专利名称：甲基丙烯酸-2-羟基丙酯硅胶聚合物键合相、制备方法及其应用的制作方法
技术领域：
本发明涉及色谱柱填料的制备，尤其涉及包覆于硅胶基质上的聚合物色谱柱填料的制备。
背景技术：
分离柱是色谱技术的核心，而固定相的研究则是各种高效液相色谱法赖以建立和发展的基础。面对科研和生产中对高纯度物质的需求，开发更有效的制备分离技术、制备色谱的新型填料和蛋白质分离填料是至关重要的。研究开发与生物大分子相适应的分离效率高、选择性好、活性回收和质量回收好、寿命长的固定相是人们始终追求的目标。当前高效液相色谱中使用广泛的固定相主要为硅胶基质键合相和聚合物基质固定相两类。二者各自有其独特的优点和应用范围，硅胶基质键合相机械强度大，但耐pH范围窄2-7.5。而聚合物基质固定相耐pH范围宽0-14，但在有机溶剂中易于溶胀。如果把二者的长处相结合，取长补短，即用硅胶基质作支承体，外面包覆聚合物层，从而得到一种新型填料，更有利于生物大分子的快速分离及活性的回收。该种新型填料较普通硅胶基质填料耐受pH范围加宽，能耐受pH2-10，在溶剂中也不会发生溶胀。另外该种填料的渗透性能好，柱压低，在100％甲醇，流速1ml/min，色谱柱150×4.6mm i.d条件下，柱压仅为5.3MPa，因此能适应高溶剂流速下的快速洗脱分离。
发明内容
本发明目的是提供一种甲基丙烯酸-2-羟基丙酯硅胶聚合物键合相色谱柱填料及其制备方法。该项目在北京市自然科学基金资助下完成，项目编号2073028. 甲基丙烯酸-2-羟基丙酯硅胶聚合物键合相，其结构式为
n为聚合度，n值的范围是2-7。
制备上述甲基丙烯酸-2-羟基丙酯硅胶聚合物键合相可通过如下方法实现 (1)硅胶活化按盐酸、硅胶体积、质量比2-6ml/g，将体积百分比为20％的盐酸与30nm-300nm孔径的硅胶配制成混合物，加热90-100℃反应回流2-6小时，抽滤、用去离子水洗涤至中性，105℃烘4-8小时，并50℃真空干燥4-6小时，得活化硅胶备用。
(2)键合甲基乙烯基按甲基乙烯基二氯硅烷、硅胶体积、质量比1-3ml/g甲基乙烯基二氯硅烷与上述活化硅胶配制成混合物，再加入5-7倍甲基乙烯基二氯硅烷体积的无水甲苯，在100-120℃、机械搅拌、液面下通N2的反应条件下回流18-24小时，反应完成后先用无水甲苯抽滤、洗涤，再用甲醇抽滤、洗涤，得键合甲基乙烯基硅胶。
反应式
(3)钝化按键合甲基乙烯基硅胶、三甲基氯硅烷质量、体积比1-4g/ml，将上述键合甲基乙烯基硅胶和三甲基氯硅烷配制成混合物，再加入8-10倍三甲基氯硅烷体积的无水甲苯，于100-120℃、机械搅拌、液面下通N2反应条件下回流18-24小时，反应完成后先用无水甲苯抽滤、洗涤，再用甲醇抽滤、洗涤，得钝化硅胶。
反应式
(4)引发聚合称取上述经钝化的键合乙烯基硅胶，50℃真空干燥后，加入钝化的键合乙烯基硅胶质量千分之五-百分之二的引发剂，10-15倍无水甲苯，在100-120℃、机械搅拌、通N2条件下回流3小时后，1ml/min滴加十分之一五分之一上述钝化的键合乙烯基硅胶质量的甲基丙稀酸-2-羟基丙酯、千分之五-百分之二上述钝化的键合乙烯基硅胶质量的交联剂二乙烯基苯、千分之五-百分之二上述钝化的键合乙烯基硅胶质量的引发剂和2-4倍无水甲苯的混合液，待全部加入后，反应18-24小时，反应完成后先用无水甲苯抽滤、洗涤，再用甲醇抽滤、洗涤，得甲基丙烯酸-2-羟基丙酯硅胶色谱柱填料。
