一种不对称菁染料化合物及其应用的制作方法
【专利摘要】本发明提供了一种不对称菁染料化合物(I)，及其作为淬灭剂的应用。本发明提供的不对称菁染料的荧光淬灭剂化合物，可有效淬灭ROX通道的荧光，同时可以对稳定DNA双链，使PCR过程中解链温度增加2～3℃，不但可以应用于常规的实时荧光定量PCR检测方法，而且可以有效地使用在针对单核苷酸多态性分析领域。
【专利说明】一种不对称菁染料化合物及其应用 (一）
【技术领域】
[0001] 本发明涉及一种不对称菁染料化合物，及其作为荧光淬灭剂尤其是R0X通道荧光 淬灭剂的应用。 (二）
【背景技术】
[0002] 核酸杂交技术是分子生物学的基本技术之一，可以用来对遗传疾病进行诊断，人 体鉴定，微生物鉴定，亲子鉴定，近年来正逐渐用于病毒的特异，敏感和快速诊断。
[0003] 核酸杂交技术一个很重要的方面是对杂交的探测，一个经常使用的工具是荧光寡 核苷酸探针，一种特别有用的荧光探针类型是自淬灭探针，此探针包括了报告染料和淬灭 染料，二者之间通过荧光共振能量转移（FRET)过程发生作用。尽管使用该基序的不同探针 的设计可能在细节上存在差异，FRET探针含有连接到寡核苷酸上的荧光团和淬灭剂。
[0004] 实时荧光定量PCR技术通过检测PCR产物中荧光信号强度来达到定量的目的，该 技术不仅实现了 PCR从定性到定量的飞跃，而且与常规PCR相比，它具有特异性更强、有效 解决PCR污染问题、自动化程度高等特点，目前已在动植物基因工程，微生物和医学领域中 得到广泛应用。
[0005] 荧光染料广泛用于生物学研究和诊断，荧光染料优于常规的放射性材料，因为荧 光染料通常具有足够的检测灵敏度，廉价并且无毒，具有可区分颜色范围的各种荧光团使 得能平行检测多种生物学靶标的多重实验更加可行，在体外和体内描述不同生物学靶标之 间在空间和时间上的关系常要求能平行显示多个靶标。此外，大量荧光染料为进行高通量 和自动化试验打开了新的通道。
[0006] R0X荧光染料现有技术中一般用于调整PCR加样误差所引起的PCR管与管之间的 差异，目前还未有R0X通道淬灭剂被广泛使用。 (三）
【发明内容】
[0007] 本发明的目的是提供新的淬灭剂，其具有低背景信号和/或高淬灭功效。本发明 提供一种不对称菁染料的荧光淬灭剂化合物，可有效淬灭R0X的荧光。
[0008] 本发明采用的技术方案是：
[0009] -种不对称菁染料化合物，其结构如式（I)所示：
[0010]
【权利要求】
1. 一种不对称菁染料化合物，其结构如式（I)所示：
式⑴中： 札为-Η、-N02、-0H或C1?C4烷基； R2为-H、C1?C4烷基、苯基或卤素取代苯基； R3、R4为-H、C1?C4烷基或活性基团，并且R3、R4中至少一个为活性基团。
2. 如权利要求1所述的化合物，其特征在于，所述活性基团为下列之一：羧酸，羧酸的 丁二酰亚胺酯，肼，胺，马来酰亚胺，亚磷酰胺。
3. 如权利要求1所述的不对称菁染料化合物，其特征在于所述化合物为下列之一：
4. 权利要求1所述的不对称菁染料化合物作为荧光淬灭剂的应用。
5. 如权利要求4所述的应用，其特征在于所述淬灭剂为ROX通道淬灭剂。
【文档编号】C09B23/06GK104059376SQ201410311061
【公开日】2014年9月24日 申请日期:2014年7月1日 优先权日:2014年7月1日
【发明者】方维佳, 郑怡 申请人:浙江大学