专利名称：一种双水相萃取提取柿叶黄酮类物质的方法
技术领域：
本发明涉及一种双水相萃取提取柿叶黄酮类物质的方法。
背景技术：
柿叶是柿树的新鲜或干燥叶片。作为药用始载于明《滇南本草》，曰“经霜叶敷臁疮”。以后诸家本草及医(药)书也多有记载。其味苦、酸、涩，性凉，具有清肺止咳、凉血止血、活血化瘀、降血压之功效。主要用于咳喘、肺气肿、各种内出血、高血压等病症。柿叶中的主要有效成分是黄酮。目前已发现的黄酮类化合物有黄芪、异槲皮素、山萘酚、槲皮素等。国内外研究表明柿叶黄酮具有降血压功能及促进植物生长作用，是一种具有实用价值的作物、瓜果增产剂和很有前途的天然降血压药。
柿叶中黄酮主要以甙类形式存在，一般提取时多采用水、甲醇、乙醇水溶液作溶剂，用乙酸乙酯作萃取剂。另据报道，有人采用水提树酯吸附的方法提取分离柿叶黄酮类化合物。这些方法均存在以下问题操作繁琐，提取率较低。
发明内容
要解决的技术问题为了避免现有技术的不足之处，本发明提供了一种双水相萃取提取柿叶黄酮类物质的方法，利用双水相萃取技术的特点，不但提高了提取柿叶黄酮类物质的提取率，而且可以得到高品质的黄酮类物质，同时方法本身既经济又操作简单。
技术方案在本发明中采用双水相提取柿叶黄酮类物质的方法，双水相萃取技术的特点有(1)体系的含水量多达75％～99％，两界面张力极低，有助于保持有效成分的生物活性和相际质量传递；(2)上、下相密度小，一般10-2g·cm-3左右，是水密度的百分之一；(3)分相时间短；(4)双水相萃取易于连续操作、工程放大，可直接线性放大4万倍；
(5)双水相萃取处理量大，能耗低；主要成本消耗在聚合物的使用上，而聚合物又可以循环使用，因此，生产成本较低。
本发明的技术特征在于a、固液浸取将柿叶烘干、粉碎，加入乙醇溶液，固液浸取，过滤除杂后得到柿叶粗提液；b、双水相萃取取上述柿叶粗提液，加入PEG聚合物和硫酸铵双水相系统，混匀、分为上、下两相，分相温度15℃～30℃，时间为2～6小时；c、乙酸酯类反萃取出富含聚乙二醇聚合物的上相，加水、乙酸酯类和无机盐，混匀，系统在室温下静置分为上、下两相，分相温度为室温，时间为1～3小时。
d、减压蒸馏、真空干燥取出含有大量黄酮类物质的乙酸酯类的相，对其进行减压蒸馏、浓缩溶液，然后将该浓缩液进行真空干燥，得到固体柿叶黄酮类物质。
在上述的双水相萃取中，加入PEG聚合物和硫酸铵双水相系统的同时还可以加入无机盐，无机盐可以为NaCl或Na2SO4。
上述加入的PEG聚合物为5％～25％，硫酸铵为10％～20％，其中PEG聚合物的分子量为300～1500。
上述加入的乙酸酯类可以为乙酸丁酯或乙酸乙酯。
有益效果本发明的有益效果是(1)分相迅速在实验中观察到，采用双水相萃取法，约20分钟左右即可分相，且没有乳化层，缩短了实验周期。
(2)过程集成双水相萃取既达到了预处理的目的，又浓缩了料液。表现为大量的杂质(如亲水性物质，细胞碎片等)进入下相，黄酮类物质进入上相，上相较原始处理液大为减少，浓缩倍数达到了4倍以上；(3)本发明方法简单，易于掌握，不受环境影响，见效快。
下面结合附图和实施例对本发明做进一步说明。
图1工艺流程示意图具体实施方式
现结合附图对本发明作进一步描述实施例1(1)固液浸取称取经清洗、去杂、烘干、粉碎的柿叶20g，加入50％乙醇300mL进行回流浸提3h，蒸馏回收溶剂，将所剩提取液过滤除杂，得到滤液153g。
(2)双水相萃取取上述滤液，加入20g聚乙二醇、35g(NH4)2SO4、100g水，再加入无机盐NaCl 5g混匀，在15℃分相2h～6h。
(3)乙酸丁酯或乙酸乙酯反萃取出富含聚乙二醇聚合物的上相124mL，加水50mL，80mL乙酸丁酯或乙酸乙酯和3gNaCl，充分混匀，系统在室温下静置分相1h～3h至彻底分为上、下两相，含有大量黄酮类物质的乙酸丁酯相待进一步处理。
(4)减压蒸馏、真空干燥取出乙酸丁酯相102mL进行减压蒸馏浓缩溶液，将浓缩液置于60℃～80℃下真空干燥，得到固体柿叶黄酮类物质。
实施例2(1)固液浸取称取经清洗去杂、烘干、粉碎的柿叶20g，加入70％乙醇400mL回流浸提5h，蒸馏回收溶剂，将所剩提取液过滤除杂，得到滤液190g。
(2)双水相萃取取上述滤液，加入25g聚乙二醇、45g(NH4)2SO4、95g水，再加入2g NaCl，混匀，在25℃分相2h～6h。
(3)乙酸丁酯或乙酸乙酯反萃取出富含聚乙二醇聚合物的上相186mL，加水75mL，113mL乙酸丁酯，3g NaCl，充分混匀，系统在室温下静置分相1h～3h至彻底分为上、下两相，含有大量黄酮类物质的乙酸丁酯相待进一步处理。
