专利名称：一种胺碘酮分子印迹固相萃取柱的制备及其应用的制作方法
技术领域：
本发明涉及药物分析领域，具体地说是涉及一种盐酸胺碘酮分子印迹固相萃取 (MISPE)柱及制备方法，并主要用于生物样品中盐酸胺碘酮的高选择性分离、富集和纯化。
背景技术：
盐酸胺碘酮，简称胺碘酮，化学名为(2- 丁基-3苯并呋喃基)[4-[2-( 二乙氨基) 乙氧基]-3，5- 二碘苯基]甲酮盐酸盐，是一个广泛用于治疗及预防室性及室上性心律失常 的第III类抗心律失常药物。盐酸胺碘酮的半衰期很长，长期服用会在体内积累，同时药用 范围很窄，易对人体产生副作用。因此，有必要对病人体内的盐酸胺碘酮浓度进行检测。由于生物样品中许多内源性物质的存在，使得样品净化成为必要步骤。目前，生 物样品中的盐酸胺碘酮前处理手段较多，如溶剂萃取和固相萃取法，结合毛细管电泳或高 效液相色谱法。溶剂萃取法需要大量的有机溶剂，耗时且存在严重的基体干扰，其它方法 的仪器昂贵。固相萃取法(SPE)出现于20世纪70年代，至今已成为许多领域样品预处理 的常用方法。传统的SPE吸附剂选择性不佳，在富集分析物过程中存在大量基体和干扰物 质。因此，发展快速、高效、高选择性、环境友好的样品前处理技术非常重要[中国科学B辑 化学，2009，39 (8) :733]。分子印迹聚合物(MIP)是为模板分子量身定做的高分子聚合物， 具有预定性、实用性和识别性等特点[Chemistry of Materials, 2008, 20 (3) 859 ；Anal. Chem. ,2009,81(4) :1615]。由于模板选择的多样性，使得MIP能广泛应用于物质的分离 与分析过程，它对于目标物质的高度选择性也是普通SPE填料所不能比拟的[分析化学， 2007,35(9) 1319 ；Analytical Letters, 2009，42 (3) :600]。目前关于盐酸胺碘酮 MISPE 柱的制备未见报道。
发明内容
本发明的目的在于克服现有技术的不足，提供一种盐酸胺碘酮MISPE柱及制备方 法和应用，以高效地选择性分离富集血清、血浆等生物样品提取液中的盐酸胺碘酮，结合高 效液相色谱即可实现生物样品中盐酸胺碘酮的快速分析。为实现上述目的，本发明以胺碘 酮为模板，4-乙烯吡啶为功能单体，乙二醇二甲基丙烯酸酯为交联剂，以氯仿为致孔剂，偶 氮二乙丁腈为引发剂，进行聚合制备出MIP后，填充在固相萃取柱内得盐酸胺碘酮MISPE 柱。仪器与试剂 UV-2450紫外可见分光光度计、LC-10A高效液相色谱仪(日本岛津公司)； Inertsil 0DS-SP (5 μ m，4. 6X 250mm) C18 色谱柱；HumanpowerIII 超纯水处理器(韩国)； HC-2518微量高速离心机(安徽中科中佳科学仪器)；5S1020固相萃取仪(北京振翔工贸 有限公司)。盐酸利多卡因(杭州大阳化工有限公司，LD)；利多卡因(sigma，98% )；盐酸胺碘 酮(杭州大阳化工有限公司，AD) ；4-乙烯基吡啶(ACROS 0RGANICS，USA)，乙二醇二甲基丙烯酸酯(EDMA，分析纯，百灵威化学技术有限公司)，偶氮二乙丁腈(AIBN，化学纯，上海试剂 厂)；磷酸二氢钠(天津福晨化学试剂，基准试剂)；3，5_二碘4-[2-(二乙氨基)乙氧基-硝 基苯(自制，Bi)，其它试剂均为分析纯。
四
附图1为pH = 4. 5胺碘酮溶液上样在MIP与非印迹聚合物(NIP)上的吸附量随 浓度变化曲线。附图2为1. Omg/L胺碘酮溶液HPLC图2a为盐酸胺碘酮标准品溶液；2b为盐酸 胺碘酮血清提取液_未经过MISPE柱；2c为盐酸胺碘酮血清提取液-经过MISPE柱。