反应式
n为聚合度，n值的范围是2-7。
上述引发剂为过氧化苯甲酰或偶氮二异丁腈。
应用上述甲基丙烯酸-2-羟基丙酯硅胶聚合物键合相分离蛋白质，以乙腈-水作为流动相，梯度条件为0-20min，乙腈5％-40％；20-25min，乙腈40％-5％，对标准蛋白质或鸡蛋白蛋白粗品进行分离，获得三个组分，分别是卵清蛋白、胰蛋白酶抑制剂、胰凝乳蛋白抑制剂色谱图。液相色谱仪岛津-20A；检测波长280nm和254nm。
本发明与现有技术相比，具有柱效高、分离时间短、对蛋白质分离效果好，同时适用pH范围较宽等优点。
图1，13，14，15，16依次为5个实施例的四个标准蛋白混合进样的液相色谱图 1-papain(木瓜蛋白酶)；2-insulin(胰岛素)；3-hemoglobin(牛血红蛋白)；4-lysozyme(溶菌酶) 流动相乙腈-水；梯度条件0-20min，5％乙腈-40％乙腈；20-25min，40％乙腈-5％乙腈。
图2为粗蛋白样品液相色谱图 样品鸡蛋白蛋白粗品 流动相乙腈-水；梯度条件0-20min，5％乙腈-40％乙腈；20-25min，40％乙腈-5％乙腈。
图3蛋白质保留与碱流动相洗脱体积关系图 色谱柱150×4.6mm i.d.硅胶聚合物填料，流动相A0.1％TFA水溶液，B0.1％TFA乙腈溶液，20-min从5％B到100％B线性梯度。流速1ml/min，UV-280nm. Peaks1.Yeast ribonuclease(酵母核糖核酸酶)，2.Glucose oxidase(过氧化氢酶)，3.Lysozyme(溶菌酶)，4.Cytochrome C(细胞色素C)，5.Ribonnuclease(核糖核酸酶)，6.Bovineserum albumin(牛血清白蛋白)，7.Chick egg albumin(鸡蛋白蛋白). 图4甲基丙烯酸-2-羟基丙酯硅胶聚合物色谱柱填料红外光谱图 图5硅胶本体红外光谱图 图6硅胶颗粒放大2万倍扫描电镜图 图7硅胶颗粒放大1千倍扫描电镜图 图8甲基丙烯酸-2-羟基丙酯硅胶聚合物色谱柱填料放大2万倍扫描电镜图 图9基丙烯酸-2-羟基丙酯硅胶聚合物色谱柱填料放大1千倍扫描电镜图 图10滴水表面张力角测定，水珠滴落前照片 图11滴水表面张力角测定，水珠滴落后照片 图12分子量的对数与相应的保留体积曲线图 使用高效液相色谱仪Waters 600，自制大孔硅质聚合物键合相色谱柱，蒸发光散射检测器，移动相四氢呋喃，流速0.6mL/min。采用已知的不同分子量的标准Ps标样从666到2,000,000g.mol-1，测出各自的保留体积，然后用分子量的对数与相应的保留体积作出曲线图。从曲线图可看出适宜蛋白质分离范围1000-3000000。
wei1硅胶颗粒 wei2键合乙烯基硅胶 wei3甲基丙烯酸-2-羟基丙酯硅胶聚合物填料
