专利名称：评估患消化性溃疡的危险度的方法,包括定量测定血清样品中胃蛋白酶原i(pgi)和胃泌 ...的制作方法
技术领域：
本发明涉及一种通过确定个体中胃炎的存在及其局部解剖表型来评价该个体患消化性溃疡的危险度的方法。
慢性胃炎是一种非常常见的疾病。据评估全世界的人几乎一半在其一生中的某个(些)阶段患有胃炎。慢性胃炎最常见由幽门螺杆菌(Helicobacterpylori)感染引起，而且认为大多数病历是因为抗这种细菌的免疫反应造成了慢性胃炎[1-6]。
慢性胃炎是一种由唯一的细菌感染引起的疾病，具有慢性和终身患病的特征。胃炎的自发治愈，胃窦和胃体粘膜的正常化，是很罕见的。慢性胃炎的自然进程通常是从炎症到萎缩的一系列改变，其中萎缩明显改变胃粘膜的结构和功能。慢性胃炎的后果表现为几种重要的功能障碍，这些功能障碍看起来显示与特异性改变有关并与胃炎进程中某些特定的状态有关。
细菌感染导致胃粘膜的由免疫活性淋巴细胞和浆细胞，通常为粒细胞组成的单纯炎症[7-11]。对儿童和青年人群的研究提示慢性炎症是早期胃炎的优势初始表型。对于年龄较大的人群，萎缩和粘膜下肠化生是普遍的现象，并随着年龄的增长而增加[12-18]。
研究表明从慢性胃炎到萎缩是一个缓慢的过程。胃炎以及随后的萎缩是胃粘膜的几种功能和稳态受损的重要原因。萎缩导致随着萎缩的进展体部和窦部粘膜的酸、胃蛋白酶原和胃泌素的分泌故障(正常胃粘膜腺体损失)。
幽门螺杆菌感染和胃炎都是消化性溃疡(包括十二指肠和胃溃疡)重要的危险因子。胃炎能发展为十二指肠溃疡和胃溃疡，这提示幽门螺杆菌感染，胃炎及溃疡形成之间的因果关系[19，20]。胃窦炎(炎症仅局限于胃窦)或全胃炎(胃窦和胃体都有炎症)使患十二指肠溃疡的危险性增加约十倍[19]。胃窦炎或全胃炎同时伴有胃窦萎缩时与具有正常胃的人相比可能增加患胃溃疡的危险度，尤其从积累和相关的角度说，可使该危险度增加几十倍[21，22]。
胃炎也可能降低溃疡发生的危险性，尤其是当胃炎发生在胃体并且进展为明显的萎缩时。与胃窦损伤的有无和程度无关，消化性溃疡发生的危险度降低到甚至比有一个正常的胃的人群更低的水平。
总的来说，患消化性溃疡的危险度随着胃窦损伤(胃炎和萎缩)程度的增加呈指数增加，但是随着胃体损伤程度的增加呈指数下降。
源自人胃粘膜的胃蛋白酶原经电泳可以区分出7种表型。其中五种迁移速度最快的组成免疫学特性一致的胃蛋白酶原I组，其余的两种形成胃蛋白酶原II组。I组的胃蛋白酶原仅由胃体部的主要细胞和分泌细胞合成。相对的，全胃的腺体都能合成I组I的胃蛋白酶原，某种程度上十二指肠上部的Brunner氏腺体也能合成。健康人血清中胃蛋白酶原I浓度大约是胃蛋白酶原II浓度的6倍。胃体部萎缩性胃炎的血清胃蛋白酶原I浓度下降，而血清胃蛋白酶原II浓度保持原有水平。因此，血清中胃蛋白酶原I浓度很好地反应了胃体部胃蛋白酶原分泌细胞的数量和状态。胃体部萎缩性胃炎越重，血清中胃蛋白酶原I浓度越低。血清中低胃蛋白酶原I浓度可指示严重的萎缩性胃体炎，其灵敏度大于90％，特异性接近100％[23]。
胃泌素至少以三种形式在胃肠道中分泌，测定血清胃泌素(总血清胃泌素)便可检测这三种胃泌素的免疫反应活性。胃泌素三种亚型分别被称为极小胃泌素(G-14)，小胃泌素(G-17)，大胃泌素(G-34)。生理上最重要的是胃泌素-17和胃泌素-34。胃泌素-17促进盐酸分泌的作用是胃泌素-34的6倍。分泌胃泌素的细胞被称为G细胞，胃窦和十二指肠都有G细胞。最重要的胃泌素分泌加速剂是迷走神经的紧张和蛋白降解产物。pH值低于2.5减慢胃泌素的分泌。胃窦分泌的胃泌素90％以上是胃泌素-17，而十二指肠主要分泌胃泌素-34[24]。禁食时血清中主要为胃泌素-34，餐后血清中主要是胃泌素-17[25]。还用蛋白刺激试验研究过胃泌素-17的分泌。在该试验中，清晨采未进食时的血样，病人进高蛋白饮食后，每隔15分钟采血，共2小时。最大分泌量在进食后大约20分钟时出现。
患萎缩性胃窦炎时窦部的粘膜萎缩并因此其胃泌素-17分泌下降，因而它在血清中的浓度也减少。因此血清胃泌素-17浓度的减少可以表明窦的萎缩和这个部位患癌症的危险上升。窦部粘膜萎缩时，蛋白刺激试验反应也下降，这种蛋白刺激试验似乎比单纯血清浓度测定更灵敏地反映萎缩。在WO 96/15456中介绍了一种通过测定胃的不同部位的萎缩来筛查癌症危险度的方法。
