色泽鲜艳、稳定性好、无毒副作用、安全性能高等优点，在国际市场颇受欢迎，广泛用于食品、饮料、医药、日用化工等方面。
[0005]由于西红花苷类成分对光和热不稳定，桅子药材中西红花苷类多采用温浸法提取，提取时间长、效率低。若能够提供一种从桅子中可有效提取西红花苷、且杂质含量少的提取方法，将能够为降低西红花苷类成分的成本带来可能。
【发明内容】
[0006]本发明的技术方案是提供了一种西红花苷类成分含量较高的桅子提取物，本发明的另一技术方案是提供了桅子提取物的制备方法。
[0007]本发明提供了桅子的提取方法，它包括如下操作步骤:取桅子，加水，减压条件下，于50±5°C沸腾提取，合并提取液，即可。
[0008]上述提取温度，优选50 V。
[0009]其中，加水量为桅子干重的5~15倍,优选10倍量。
[0010]其中，提取I~3次，每次0.5~3h，优选提取3次，每次1.5h。
[0011]本发明中所述的沸腾提取，即在减压条件下，使得水在相应的提取温度下达到沸腾状态，在此温度和压力条件下进行提取，其中，真空压力以满足在某一温度条件下保证水沸腾为基准。
[0012]本发明还提供了一种桅子提取物的制备方法，它包括如下操作步骤:
[0013](I)按上述方法提取；
[0014](2)取步骤(1)的提取液，减压回收溶剂、冷冻干燥后，即得桅子提取物。
[0015]其中，所述减压回收溶剂的条件为:-0.05~-0.095MPa、40~90°C ;优选50°C。
[0016]本发明还提供了一种桅子提取物，所述桅子提取物含有0.5~5%的西红花苷I。
[0017]进一步地，所述桅子提取物的制备方法如上所述。[0018]本发明还提供了上述桅子提取物的检测方法，它是以高效液相色谱法进行测定的，具体操作步骤如下:
[0019](I)取待测桅子提取物，制备供试品溶液；
[0020](2)将供试品溶液注入高效液相色谱仪中，检测即得，其色谱条件如下:
[0021 ] 色谱柱:十八烷基键合硅胶为固定相；
[0022]流动相:乙腈A-水B，梯度洗脱，洗脱程序A:0minl0%, 10minl8%, 25min27%,31min28%,35min30%,45min33%,55min38%,60min43% ； [0023]检测波长:240±5nm。
[0024]进一步地，步骤(1)中，以甲醇为溶剂或稀释剂，制备供试品溶液。
[0025]进一步地，所述高效液相色谱法中，以桅子苷、西红花苷I中的一种或两种为对照品，制备对照品溶液。
[0026]进一步地,检测柱温为30±5°C。
[0027]采用该方法，制得的桅子提取物中西红花苷I含量远高于高温回流提取物，其他成分和杂质含量低于高温回流提取物，西红花苷I纯度大于高温回流提取物。
[0028]较温浸法而言，本发明采用低温沸腾动态提取桅子西红花苷类成分，缩短了提取时间，提高了提取效率。较高温提取法而言，适宜低温提取既保证了西红花苷类成分的最大溶出，还防止其在高温下被分解破坏，最大限度的提取出了桅子中的西红花苷类成分；同时，由于低温，杂质及其他成分溶出量减少，使西红花苷类成分被高效地从桅子中被分离出来的同时，降低了提取液中杂质和其他成分的含量，有利于后续的分离纯化工艺，提高了产品品质和附加值。
[0029]本发明检测方法，能够有效将桅子提取物中的多个成分有效分离，峰形良好，基线平稳，为桅子提取物的质量控制提供了可靠的基础。
【专利附图】
【附图说明】
[0030]图1:西红花苷I色谱图
[0031]图2:桅子提取液Zeta电位图
[0032]图3:桅子提取液纳米粒径分布图
[0033]图4:桅子提取液指纹图谱色谱图
[0034]图5:10批桅子提取液指纹图谱叠加图
[0035]图6:桅子提取物粒径分布
[0036]图7:桅子提取液吸湿百分率曲线
[0037]图8:10批桅子提取物指纹图谱叠加图
【具体实施方式】
[0038]实施例1本发明提取方法
[0039]取桅子，加10倍量水，减压条件下，于50°C沸腾提取3次，每次1.5h，合并提取液，即可。
[0040]实施例2桅子提取方法的考察
[0041]I仪器与试药[0042]Agilentl200高效液相色谱仪系列(美国Agilent公司);Mettler AE240十万分之一电子天平(德国Mettler公司)；FA1104万分之一电子天平(上海天平仪器厂)；KQ3200型超声清洗器(昆山市超声仪器有限公司);SHZ-D (III)循环水式真空泵(巩义市予华仪器有限责任公司)；恒温水浴锅(北京中兴伟业仪器有限公司)；RE-2000型旋转蒸发仪(上海亚荣生化仪器厂)，ALPHA1-4LSC冷冻干燥器(CHRIST公司)，PHS_3E型PH计(上海精密科学仪器有限公司)；Malvern纳米粒度仪(型号Nano-ZS)。
[0043]桅子药材(四川科伦天然药业有限公司)；桅子苷对照品(批号:110749-200714，中国药品生物制品检定所)；西红花苷I对照品(批号:MUST-12073006，成都曼斯特生物科技有限公司)；乙腈为色谱纯(费歇尔)，水为重蒸水(自制)，其他试剂均为分析纯。