具体实施例方式 实施例1(注“键合相”和“色谱柱填料”在本领域是通用，因标题不超过25字写成键合相，但一般都习惯写成色谱柱填料，所以下文中用的为色谱柱填料。) (1)硅胶活化 按盐酸、硅胶体积、质量比为2ml/g，将体积百分比为20％盐酸与30nm孔径硅胶配制成混合物，加热90℃反应回流2小时，抽滤、用去离子水洗涤至中性，105℃烘4小时，并50℃真空干燥4小时，得活化硅胶备用。
(2)键合甲基乙烯基 按甲基乙烯基二氯硅烷、硅胶，体积/质量为1ml/g，将甲基乙烯基二氯硅烷与上述活化硅胶配制成混合物，再加入6倍甲基乙烯基二氯硅烷体积的无水甲苯，在100℃、机械搅拌、液面下通N2的反应条件下回流20小时，反应完成后先用无水甲苯抽滤、洗涤，再用甲醇抽滤、洗涤，得键合甲基乙烯基硅胶。
(3)钝化 按键合甲基乙烯基硅胶、三甲基氯硅烷，质量/体积为2g/ml，将上述键合甲基乙烯基硅胶和三甲基氯硅烷配制成混合物，再加入8倍三甲基氯硅烷体积的无水甲苯，于110℃、机械搅拌、液面下通N2反应条件下回流24小时，反应完成后先用无水甲苯抽滤、洗涤，再用甲醇抽滤、洗涤，得钝化硅胶。
(4)引发聚合 称取上述经钝化的键合乙烯基硅胶，50℃真空干燥后，加入钝化的键合乙烯基硅胶质量千分之五的引发剂，12倍无水甲苯，在100℃、机械搅拌、通N2条件下回流3小时后，1ml/min滴加十分之一上述钝化的键合乙烯基硅胶质量的甲基丙稀酸-2-羟基丙酯、百分之一上述钝化的键合乙烯基硅胶质量的交联剂二乙烯基苯、百分之一上述钝化的键合乙烯基硅胶质量的引发剂和2倍无水甲苯的混合液，待全部加入后，反应18小时，反应完成后先用无水甲苯抽滤、洗涤，再用甲醇抽滤、洗涤，得甲基丙烯酸-2-羟基丙酯硅胶色谱柱填料。
色谱填料的表征(可以是任一制备实施例所制得填料的表征) 红外取大孔硅胶和上述实施例制得的甲基丙烯酸-2-羟基丙酯硅胶聚合物，进行红外光谱分析，大孔硅胶和聚合物填料的红外光谱图分别如图4与图5所示，从图中可看出 (1)苯环结构波数1630.4和1519.4，未聚合硅胶本身没有1519.4的吸收峰； (2)甲基结构波数2948.3和2881.2； (3)Si-CH3结构波数1145.5属于其中甲基的对称变形振动，特点是强、宽。
(4)羟基结构波数3700-3200，其中3690附近属于游离硅羟基，3500-3200属于醇羟基形成氢键后产生的宽峰。波数1411.7-1200属于羟基面内弯曲振动峰。比较可以明显看出键合后羟基峰明显变宽，说明硅羟基大部分被反应掉。
扫描电镜 取大孔硅胶与上述实施例制得的甲基丙烯酸-2-羟基丙酯硅胶聚合物，采用扫描电镜，进行形貌分析。图6和图7是未参加化学键合反应的硅胶颗粒，图8和图9是按上述实施例制得的硅胶聚合物色谱填料。图6和图8的比照可以看出硅胶在参与反应前后表面结构改变不大，说明聚合层很薄没有影响硅胶的孔结构，符合实验预期。图7和图9的比照可以看出硅胶颗粒在反应前后分散状况良好，没有因为聚合反应而发生颗粒间的严重粘连。
表面张力角实验 取大孔硅胶与上述实施例制得的甲基丙烯酸-2-羟基丙酯硅胶聚合物，采用滴水表面张力角测量仪进行合成填料的亲水性能表征。图10是水珠未滴落到填料压片前的照片，图下方深色平面既为所制备填料的压片。图11为水珠滴落后及时摄取的照片。两图相比照可以看出在对硅胶进行聚合后得到的填料其亲水性能并没有改变，还属于完全亲水填料，表面张力为0度，符合实验预期，该种亲水填料与水溶性的生物大分子有良好的传质能力，适合于生物大分子的分离。
