噻唑橙衍生物及其制备方法和作为双螺旋核酸荧光分子探针的应用
【技术领域】
[0001] 本发明属于医药技术领域，涉及噻唑橙衍生物及其制备方法和作为双螺旋核酸荧 光分子探针的应用。
【背景技术】
[0002] 噻唑橙类（ThiazolOrangeT0)菁染料，具有摩尔消光系数大、荧光性能良好、与 核酸结合后荧光效率增大、最大吸收波长可调谐范围大、易于合成等优点，其主体部分是由 噻唑和喹啉通过甲川基而连接在一起。在没有核酸的情况下，桥链两端的苯并噻唑环和喹 啉环之间自由转动，故无荧光。而当有核酸存在时，T0分子与核酸的大沟槽结合后，其自由 转动受到限制，导致荧光强烈增强。
[0003] 噻唑橙类菁染料在与双螺旋核酸结合前后荧光的明显差异，提高了检测的灵敏 度，减少了标记过程中除去游离染料的复杂步骤。这种荧光探针染料由于其标记速度快、接 近生理pH条件、对生物分子的功能活性影响小。
【发明内容】
[0004] 本发明所解决的技术问题是提供一种噻唑橙衍生物，通过改进噻唑橙菁染料的结 构、优化其制备方法，使得到的衍生物具有明显提高响应的灵敏度的优点。本发明不改变菁 染料的母体结构，对喹啉环N上取代基进行改造，增大了探针与双螺旋核酸的结合能力，
[0005] 本发明所述的噻唑橙衍生物，其化学结构通式为：
[0006]
[0007] 式中X:0、S
【主权项】
1. 噻唑橙衍生物，其化学结构通式为：
式中X :o、s Y :卤素 R1 :氢、C1-C4烷基、二甲胺基C1-C4烷基 R2 :氢、C1-C4烷基、氨基、C1-C4烷基胺基、二（C 1-C4烷基）胺基。
2. 权利要求1的噻唑橙衍生物，其中： Y 为 Cl、Br、I。
3. 权利要求1或2的噻唑橙衍生物，其中， R1为氢、C1-C4烷基、二甲胺基C1-C 4烷基，优选氢、甲基、二甲胺基乙基、二甲胺基丙 基、二甲胺基丁基。
4. 权利要求1、2或3的噻唑橙衍生物，其中， R2为氢、C1-C4烷基、氨基、C1-C 4烷基胺基、二（C1-C4烷基)胺基、，优选氢、甲基、胺基、二 甲胺基、二乙胺基。
5. 权利要求1-4任何一项所述的噻唑橙衍生物，其中： X为S。
6. 权利要求1的噻唑橙衍生物，选自：
7. 如权利要求6所述噻唑橙衍生物的制备方法，其特征在于包括以下步骤： (1) 溴乙酸和4-甲基喹啉在乙酸乙酯中反应，搅拌，再过滤，用乙醚洗涤滤饼后干 燥，得到化合物A:
(2) 取2-巯基苯并噻唑于％ 二甲基甲酰胺溶液中，再加入碘甲烷，上述混合体 系于90°C下反应，反应完毕，冷却，抽滤，用乙腈洗涤后干燥得化合物B:
取化合物A和化合物B，置于圆底烧瓶中，向其中加入甲醇、DMF和三乙胺，反应，反应完 毕，抽滤，滤饼用少量甲醇洗涤后干燥，得化合物C:
(4)取DMF于鸡形瓶中，加入化合物C、HBTU与DIEA，先将上述体系于室温下搅拌，再向 上述体系中加入胺基取代物，室温下搅拌反应，TLC跟踪至反应结束，将该反应体系倒入乙 醚中，收集不溶物，将不溶物加适量甲醇溶解，硅胶柱层析提纯，其中氯仿/甲醇=5 / 5， 得！'0衍生物1'01^、1'00队1'(?4，其中氯仿/甲醇40:4(￥/￥)得1'0衍生物1'(?0。
8. 权利要求1-6任何一项所述的噻唑橙衍生物在制备荧光分子探针中的应用。
9. 根据权利要求8所述的应用，其特征在于，所述的荧光分子探针与双螺旋核酸选择 性结合。
10. 根据权利要求8所述的应用，其特征在于，荧光分子探针的最小检测浓度为 0· 01 μ Mo
【专利摘要】本发明属于医药技术领域，涉及 噻唑橙衍生物及其制备方法和作为双螺旋核酸荧光分子探针的应用。本发明在不改变噻唑橙（ThiazolOrangeTO）的母体结构前提下，在其喹啉环N原子上引入不同的取代基，制备了一系列衍生结构，其结构通式如下，其中X：O、S，Y：卤素，R1：氢、C1-C4烷基、二甲胺基C1-C4烷基，R2：氢、C1-C4烷基、氨基、C1-C4烷基胺基、二（C1-C4烷基）胺基。结果表明，改造后的分子与双螺旋DNA的结合性能得到了提高，其荧光响应的灵敏度也获得了增强。
【IPC分类】C09K11-06, C07D417-06, G01N33-52, C12Q1-68, C07D413-06, G01N21-64, C09B23-04
【公开号】CN104650609
【申请号】CN201310595094
【发明人】杨鹏, 周雪, 陈俭辉, 简勇, 李刚, 邓拓
【申请人】沈阳药科大学
【公开日】2015年5月27日
【申请日】2013年11月22日