[0044]2西红花苷I含量测定方法学的建立
[0045]色谱条件色谱柱:AgilentTC_C18(4.6X 250mm, 5 μ m);流动相:甲醇-水(52:48);洗脱时间20min,检测波长为440nm ;流速为1.0mL.mirT1 ;柱温为35°C。
[0046]对照品溶液的制备精密称取西红花苷I对照品9.84mg,于100mL量瓶中，甲醇溶解，即得98.4 μ g.mL-1西红花苷I对照品储备液；精密吸取西红花苷I对照品储备液5ml于IOml量瓶中，甲醇定容，即得49.2 μ g.mL—1西红花苷I对照品溶液。
[0047]供试品溶液的制备精密称取桅子粉末0.lg，精密加入75%甲醇溶液30mL，称重，超声30min，放冷，再称定重量，用75%甲醇补足减失的重量，摇匀，滤过，取续滤液适量，
0.45 μ m微孔滤膜滤过，即得供试品溶液。
[0048]线性范围试验取已配制好的西红花苷I对照品溶液(49.2μ g.mL—1)，分别精密进样2、4、8、16、20μ 1，照上述色谱条件测定峰面积积分值，并记录，以峰面积值(A)为纵坐标，进样量(C)为横坐标，绘制标准曲线，得回归方程:y=28.223x+9.4667 (r=0.9996)。结果表明，在西红花苷I含量为98.4μ g~984.0yg范围内，线性关系良好,可用于含量测定。
[0049]精密度试验按“供试品溶液的制备”制备供试品，取IOul注入液相色谱仪，连续进样6次，记录峰面积，计算RSD为1.14%，表明该法精密度良好。
[0050]稳定性试验取精密度实验样品，分别于0h、2h、4h、6h、8h进样10ul，记录峰面积，计算RSD为1.46%，表明供试品在8h内稳定性良好。
[0051]重复性试验取桅子粗粉，按“供试品溶液的制备”制备6份供试品，各取IOul注入液相色谱仪，记录峰面积，计算RSD为1.77%，表明该法重复性良好。
[0052]回收率试验精密称取桅子粉末0.05g,精密加入49.2 μ g.mL—1对照品溶液15mL，按“供试品溶液的制备”制备样品6份，精密吸取10 μ L，注入液相色谱仪，计算出西红花苷I含量和回收率。结果平均回收率为99.53%，RSD为2.89%，表明该法回收率符合要求，可用于含量测定，见图1。
[0053]桅子药材中西红花苷I含量测定取桅子粉末(过4号筛)0.lg，精密称定，置具塞锥形瓶中，精密加入75%甲醇30ml，称定重量，超声处理30min，放冷，再称定重量，用溶剂补足减失的重量，摇匀，滤过，取续滤液测定西红花苷I含量，为1.47%。
[0054]3正交试验设计
[0055]采用L9(34)正交表对提取时间、提取次数、溶剂用量进行试验设计，称取桅子粗粉30g,于低温50°C沸腾条件下，按正交试验设计进行试验，制备提取液，并测定西红花苷I含量，结果如下:[0056]表1正交试验结果
[0057]
【权利要求】
1.桅子的提取方法，其特征在于:它包括如下操作步骤:取桅子，加水，减压条件下，于50 ± 5 °C沸腾提取，合并提取液，即可。
2.根据权利要求1所述的提取方法，其特征在于:加水量为桅子干重的5~15倍，优选10倍量。
3.根据权利要求1所述的提取方法，其特征在于:提取I~3次，每次0.5~3h，优选提取3次,每次1.5h。
4.一种桅子提取物的制备方法，其特征在于:它包括如下操作步骤: (O按权利要求1-3任意一项所述方法提取； (2 )取步骤(1)的提取液，减压回收溶剂、冷冻干燥后，即得桅子提取物。
5.根据权利要求4所述桅子提取物的制备方法，其特征在于:所述减压回收溶剂的条件为:-0.05 ~-0.095MPa、40 ~90°C ;优选 50±5°C。
6.权利要求4或5制备的桅子提取物，其特征在于:所述桅子提取物含有0.5~5%的西红花苷I。
7.桅子提取物的检测方法，其特征在于:它是以高效液相色谱法进行测定的，具体操作步骤如下: (1)取待测桅子提取物，制备供试品溶液； (2)将供试品溶液注入高效液相色谱仪中，检测即得，其色谱条件如下: 色谱柱:十八烷基键合硅胶为固定相； 流动相:乙腈 A-水 B,梯度洗脱,洗脱程序 A:0minl0%, 10minl8%, 25min27%, 31min28%,35min30%,45min33%,55min38%,60min43% ； 检测波长:240±5nm。
8.根据权利要求7所述的检测方法，其特征在于:步骤(1)中，以甲醇为溶剂或稀释剂，制备供试品溶液。
9.根据权利要求7所述的检测方法，其特征在于:所述高效液相色谱法中，以桅子苷、西红花昔I中的一种或两种为对照品，制备对照品溶液。
10.根据权利要求7所述的检测方法，其特征在于:检测柱温为30±5°C。
【文档编号】C09B67/54GK104013703SQ201410070145
【公开日】2014年9月3日 申请日期:2014年2月28日 优先权日:2013年2月28日
【发明者】韩丽, 杨明, 黄娟, 张定堃, 杨秀梅, 陈晓东 申请人:成都中医药大学