热重分析 对本发明制备的甲基丙烯酸-2-羟基丙酯硅胶聚合物键合相及本体硅胶进行热重分析，样品用量为10mg左右，升温范围为20℃-850℃，升温速度为10℃/min，空气环境下进行热重分析。甲基丙烯酸-2-羟基丙酯硅胶聚合物键合相在320.97℃-360.72℃之间有一明显失重峰，扣除硅胶本体空白后计算的失重为2.73％。由理论计算得知该种键合相的含碳量约为2.11％。
色谱填料的评价 (1)色谱柱填装 取上述实施例制得的填料2.3g，用超声驱除气体之后的丙酮作为悬浮剂，超声驱除气体之后的无水乙醇作为装柱顶替液，装填限制压力为55MP，装填25×4.6mm色谱柱一支，进行蛋白质分离实验。装柱机Haskel气动往复泵式装柱机，高纯氮气钢瓶作为气动源。
(2)色谱填料蛋白分离实验 应用上述甲基丙烯酸-2-羟基丙酯硅胶聚合物色谱柱填料，以乙腈-水作为流动相，流速1ml/min，梯度条件为0-20min，乙腈5％-40％；20-25min，乙腈40％-5％，对标准蛋白质进行分离，得到图一所示的色谱图。从图中可以看出，四个标准蛋白质均实现了基线分离，峰形对称，响应值高，无拖尾，分析速度快，全部蛋白质在七分钟内全部出峰，木瓜蛋白酶保留时间为2.54分；胰岛素保留时间为4.85分；牛血红蛋白保留时间为5.7分；溶菌酶保留时间为6.1分。液相色谱仪岛津-20A；检测波长280nm和254nm，检测时间为25分钟。
应用上述甲基丙烯酸-2-羟基丙酯硅胶聚合物色谱柱，以乙腈-水作为流动相，流速1ml/min，梯度条件为0-20min，乙腈5％-40％；20-25min，乙腈40％-5％，对鸡蛋白蛋白粗品进行分离，获得三个组分分别是卵清蛋白、胰蛋白酶抑制剂、胰凝乳蛋白抑制剂，色谱图为图2所示。从图中可以看出，三个组分峰实现了较好的分离，分析速度快，在十分钟内出峰完成分离，液相色谱仪岛津-20A；检测波长280nm和254nm，检测时间为20分钟。
采用pH10的氢氧化钠水溶液连续冲洗上述实施例制得的甲基丙烯酸-2-羟基丙酯硅胶聚合物色谱柱10000ml后，分离蛋白质效果不变，填料可在pH2-10范围内使用，如图3所示。
色谱柱150×4.6mm i.d.硅胶聚合物填料，流动相A0.1％TFA水溶液，B0.1％TFA乙腈溶液，20-min从5％B到100％B线性梯度。流速1ml/min，UV-280nm. Peaks1.Yeast ribonuclease(酵母核糖核酸酶)，2.Glucose oxidase(过氧化氢酶)，3.Lysozyme(溶菌酶)，4.Cytochrome C(细胞色素C)，5.Ribonnuclease(核糖核酸酶)，6.Bovineserum albumin(牛血清白蛋白)，7.Chick egg albumin(鸡蛋白蛋白). 采用PS-凝胶过滤色谱方法测定上述实施例制得甲基丙烯酸-2-羟基丙酯硅胶聚合物填料的全渗透及全排除极限，确定该填料分子排阻色谱法可分离蛋白质的分子量范围。
