专利名称：用生化酶标多功能分析仪测试血红蛋白检测技术的方法
技术领域：
本发明属医学临床血液检验领域。具体说是一种用生化酶标多功能分析仪测试血红蛋白检测技术的方法。
临床血液检验是医学检验的重要组成部分之一。临床血液分析朝着快速、准确、方便的方向发展是当前国内外医学检验的必然趋势。
国内外从五十年代起，就有多种检验血红蛋白的方法，最常用的是目测对比比较，因此法结果误差大，到八十年代逐步被淘汰，改为分光光度计比色测定，此法稳定性、重复性好，但需绘制标准曲线或计算，工作效率不高，并发展到目前的用血红蛋白仪测定，直接读取含量结果，即方便，又快速，但存在着测试100人份左右，就必须用标准品重新定标。而当前国内外生产的先进的全自动血液分析仪，具有功能全、分析速度快、微量分析等诸多优点而深受用户欢迎。同时因它集一二十项的项目于一体，不利于血红蛋白单项测试，尤其是无法用于大批量体检中的单项血红蛋白标本检测的缺点。若能实现单项测试、准确快速比色分析血红蛋白结果的技术方法，则具有更大的技术上的优越性和应用上的实际意义。
本发明的目的在于避免上述现有技术中存在的不足之处而采用现有的微孔板代替96只比色杯，在孔外试验，孔内比色，用四种不同浓度的标准溶液测定出的吸光度后再根据样本的定量值，采用线性回归得到单位含量数，使之达到提高检测速度的一种用生化酶标多功能分析仪测试血红蛋白检测技术的方法。
本发明的目的可以通过以下措施来达到一种用生化酶标多功能分析仪测试血红蛋白检测技术的方法，其特征在于a．按末梢血常规采集方法采集样品；其方法为(1)采血部位成人以左手无名指为宜，半岁以下婴幼儿通常以拇指或足跟采血；(2)轻轻按摩采血部位，使其自然充血，用75％乙醇棉球消毒局部皮肤、待干；(3)紧捏刺血部位，用无菌采血针穿刺取血。动作应迅速，深度约2-3mm，以稍加挤压血液能流出为宜。用微量定量加样器取被测样品定量加入试管中的试剂内。
b．取洁净8×12标准96微孔板一块；c．用可调加液定量瓶，定量加入试剂于试管内；d．取四种浓度的标准溶液；e．用可调移液器定量吸取标准溶液和被测样品于微孔板各孔内；f．用四种标准溶液测定出的吸光度后再根据样本的定量值，采用线性回归得到单位含量数；
g．将微孔板置生化酶标多功能分析仪测量室内，设置单位含量数，在90s内同时打印出1～90份结果报告。
本发明的目的还可以通过以下措施来达到本发明采用微量定量加样器取被测样品10μl加入试管中的血红蛋白试剂2．5ml内。
本发明采用50、100、150、200g／L浓度的标准溶液。
本发明采用100-500μl微量可调移液器分别定量吸取标准溶液300l于微孔板各两孔内。
本发明采用100-500μl微量可调移液器定量吸取被测样品300μl于微孔板各孔内。
本发明在生化酶标多功能分析仪中采用双波长。
本发明相比现有技术方法具有如下优点1．目前国内外检测血红蛋白的仪器很多，先进的全自动血液分析仪，多数在大城市大医院实验室使用，且具有功能多、项目全、分析速度快、等诸多优点而深受用户欢迎。不足的是，不能单项检测。而本发明采用的一种用生化酶标多功能分析仪测试血红蛋白检测技术的方法弥补了上述的不足。适用于大、中、小医院的大批体检血红蛋白的检测。
2．用分光光度计比色血红蛋白在我国的中、小医院比较普遍，由于需人工比色测定或绘制标准曲线及计算，工作效率不高。而本发明采用的一种用生化酶标多功能分析仪测试血红蛋白检测技术的方法无需绘制标准曲线，在大批量标本检测中，分析速度快，95份样品仅用90s即可测试打印出结果报告。
3．用血红蛋白仪测定，直接读取含量结果，即方便，又快速。但存在着必须一个一个地测试，且经常需用标准品定标。而本发明现有技术的方法，测试血红蛋白，只需利用四种标准溶液测定出的吸光度后再根据样本的定量值，采用线性回归得到单位含量数，此单位含量数在同批试剂中可代替标准品、标准曲线和标准管，以简化检测操作步骤，提高工作效率。
4．结果准确，重复性好。用生化酶标多功能快速分析仪和现有的技术方法，用氰化高铁法所测定血红蛋白项目的精密度、线性、相关系数、标准差、变异系数等都优于其它血红蛋白分析仪。
实施例1血红蛋白标准溶液测定—氰化高铁法操作(1)取50g／L、100g／L、150g／L、200g／L四种浓度的标准溶液。
(2)取洁净8×12标准96微孔板一块。
(3)用100-500μl可调移液器分别定量吸取上述不同浓度的标准液300μl于微孔板各两孔内；(4)将微孔板置生化酶标多功能分析仪测量室内，用540nm，双波长，设空白孔和各标准孔位，启动测量打印出结果和吸光度报告。