(4)减压蒸馏、真空干燥将上述乙酸丁酯或乙酸乙酯相进行减压蒸馏来浓缩溶液，将浓缩液置于60℃～80℃下真空干燥，得到固体柿叶黄酮类物质。
实施例3(1)固液浸取称取经清洗去杂、烘干、粉碎的柿叶20g，加入60％乙醇500mL回流浸提8h，蒸馏回收溶剂，将所剩提取液过滤除杂，得到滤液389g。
(2)双水相萃取取上述滤液，加入35g聚乙二醇、65g(NH4)2SO4、125g水，再加入无机盐3g NaCl，混匀，在30℃分相2h～6h。
(3)乙酸丁酯或乙酸乙酯反萃取出富含聚乙二醇聚合物的上相221mL，加水85mL，126mL乙酸丁酯，3g NaCl，充分混匀，系统在室温下静置分相1h～3h至彻底分为上、下两相，含有大量黄酮类物质的乙酸丁酯相待进一步处理。
(4)减压蒸馏、真空干燥取出乙酸丁酯相238mL进行减压蒸馏浓缩溶液，将浓缩液置于60℃～80℃下真空干燥，得到固体柿叶黄酮类物质。
所得产品按中国药典标准检测，产品中所含柿叶黄酮类化合物约为12.1％(分光光度法)。
本发明基于以下发现柿叶黄酮类物质在PEG/硫酸铵双水相系统中分配的极大对称。表1给出了柿叶黄酮类物质在PEG/硫酸铵双水相中的分配数据。双水相体系萃取分离技术的原理是柿叶黄酮类物质在双水相体系中的选择性分配。柿叶黄酮类物质进入双水相体系后，在上相和下相间进行选择性分配，表现出一定的分配系数。柿叶黄酮类物质对PEG具有某种亲和性，使柿叶黄酮类物质能较容易溶解在富含PEG的上相，而一些杂质分配在下相，柿叶黄酮类物质的分配系数一般大于16，萃取率在78.9％～94.7％之间。
表1柿叶黄酮类物质在PEG/硫酸铵双水相系统中的分配行为
表中相比R＝Vt/Vb分配系数K＝Ct/Cb萃取率Y＝VtCt/(VtCt+VbCb)式中Vt、Vb-上、下相的体积；Ct、Cb-柿叶黄酮类化合物在上、下相中的浓度；因此，经上述固液浸取、PEG/硫酸铵双水相系统萃取、有机溶剂反萃等过程的处理，使柿叶黄酮类物质得以浓缩和提纯，最终得到柿叶黄酮类物质的成品。
权利要求
1.一种双水相萃取提取柿叶黄酮类物质的方法，其特征在于a、固液浸取将柿叶烘干、粉碎，加入乙醇溶液，固液浸取，过滤除杂后得到柿叶粗提液；b、双水相萃取取上述柿叶粗提液，加入PEG聚合物和硫酸铵双水相系统，混匀、分为上、下两相；c、乙酸酯类反萃取出富含聚乙二醇聚合物的上相，加水、乙酸酯类和无机盐，混匀，系统在室温下静置分为上、下两相；d、减压蒸馏、真空干燥取出含有大量黄酮类物质的乙酸酯类的相，对其进行减压蒸馏、浓缩溶液，然后将该浓缩液进行真空干燥，得到固体柿叶黄酮类物质。
2.根据权利要求1所述的一种双水相萃取提取柿叶黄酮类物质的方法，其特征在于在双水相萃取中，加入PEG聚合物和硫酸铵双水相系统的同时还可以加入无机盐。
3.根据权利要求1或2所述的一种双水相萃取提取柿叶黄酮类物质的方法，其特征在于加入的PEG聚合物为5％～25％，硫酸铵为10％～20％。
4.根据权利要求1或2或3所述的一种双水相萃取提取柿叶黄酮类物质的方法，其特征在于加入的PEG聚合物的分子量为300～1500。
5.根据权利要求1或2所述的一种双水相萃取提取柿叶黄酮类物质的方法，其特征在于加入的无机盐可以为NaCl或Na2SO4。
6.根据权利要求1所述的一种双水相萃取提取柿叶黄酮类物质的方法，其特征在于加入的乙酸酯类可以为乙酸丁酯或乙酸乙酯。
7.根据权利要求1所述的一种双水相萃取提取柿叶黄酮类物质的方法，其特征在于在双水相萃取中，分相温度15℃～30℃，时间为2～6小时。
8.根据权利要求1或6所述的一种双水相萃取提取柿叶黄酮类物质的方法，其特征在于在乙酸酯类反萃中，分相温度为室温，时间为1～3小时。
9.根据权利要求1所述的一种双水相萃取提取柿叶黄酮类物质的方法，其特征在于在减压蒸馏、真空干燥中，真空干燥温度为60℃～80℃下。
全文摘要
本发明涉及一种双水相萃取提取柿叶黄酮类物质的方法。本发明的技术特征在于将柿叶烘干、粉碎，加入乙醇溶液，固液浸取，过滤除杂后得到柿叶粗提液。取上述柿叶粗提液，加入PEG聚合物和硫酸铵双水相系统，混匀、分为上、下两相。取出富含聚乙二醇聚合物的上相，加水、乙酸酯类和无机盐，混匀。取出含有大量黄酮类物质的乙酸酯类的相，对其进行减压蒸馏、浓缩溶液，然后将该浓缩液进行真空干燥，得到固体柿叶黄酮类物质。本发明的有益效果是提高了提取柿叶黄酮类物质的提取率，而且可以得到高品质的黄酮类物质，同时方法本身既经济又操作简单。
文档编号B01D11/02GK1709542SQ200410026240
公开日2005年12月21日 申请日期2004年6月17日 优先权日2004年6月17日
发明者岳红, 赵晓莉, 翟文俊 申请人:西北工业大学