使用高效液相色谱仪Waters 600，自制大孔硅质聚合物键合相色谱柱，蒸发光散射检测器，移动相四氢呋喃，流速0.6mL/min。采用已知的不同分子量的标准Ps标样从666到2,000,000g.mol-1，测出各自的保留体积，然后用分子量的对数与相应的保留体积作出曲线图，如图7所示。从曲线图可看出适宜蛋白质分离范围1000-3000000。
实施例2 (1)硅胶活化 按盐酸、硅胶体积/质量为2ml/g，将体积百分比为20％盐酸与100nm孔径硅胶配制成混合物，加热90℃反应回流2小时，抽滤、用去离子水洗涤至中性，105℃烘4小时，并50℃真空干燥4小时，得活化硅胶备用； (2)键合甲基乙烯基 按甲基乙烯基二氯硅烷、硅胶体积/质量为1ml/g，将甲基乙烯基二氯硅烷与上述活化硅胶配制成混合物，再加入6倍甲基乙烯基二氯硅烷体积的无水甲苯，在100℃、机械搅拌、液面下通N2的反应条件下回流20小时，反应完成后先用无水甲苯抽滤、洗涤，再用甲醇抽滤、洗涤，得键合甲基乙烯基硅胶； (3)钝化 按键合甲基乙烯基硅胶、三甲基氯硅烷质量/体积为2g/ml，将上述键合甲基乙烯基硅胶和三甲基氯硅烷配制成混合物，再加入8倍三甲基氯硅烷体积的无水甲苯，于110℃、机械搅拌、液面下通N2反应条件下回流24小时，反应完成后先用无水甲苯抽滤、洗涤，再用甲醇抽滤、洗涤，得钝化硅胶； (4)引发聚合 称取上述经钝化的键合乙烯基硅胶，50℃真空干燥后，加入钝化的键合乙烯基硅胶质量千分之五的引发剂，12倍无水甲苯，在100℃、机械搅拌、通N2条件下回流3小时后，1ml/min滴加十分之一上述钝化的键合乙烯基硅胶质量的甲基丙稀酸-2-羟基丙酯、百分之一上述钝化的键合乙烯基硅胶质量的交联剂二乙烯基苯、百分之一上述钝化的键合乙烯基硅胶质量的引发剂和2倍无水甲苯的混合液，待全部加入后，反应18小时，反应完成后先用无水甲苯抽滤、洗涤，再用甲醇抽滤、洗涤，得甲基丙烯酸-2-羟基丙酯硅胶色谱柱填料。
实施例3 (1)硅胶活化 按盐酸、硅胶体积/质量为4ml/g，将体积百分比为20％盐酸与200nm孔径硅胶配制成混合物，加热90℃反应回流3小时，抽滤、用去离子水洗涤至中性，105℃烘5小时，并50℃真空干燥4小时，得活化硅胶备用； (2)键合甲基乙烯基 按甲基乙烯基二氯硅烷、硅胶，体积/质量为3ml/g，将甲基乙烯基二氯硅烷与活化硅胶配制成混合物，再加入5倍甲基乙烯基二氯硅烷体积的无水甲苯，在110℃、机械搅拌、液面下通N2的反应条件下回流18小时，反应完成后先用无水甲苯抽滤、洗涤，再用甲醇抽滤、洗涤，得键合甲基乙烯基硅胶； (3)钝化 按键合甲基乙烯基硅胶、三甲基氯硅烷，质量/体积为3g/ml，将上述键合甲基乙烯基硅胶和三甲基氯硅烷配制成混合物，再加入10倍三甲基氯硅烷体积的无水甲苯，于120℃、机械搅拌、液面下通N2反应条件下回流20小时，反应完成后先用无水甲苯抽滤、洗涤，再用甲醇抽滤、洗涤，得钝化硅胶； (4)引发聚合 称取上述经钝化的键合乙烯基硅胶，50℃真空干燥后，加入钝化的键合乙烯基硅胶质量百分之一的引发剂，10倍无水甲苯，在110℃、机械搅拌、通N2条件下回流3小时后，1ml/min滴加十分之一上述钝化的键合乙烯基硅胶质量的甲基丙稀酸-2-羟基丙酯、千分之五上述钝化的键合乙烯基硅胶质量的交联剂二乙烯基苯、百分之一上述钝化的键合乙烯基硅胶质量的引发剂和3倍无水甲苯的混合液，待全部加入后，反应20小时，反应完成后先用无水甲苯抽滤、洗涤，再用甲醇抽滤、洗涤，得甲基丙烯酸-2-羟基丙酯硅胶色谱柱填料。