五具体实施例方式A)将模板、功能单体、交联剂、引发剂、致孔剂按 Immol 4mmol 16mmol 78. 5mg的配比置于50mL圆底烧瓶中，充分溶解混勻，超声脱气 5min，通氮气5min，于50°C恒温油浴锅中加热24h。B)将步骤Α)制备的聚合物磨碎成粉末，粉末过筛，收集粒径在38 75 μ m的聚合 物，用索氏提取器以含冰乙酸-甲醇(1 9，V/V)溶液洗至无胺碘酮检出，继续用甲醇洗去 乙酸，最后真空干燥至恒重，得盐酸胺碘酮MIP颗粒。用HPLC评价盐酸胺碘酮MIP颗粒的选择性。将洗涤过的MIP颗粒干法装填于不 锈钢色谱柱(50mmX4. 6mm)中，以甲醇pH = 4.0(75 25, ν/ν)为流动相，流速为1. 2mL/ 111土11，检测波长为24211111，柱温为32.21，2(^1^进样。以丙酮测量死时间。结果表明制备的 MIP对盐酸胺碘酮具有高的亲和性和选择性。表HPLC评价盐酸胺碘酮MI
权利要求
1.一种盐酸胺碘酮分子印迹固相萃取(MISPE)柱，其特征是固相萃取柱中填充有盐酸 胺碘酮分子印迹聚合物(MIP)颗粒。
2.如权利要求1所述的盐酸胺碘酮MISPE柱，其特征在于上述盐酸胺碘酮MIP颗粒大 小为38 75μπι。
3.盐酸胺碘酮MISPE柱的制备方法，其特征在于包括以下步骤Α)将胺碘酮0. 6455g (Immol)、4_乙烯基吡啶0. 4206g (4mmol)、乙二醇二甲基丙烯酸酯 3. 1715g(16mmol)，偶氮二乙丁腈0. 0848g,氯仿3. 9262g置于50mL圆底烧瓶中，充分溶解混 勻，超声脱气5min，通氮气5min，于50°C恒温油浴锅中加热24小时，得到块状聚合物。将块 状聚合物用研钵磨碎，过筛收集得到粒径在38 75 μ m,含有胺碘酮的MIP颗粒；B)将上述含有胺碘酮的MIP颗粒，用索氏提取器以含冰乙酸-甲醇(1 9，V/V)溶液 洗至无胺碘酮检出，继续用甲醇洗去乙酸，再经甲醇反复沉降，滤去甲醇，将获得的颗粒物 真空干燥至恒重，即为盐酸胺碘酮MIP颗粒；C)称取IOOmg上述盐酸胺碘酮MIP颗粒，均勻填充至固相萃取空柱中，在聚合物上放置 塞板，制得盐酸胺碘酮MISPE柱。
4.如权利要求1所述的盐酸胺碘酮MISPE柱，其特征在于将上述盐酸胺碘酮MIP颗粒 填充在聚丙烯固相萃取柱内得盐酸胺碘酮MISPE柱。
5.如权利要求1所述的盐酸胺碘酮MISPE柱用途，其特征在于利用该盐酸胺碘酮 MISPE柱分离富集生物样品中的盐酸胺碘酮。
6.如权利要求5所述的盐酸胺碘酮MISPE柱的用途，其特征在于用该盐酸胺碘酮 MISPE柱分离富集血清(或血浆)样品盐酸胺碘酮提取液，以pH = 4. 5溶液为上样溶剂、 30%甲醇pH = 4. 5溶液为淋洗剂、5%盐酸-甲醇为洗脱剂。
7.如权利要求6所述的盐酸胺碘酮MISPE柱应用于血清(或血浆)样品盐酸胺碘酮提 取液，其特征在于上述血清样品盐酸胺碘酮提取液制备方法是取空白牛血清0. 3mL样品， 置具塞离心管中，精密加入1. Og/L盐酸胺碘酮的甲醇溶液0. 3mL，涡旋混勻lmin，加入乙腈 2. 4mL混勻，后于4000r/min离心30min除去蛋白质，精密量取上清液1. OmL作为生物样品 提取液。
全文摘要
本发明涉及吸附材料的制备及其在药物分离、富集中的应用，是一种盐酸胺碘酮分子印迹聚合物和盐酸胺碘酮分子印迹固相萃取柱的制备及其应用。该分子印迹聚合物以胺碘酮为模板，4-乙烯基吡啶为功能单体，乙二醇二甲基丙烯酸酯为交联剂，氯仿为致孔剂，采用本体聚合法合成分子印迹聚合物，将分子印迹聚合物颗粒均匀填充于固相萃取柱内，得到盐酸胺碘酮分子印迹固相萃取柱。本发明实现了生物样品中盐酸胺碘酮的高效分离、富集与纯化，与以往普通溶剂萃取法、C18固相萃取法等相关技术相比，选择性高，并且盐酸胺碘酮分子印迹固相萃取柱可以重复使用，成本低，可望成为生物样品中盐酸胺碘酮前处理的必备手段。
文档编号B01J20/30GK102101041SQ20101051392
公开日2011年6月22日 申请日期2010年10月21日 优先权日2010年10月21日
发明者刘翠, 吐尔洪·买买提 申请人:新疆大学