(5)结果血红蛋白标准溶液测定 氰化高铁法标准品试剂 上海科欣生物技术研究所生产批号 991011标准溶液 50g／L、100g／L、150g／L、200g／L测量波长 540nm波长方式 双波长报告方式 1．标准浓度测试结果2．吸光度测试结果1．标准浓度测定结果A行01、02孔为空白孔，03、04孔为“0”点孔，05、06孔为50g／L标准溶液，07、08孔为100g／L标准溶液，09、10孔为150g／L标准溶液，11、12孔为200g／L标准溶液测试的结果。2．吸光度测试结果 与标准浓度测定结果相对应的各孔吸光度值 实施例2血红蛋白测定—氰化高铁法原理全血加HiCN试剂，血红蛋白衍生物能转化成稳定的棕红色氰化高铁血红蛋白。用四种标准溶液测定出的吸光度后再根据样本的定量值，采用线性回归得到单位含量数，用单位含量数、540nm、双波长比色测定得被测样品含量。
试剂氰化钾50mg高铁氰化钾 200 mg无水磷酸二氢钾140mg 表面活性剂 1．0 ml蒸馏水加至1000 ml标准溶液50g／L、100g／L、150g／L、200g／L操作1．用可调加液定量瓶，定量加入2．5ml试剂于试管内。
2．末梢血采集，其方法为(1)采血部位成人以左手无名指为宜，半岁以下婴幼儿通常以拇指或足跟采血；(2)轻轻按摩采血部位，使其自然充血，用75％乙醇棉球消毒局部皮肤、待干；(3)紧捏刺血部位，用无菌采血针穿刺取血。动作应迅速，深度约2-3mm，以稍加挤压血液能流出为宜，用微量定量加样器吸取被测样品10μl加入上述试管中混匀静置5分钟。
3．取洁净8×12标准96微孔板一块。
4．用100-500μl可调移液器定量吸取上述被测样品300μl于微孔板各孔内。
5．用实施例1四种标准溶液测定出的吸光度后再根据样本的定量值，采用线性回归得到单位含量数为433．8。
6．将微孔板置生化酶标多功能分析仪测量室内，用540nm，双波长，设空白孔位，确认Au*C公式，设置单位含量数C=433．8，在90s内同时测量打印出1～95份血红蛋白测试结果报告。
结果血红蛋白测定氰化高铁法试剂上海科欣生物技术研究所生产批号991011波长方式双波长测量波长540nm报告方式血红蛋白测定结果使用公式Au*C单位含量数设置 C=433．8测量结果如下A行01、02孔为空白调“O”孔，03、04孔为原测定试剂空白孔，05、06孔为原标准品50g／L，07、08孔为原标准品100g／L，09、10孔为原标准品150g／L，11、12孔为原标准品200g／L，所测试的结果。经此方法测试后，现四种标准浓度溶液的各孔含量比原测定结果高出000．3。其余为标本测定结果。
权利要求
1．一种用生化酶标多功能分析仪测试血红蛋白检测技术的方法，其特征在于a．按末梢血常规采集方法采集标本；b．取洁净8×12标准96微孔板一块；c．用可调加液定量瓶，定量加入试剂于试管内；d．取四种浓度的标准溶液；e．用可调移液器定量吸取标准溶液和被测样品于微孔板各孔内；f．用四种标准溶液测定出的吸光度后再根据样本的定量值，采用线性回归得到单位含量数；g．将微孔板置生化酶标多功能分析仪测量室内，设置单位含量数，在90s内同时打印出1～90份结果报告。
2．根据权利要求1所述的用生化酶标多功能分析仪测试血红蛋白检测技术的方法，其特征在于采用微量定量加样器取被测样品10μl加入试管中的血红蛋白试剂2．5ml内。
3．根据权利要求1所述的用生化酶标多功能分析仪测试血红蛋白检测技术的方法，其特征在于采用50、100、150、200 g／L浓度的标准溶液。
4．根据权利要求1所述的用生化酶标多功能分析仪测试血红蛋白检测技术的方法，其特征在于采用100-500μl微量可调移液器分别定量吸取标准溶液30μl于微孔板各两孔内。
5．根据权利要求1所述的用生化酶标多功能分析仪测试血红蛋白检测技术的方法，其特征在于采用100-50μl微量可调移液器定量吸取被测样品30μl于微孔板各孔内。
6．根据权利要求1所述的用生化酶标多功能分析仪测试血红蛋白检测技术的方法，其特征在于在生化酶标多功能分析仪中采用双波长。
全文摘要
本发明提供了一种利用现有的微孔板代替96只比色杯,用不同浓度的标准溶液测定出吸光度后再根据样本的定量值,采用线性回归得到单位含量数,代替标准品、标准曲线和标准管,使之在血红蛋白检测项目中,大大提高了检测速度,再结合相应配套的生化酶标多功能分析仪测试,完善了自动检测、自动打印出试验项目结果报告的快速检测系统。
文档编号G01N21/27GK1295243SQ00134390
公开日2001年5月16日 申请日期2000年12月12日 优先权日2000年12月12日
发明者吴斌, 张红宁, 梁立森, 韩明伦 申请人:吴斌