实施例4 (1)硅胶活化 按盐酸、硅胶体积/质量为6ml/g，将体积百分比为20％盐酸与300nm孔径硅胶配制成混合物，加热100℃反应回流6小时，抽滤、用去离子水洗涤至中性，105℃烘8小时，并50℃真空干燥6小时，得活化硅胶备用； (2)键合甲基乙烯基 按甲基乙烯基二氯硅烷、硅胶，体积/质量为2ml/g，将甲基乙烯基二氯硅烷与活化硅胶配制成混合物，再加入7倍甲基乙烯基二氯硅烷体积的无水甲苯，在120℃、机械搅拌、液面下通N2的反应条件下回流24小时，反应完成后先用无水甲苯抽滤、洗涤，再用甲醇抽滤、洗涤，得键合甲基乙烯基硅胶； (3)钝化 按键合甲基乙烯基硅胶、三甲基氯硅烷，质量/体积为4g/ml，将上述键合甲基乙烯基硅胶和三甲基氯硅烷配制成混合物，再加入9倍三甲基氯硅烷体积的无水甲苯，于110℃、机械搅拌、液面下通N2反应条件下回流24小时，反应完成后先用无水甲苯抽滤、洗涤，再用甲醇抽滤、洗涤，得钝化硅胶； (4)引发聚合 称取上述经钝化的键合乙烯基硅胶，50℃真空干燥后，加入钝化的键合乙烯基硅胶质量百分之二的引发剂，10倍无水甲苯，在120℃、机械搅拌、通N2条件下回流3小时后，1ml/min滴加五分之一上述钝化的键合乙烯基硅胶质量的甲基丙稀酸-2-羟基丙酯、百分之二上述钝化的键合乙烯基硅胶质量的交联剂二乙烯基苯、百分之二上述钝化的键合乙烯基硅胶质量的引发剂和4倍无水甲苯的混合液，待全部加入后，反应24小时，反应完成后先用无水甲苯抽滤、洗涤，再用甲醇抽滤、洗涤，得甲基丙烯酸-2-羟基丙酯硅胶色谱柱填料。
实施例5 (1)硅胶活化 按盐酸、硅胶，体积/质量为4ml/g，将体积百分比为20％盐酸与100nm孔径硅胶配制成混合物，加热95℃反应回流5小时，抽滤、用去离子水洗涤至中性，105℃烘7小时，并50℃真空干燥5小时，得活化硅胶备用； (2)键合甲基乙烯基 按甲基乙烯基二氯硅烷、硅胶，体积/质量为1ml/g，将甲基乙烯基二氯硅烷与活化硅胶配制成混合物，再加入6倍甲基乙烯基二氯硅烷体积的无水甲苯，在100℃、机械搅拌、液面下通N2的反应条件下回流22小时，反应完成后先用无水甲苯抽滤、洗涤，再用甲醇抽滤、洗涤，得键合甲基乙烯基硅胶； (3)钝化 按键合甲基乙烯基硅胶、三甲基氯硅烷，质量/体积为1g/ml，将上述键合甲基乙烯基硅胶和三甲基氯硅烷配制成混合物，再加入8倍三甲基氯硅烷体积的无水甲苯，于115℃、机械搅拌、液面下通N2反应条件下回流18小时，反应完成后先用无水甲苯抽滤、洗涤，再用甲醇抽滤、洗涤，得钝化硅胶； (4)引发聚合 称取上述经钝化的键合乙烯基硅胶，50℃真空干燥后，加入钝化的键合乙烯基硅胶质量百分之二的引发剂，10倍无水甲苯，在120℃、机械搅拌、通N2条件下回流3小时后，1ml/min滴加五分之一上述钝化的键合乙烯基硅胶质量的甲基丙稀酸-2-羟基丙酯、百分之二上述钝化的键合乙烯基硅胶质量的交联剂二乙烯基苯、百分之二上述钝化的键合乙烯基硅胶质量的引发剂和2倍无水甲苯的混合液，待全部加入后，反应24小时，反应完成后先用无水甲苯抽滤、洗涤，再用甲醇抽滤、洗涤，得甲基丙烯酸-2-羟基丙酯硅胶色谱柱填料。
