一种分离藤黄酸差向异构体的方法
【专利摘要】本发明涉及一种分离藤黄酸差向异构体的方法。采用的技术方案是：将藤黄酸溶于乙腈中，然后将藤黄酸的乙腈溶液注入高效液相色谱仪中，使用C8硅胶色谱柱，以有机溶剂和水的混合溶液为流动相，控制流速0.8～1.0ml/min，柱温25～35℃下进行分离。所述的有机溶剂是甲醇或乙腈。本发明使用普通的C8色谱柱，通过对流动相及其配比的筛选，可快速分离藤黄酸C?2位的差向异构体，仅需17.290min，即可快速分离藤黄酸的R、S构型，两者的分离度可达4.00左右，且纯度达98％以上。
【专利说明】
一种分离藤黄酸差向异构体的方法
技术领域
[0001] 本发明涉及一种分离藤黄酸差向异构体的方法，具体涉及用C8硅胶色谱柱分离藤 黄酸C-2位R构型及S构型的方法。
[0002] 背景要求
[0003] 藤黄酸(gambogic acicUGA)是藤黄的主要活性成分，是一种从藤黄科植物提取出 来的橙黄色到棕褐色的树脂。其可以选择性地诱导肿瘤细胞凋亡，在体内外都展现出了广 泛的较强的抗肿瘤作用，而对正常的造血系统和免疫功能无明显抑制效果。
[0004] 藤黄酸的C-2位存在一对差向异构体，即R构型（结构式如A)和S构型(结构式如B)。 化合物空间构型对其生物活性的影响是药物的重要研究领域，在药物研究中手性药物异构 体的质量控制至关重要。差向异构体可能存在多种理化性质及作用效果的不同，如甘草酸 的C-18位存在一对差向异构体，分别为α-甘草酸和β-甘草酸，两者除理化性质的差异外，药 理作用、不良反应和临床疗效也存在相当的差异性。故考虑藤黄酸的R、S构型可能存在不同 的药效或者优于藤黄酸的药效，所以快速分离检测藤黄酸的差向异构体，具有重要的意义， 可便于对其进行进一步的药理和临床研究，为开发疗效好且毒副作用小的新型抗肿瘤药物 创造条件。
[0005]
[0006] 目前，有文献报道，可通过高效逆流色谱来分离藤黄酸C-2位的差向异构体，耗时 长，仅第一次循环就需要150min，两物质分开时需要800min，纯度分别为97.2%、97.5 %，且 需要使用高速逆流色谱仪，设备要求高。张俊艳等通过高效液相，采用价格较贵Sun Fire (Waters) C8 (2 · Imm X 150mm，3 · 5μηι)，鉴定藤黄酸C-2位的差向异构体。此方法出峰时间在 36min左右，耗时较长。故寻找一种快速分离藤黄酸R、S构型的方法迫在眉睫。
【发明内容】
[0007] 本发明的目的是克服已有的分离藤黄酸R、S构型方法，成本高、耗时长等缺点，提 供一种使用普通C8硅胶色谱柱的快速分离藤黄酸R、S构型的方法，且得到目标物的纯度高 达98%以上。
[0008] 本发明采用的技术方案是:一种分离藤黄酸差向异构体的方法，方法如下:将藤黄 酸溶于乙腈中，然后将藤黄酸的乙腈溶液注入高效液相色谱仪中，使用C8硅胶色谱柱，以有 机溶剂和水的混合溶液为流动相，控制流速〇. 8~1.0 ml/min，柱温25~35°C下进行分离。
[0009] 上述的一种分离藤黄酸差向异构体的方法，所述的有机溶剂是甲醇或乙腈。优选 的，所述的有机溶剂是乙腈。
[0010] 上述的一种分离藤黄酸差向异构体的方法，所述的流动相中，按体积比，有机溶 剂:水=83-78:17-22。优选的，按体积比，有机溶剂:水=83:17。
[0011] 本发明的有益效果是:本发明使用普通的C8硅胶色谱柱，通过对流动相及其配比 的筛选，可快速分离藤黄酸C-2位的差向异构体，仅需17.290min即可快速分离藤黄酸的R、S 构型，两者的分离度可达4.00左右，且纯度达98%以上。
【附图说明】
[0012]图1是实施例2中乙腈和水的配比为83:17时，对藤黄酸差向异构体的分离。
[0013]图2是实施例2中乙腈和水的配比为82:18时，对藤黄酸差向异构体的分离。
[0014]图3是实施例2中乙腈和水的配比为81:19时，对藤黄酸差向异构体的分离。
[0015]图4是实施例2中乙腈和水的配比为75:25时，对藤黄酸差向异构体的分离。
【具体实施方式】
[0016] 实施例1有机溶剂对分离藤黄酸差向异构体的影响
[0017] 仪器与条件：安捷伦高效液相色谱仪1200，色谱柱:C8硅胶色谱柱（250mm*4.6mm， 5um);检测波长：360nm。
