一株弯曲假单胞菌及其应用的制作方法
【专利摘要】本发明公开了一株弯曲假单胞菌及其应用，本发明分离得到弯曲假单胞菌PQ01，其在厌氧条件下能够氧化降解百草枯，PQ01对难降解卤素化合物DDT和四溴双酚A亦具有良好的降解能力，且其电子利用谱广，在有机污染土壤修复及废水处理领域具有良好的应用前景。
【专利说明】一株弯曲假单胞菌及其应用
【技术领域】
[0001]本发明涉及环境微生物【技术领域】，特别涉及一株分离于土壤的具有百草枯厌氧降解特性的弯曲假单胞菌iPseudomonas geniculata PQOI)及其应用。
【背景技术】
[0002]百草枯(Paraquat，PQ)是一种速效触杀型灭生性除草剂，对大多数单子叶和双子叶植物有很强的破坏作用，广泛用于免耕种植、快速轮作、直播水稻等农林生产中，用量仅次于除草剂草甘膦。百草枯在土壤中长期残留，半衰期长达644天，且PQ具有很强的环境毒性，如:干扰土壤酶活性、影响鱼蛙免疫系统、抑制土壤中微生物群落结构等，长期残留PQ造成的环境污染已不容忽视。因此，PQ的降解与残留控制受到业内广泛关注。
[0003]百草枯在土壤中的转化以微生物降解为主。土壤中存在百草枯耐受菌群，这类菌能以百草枯为唯一碳源或氮源，或以共代谢形式进行呼吸代谢，并且目前已从土壤中分离得到百草枯好氧降解菌株，如真菌Neocosmospora basinfec ia、酵母菌Zipomycesstarkeyi。厌氧湿热土壤中百草枯的转化速率较好氧转化快,且以微生物降解为主,但纯培养的厌氧百草枯降解菌尚未见报道。目前尚无利用弯曲假单胞菌降解百草枯的文献报道。
【发明内容】
[0004]本发明的目的在于提供一株弯曲假单胞菌及其应用。
[0005]本发明所采取的技术方案是:
本发明提供的弯曲假单胞菌iPsoudomorms geniculata )PQOI,于2014年3月26日保藏于位于湖北武汉市武汉大学的中国典型培养物保藏中心，保藏中心给予该菌株的保藏号为 CCTCC NO: M 2014107，建议的分类命名为 Aewi/offioaas geniculata PQOl0
[0006]本发明从多年使用百草枯的蔬菜地土壤中富集分离得到弯曲假单胞菌(.Pseudomonas) PQOI,其在厌氧条件下能够氧化降解百草枯，PQOl对难降解齒素化合物DDT和四溴双酚A亦具有良好的降解能力，且其电子利用谱广，在有机污染土壤修复及废水处理领域具有良好的应用前景。
【专利附图】
【附图说明】
[0007]图1是弯曲假单胞菌PQOl的16S rRNA系统发育树；
图2是PQOl利用不同电子供体还原AQDS的效果图；
图3是PQOl利用蔗糖为电子供体还原针铁矿的效果图；
图4是PQOl厌氧降解DDT和四溴双酚A的效果图。
【具体实施方式】
[0008]下面结合具体实施例，进一步阐述本
【发明内容】
。
[0009] 弯曲假单胞菌PQOl的富集与分离:1)取5g 土壤样品(取自多年使用百草枯的蔬菜地)于IOOmL厌氧液体培养基中，每升培养基中含200mg百草枯标准品(纯度> 98%)、0.412g AQDS (蒽醌-2，6- 二苯磺酸，电子受体，腐殖质模式物)、2.5g NaHCO3^0.25g NH4CU0.68g NaH2PO4.2Η20、0.Ig KCl,10.0mL维生素储备液、10.0mL微量元素储备液。其中，维生素溶液是每升去离子水中含5.0mg叶酸、0.2mg维生素B6、6.5mg维生素Β2、3.0mg维生素BlUOmg烟酰胺、Img泛酸钙、0.2mg维生素B12、2.0mg维生素H ;微量元素溶液是每升去离子水中含1.6g乙二胺四乙酸、3.0gMgSO4.7Η20、0.5g MnSO4.Η20、1.0g NaCl、0.1g CoCl2.6Η20、0.Ig CaCl2,0.01g CuSO4.5Η20、
0.01g AlK(SO4)2.12Η20、0.01g H3BO3>0.025g Na2MoO4.2Η20。向上述土壤-培养基体系中鼓充高纯氮气20分钟排氧，充气完毕立即盖橡胶盖并加压铝盖密封，30°C静置避光培养，观察培养液的颜色变化情况；
2)当培养液颜色由无色变为橙色直至不再变化时，以10%的接种量转接富集培养三
次；
3)最后一次富集培养液变为橙色后，进行适当稀释后均匀涂布于YPG固体培养基上(NaCl 5 g/L，牛肉浸膏3 g/L，细菌学蛋白胨5 g/L，酵母提取粉5 g/L，琼脂粉15-20 g/L)，30°C培养48h，挑取单菌落进行单菌落分离与纯化；
4)将纯化得到的单菌落重新接到新鲜的厌氧液体培养基中，静置厌氧培养。
[0010]弯曲假单胞菌PQOl的形态、生理生化及分子生物学特征:
I)菌体形态特征
光学显微镜下观察，该菌株为革兰氏阴性菌，直杆状。
[0011]2)菌落形态特征
在pH为8.0的YPG琼脂固体培养基平板上30°C好氧培养48小时后，菌落湿润，表面光滑，半透明，边缘整齐，菌落直径为2~3mm。
[0012]3)生理生化特征
非发酵、兼性厌氧；生长温度范围25~37°C、pH范围5~8、NaCl%范围O~5 ;其他生理生化特征见表1。
[0013]表1弯曲假单胞菌PQOl的生理生化特性
【权利要求】
1.一株弯曲假单胞菌，其保藏编号为CCTCC NO: M 2014107。
2.保藏编号为CCTCCNO: M 2014107的弯曲假单胞菌在降解百草枯中的应用。
3.保藏编号为CCTCCNO: M 2014107的弯曲假单胞菌在铁氧化物还原、腐殖质还原中的应用。
4.保藏编号为CCTCCNO: M 2014107的弯曲假单胞菌在降解DDT、四溴双酚A中的应用。
【文档编号】C02F101/38GK103952342SQ201410151465
【公开日】2014年7月30日 申请日期:2014年4月16日 优先权日:2014年4月16日
【发明者】武春媛, 陈珊珊, 李勤奋, 邓晓 申请人:中国热带农业科学院环境与植物保护研究所