权利要求
1、一种甲基丙烯酸-2-羟基丙酯硅胶聚合物键合相，其结构式为
n为聚合度，n值的范围是2-7。
2、制备权利要求1所述的甲基丙烯酸-2-羟基丙酯硅胶聚合物键合相的方法，其特征在于包括以下步骤
(1)硅胶活化按盐酸、硅胶体积质量比2-6ml/g，将体积百分比为20％的盐酸与30nm-300nm孔径的硅胶配制成混合物，加热90-100℃反应回流2-6小时，抽滤、洗涤至中性，105℃烘4-8小时，并50℃真空干燥4-6小时，得活化硅胶备用；
(2)键合甲基乙烯基按甲基乙烯基二氯硅烷、硅胶体积质量比1-3ml/g，将甲基乙烯基二氯硅烷与30nm-300nm孔径活化硅胶配制成混合物，再加入5-7倍甲基乙烯基二氯硅烷体积的无水甲苯，在100-120℃、机械搅拌、液面下通N2的反应条件下回流18-24小时，反应完成后先用无水甲苯抽滤、洗涤，再用甲醇抽滤、洗涤，得键合甲基乙烯基硅胶；
(3)钝化按键合甲基乙烯基硅胶、三甲基氯硅烷体积质量比1-4ml/g，将上述键合甲基乙烯基硅胶和三甲基氯硅烷配制成混合物，再加入8-10倍三甲基氯硅烷体积的无水甲苯，于100-120℃、机械搅拌、液面下通N2反应条件下回流18-24小时，反应完成后先用无水甲苯抽滤、洗涤，再用甲醇抽滤、洗涤，得钝化硅胶；
(4)引发聚合称取上述经钝化的键合乙烯基硅胶，50℃真空干燥后，加入钝化的键合乙烯基硅胶质量千分之五-百分之二的引发剂，10-15倍无水甲苯，在100-120℃、机械搅拌、通N2条件下回流3小时后，1ml/min滴加十分之一-五分之一上述钝化的键合乙烯基硅胶质量的甲基丙稀酸-2-羟基丙酯、千分之五-百分之二上述钝化的键合乙烯基硅胶质量的交联剂二乙烯基苯、千分之五-百分之二上述钝化的键合乙烯基硅胶质量的引发剂和2-4倍无水甲苯的混合液，引发剂为过氧化苯甲酰或偶氮二异丁腈，待全部加入后，反应18-24小时，反应完成后先用无水甲苯抽滤、洗涤，再用甲醇抽滤、洗涤，得甲基丙烯酸-2-羟基丙酯硅胶键合相。
3.根据权利要求1所述的一种甲基丙烯酸-2-羟基丙酯硅胶聚合物色谱柱填料的应用，其特征在于，乙腈-水作为流动相，梯度条件为0-20min，乙腈5％-40％；20-25min，乙腈40％-5％，对标准蛋白质或粗蛋白质进行分离，获得三个组分卵清蛋白、胰蛋白酶抑制剂、胰凝乳蛋白抑制剂色谱图。
全文摘要
本发明属于色谱柱填料领域。制备方法步骤(1)硅胶活化(2)键合甲基乙烯基；(3)钝化硅胶(4)引发聚合。其应用乙腈-水作为流动相，梯度条件为0-20min，乙腈5％-40％；20-25min，乙腈40％-5％，对标准蛋白质或粗蛋白质进行分离，获得三个组分卵清蛋白、胰蛋白酶抑制剂、胰凝乳蛋白抑制剂色谱图。本发明柱效高、分离时间短、对蛋白质分离效果好，同时适用pH范围较宽等优点。
文档编号B01J20/286GK101234340SQ200710177459
公开日2008年8月6日 申请日期2007年11月16日 优先权日2007年11月16日
发明者芸 魏, 冲 王, 督山·伯瑞克 申请人:北京化工大学