[0018] 方法:将藤黄酸溶解于乙腈中，然后将藤黄酸的乙腈溶液注入高效液相色谱仪中， 流动相如表1所示，控制流速I .〇ml/min，柱温35°C下进行分离，结果如表1。
[0019] 表1
[0021]由表1可见，以甲醇和水的混合溶液为流动相，R构型的出峰时间为35.236min，而 以乙腈和水的混合溶液为流动相，R构型的出峰时间为23.702min，可见，以乙腈为流动相中 的有机溶剂，分离速度快，因此本发明优选有机溶剂为乙腈。
[0022]实施例2乙腈和水的配比对分离藤黄酸差向异构体的影响
[0023]仪器与条件：安捷伦高效液相色谱仪1200，色谱柱:C8硅胶色谱柱（250mm*4.6mm， 5um);检测波长：360nm。
[0024] 方法:将藤黄酸溶解于乙腈中，然后将藤黄酸的乙腈溶液注入高效液相色谱仪中， 流动相如表2所示，控制流速I .Oml/min，柱温35°C下进行分离，结果如表2和图1-图4。
[0025] 表 2
[0027] 由表2和图1-4可见，固定柱温及流速不变时，改变流动相中乙腈与水的比例，藤黄 酸R、S构型的出峰时间及分离度呈现一定的规律性。若是增大水的比例，R、S构型的出峰时 间变长;若是增大乙腈的比例，R、S构型的出峰时间变短但两者不能分离开。在比例为83:17 时，R、S构型的出峰时间最短且能达到完全分离(分离度> 1.5)。所以，优选乙腈:水=83:17。
[0028] 实施例3流速对分离藤黄酸差向异构体的影响
[0029]仪器与条件：安捷伦高效液相色谱仪1200，色谱柱:C8硅胶色谱柱（250mm*4.6mm， 5um);检测波长：360nm。
[0030] 方法:将藤黄酸溶解于乙腈中，然后将藤黄酸的乙腈溶液注入高效液相色谱仪中， 流动相为按体积比，乙腈:水=83 :17，如表3控制流速，柱温35°C下进行分离，结果如表3所 不。
[0031] 表3
[0033]由表3可见，固定柱温及流动相中乙腈与水的比例，改变流速，藤黄酸的R、S构型呈 现一定的规律。高效液相的流速一般不超过1.0 ml/min，随着流速的减小，出峰时间变长，所 以优选流速为I .Oml/min。
[0034]实施例4柱温对分离藤黄酸差向异构体的影响
[0035]仪器与条件：安捷伦高效液相色谱仪1200，色谱柱:C8硅胶色谱柱（250mm*4.6mm， 5um);检测波长：360nm。
[0036] 方法:将藤黄酸溶解于乙腈中，然后将藤黄酸的乙腈溶液注入高效液相色谱仪中， 流动相为按体积比，乙腈:水= 83:17,控制流速I .Oml/min，如表4控制柱温进行分离，结果 如表4所示。
[0037] 衷 4
[0039]由表4可见，固定流速及流动相中乙腈与水的比例不变时，改变柱温，藤黄酸R、S构 型的出峰时间及分离度呈现一定的规律性。若是降低柱温，R、S构型的出峰时间变长，分离 度R>1.5。若是增大柱温，R、S构型的出峰时间变短且分离度>1.5,但是色谱柱的最大耐受温 度为40°C，故选择柱温为35°C。
【主权项】
1. 一种分离藤黄酸差向异构体的方法，其特征在于:方法如下：将藤黄酸溶于乙腈中， 然后将藤黄酸的乙腈溶液注入高效液相色谱仪中，使用C8硅胶色谱柱，以有机溶剂和水的 混合溶液为流动相，控制流速0.8~1.0ml/min，柱温25~35 °C下进行分离。2. 根据权利要求1所述的一种分离藤黄酸差向异构体的方法，其特征在于:所述的有机 溶剂是甲醇或乙臆。3. 根据权利要求2所述的一种分离藤黄酸差向异构体的方法，其特征在于:所述的有机 溶剂是乙臆。4. 根据权利要求1、2或3所述的一种分离藤黄酸差向异构体的方法，其特征在于:所述 的流动相中，按体积比，有机溶剂:水=83-78:17-22。5. 根据权利要求4所述的一种分离藤黄酸差向异构体的方法，其特征在于:所述的流动 相中，按体积比，有机溶剂:水=83:17。6. 根据权利要求1、2或3所述的一种分离藤黄酸差向异构体的方法，其特征在于:所述 的藤黄酸差向异构体为，藤黄酸C-2位的一对差向异构体，R构型和S构型。
【文档编号】B01D15/38GK106039766SQ201610327514
【公开日】2016年10月26日
【申请日】2016年5月17日
【发明人】陈立江, 刘宇, 王芳, 梁啸, 王欣, 王朝勃, 张金凤
【申请人】辽宁大学