因为慢性胃炎的高度流行，尤其是在老年人群中的流行，开发一种方法来评估慢性胃炎的存在及其局部解剖表型从而来评估患相关的消化性溃疡的危险度是很重要的。尤其是开发一种以非侵入方式实施所述评估的方法较为有利，所述非侵入方式即无需在胃镜诊断性检查期间采集胃粘膜的活检标本。开发一种不仅能评估患消化性溃疡的危险度，还能区分患胃溃疡和十二指肠溃疡的危险度的差异的方法也是有利的。
本发明的方法能实现以上提及的目标。所述方法涉及评估个体患消化性溃疡的危险度的方法，此方法包括以下步骤-定量确定该个体血清样品中胃蛋白酶原I和胃泌素-17的浓度-选择每种分析物的方法特异性参考值和阈值-将所测的胃蛋白酶原I和胃泌素-17浓度与它们各自的参考值和阈值比较，当血清中胃蛋白酶原I和胃泌素-17浓度都大于各自的参考值上限，或者血清胃蛋白酶原I浓度大于它的参考值上限且胃泌素-17浓度在其参考值范围内或者小于其阈值时指示此个体患消化性溃疡的危险度增加。
因此本发明包括一个步骤，此步骤将血清中胃蛋白酶原I和胃泌素-17浓度都大于分别的参考值上限，或者血清胃蛋白酶原I浓度大于它的参考值上限且胃泌素-17浓度在其参考值范围内或者小于其阈值的个体鉴定为患消化性溃疡的危险度增高，或有患消化性溃疡的倾向。
根据发明的优选实施方案，所述方法包括一个通过测定血清样品中幽门螺杆菌(helicobacter pylori)抗体来诊断该个体还有幽门螺杆菌感染的方法。
根据本发明的方法因此对病人血清联合应用两种或优选三种测定来筛查患消化性溃疡的危险度，既血清胃蛋白酶原I(PGI)的测定，胃泌素-17的测定和任选幽门螺杆菌抗体的测定。
测定PGI，G-17和幽门螺杆菌抗体的不同方法是本领域技术人员熟知的，也有商品化的试剂盒。这些方法通常是免疫学方法，其利用所述分析物的单克隆或多克隆抗体来实施。用来检测的方法包括，例如，测量吸收值，荧光或发光。也可同时进行这三种检测，例如，在同一块微滴板(microplate)上的不同孔中进行，这种联合检测体系为诊断提供了特别方便的方法。
本发明包括将所测的分析物浓度与该分析物的方法特异性阈值和参考值比较的步骤，对这些值的选择是本领域技术人员熟知的，并且依赖于测定分析物浓度所用试验方法的特异性和灵敏度，例如见William J Marshall，临床化学，第三版，1995，Mosby。
有许多商品化的试剂盒可以用来测定幽门螺杆菌抗体(例如罗氏(Roche)公司的Orion Pyloriset EIA-G，Pyloriset EIA-A，EIA2G，WhittakerBioproducts公司的Pyloristat)。抗原可以用幽门螺杆菌为材料通过不同的方法制备[26]，而且也有商品化产品。
图1说明慢性胃炎的局部解剖表型和与胃病的相关危险度，和图2说明SPGI，G-17和幽门螺杆菌感染的血清学检测与慢性胃炎的局部解剖表型的关系。
本发明中，术语“局部解剖”或“局部解剖的”用来指胃炎在胃中的定位。无论在胃体还是在胃窦，表型区分为正常，胃炎(浅表型胃炎)和萎缩性胃炎，萎缩性胃炎又可根据严重程度依次分为轻度，中度和重度萎缩性胃炎。
如图1所示，当胃体和胃窦粘膜的胃炎是浅表型胃炎或者轻度萎缩型胃炎(与胃健康的个体，图中标记为“R”者相比)时胃溃疡尤其是十二指肠溃疡的患病率增高，患病危险度随着胃窦部胃炎的严重程度的增加而增加。这种情况下血清胃蛋白酶原I和胃泌素-17浓度都增加到高于它们的参考值，参考值的上限根据所用方法的特异性和灵敏度将PGI定为25-120μg/l胃泌素-17也高于其正常值或参考值，该参考值范围是2-25pmol/l。幽门螺杆菌阳性的滴度阈值是200-500。
在胃体部正常或胃体部胃炎是浅表型且胃窦部为中到重度萎缩型胃炎的情况下，患胃溃疡(以及胃癌)的危险度增加，这种情况下，如上述，胃蛋白酶原I浓度也超过其参考值的上限，但是胃泌素-17的值在正常范围内，在其较低的参考值处，或当严重萎缩时低于其阈值，该阈值根据所用方法的特异性和灵敏度定为0.1-2pmol/l。该方法还可与蛋白刺激试验联合使用，所述试验是测量血清胃泌素17在基线状态以及在蛋白刺激(如高蛋白标准餐)后的浓度。缺少对该试验的反应说明有患胃溃疡的危险。
从图中还可以看出萎缩性胃体炎严重程度增加，且没有或者只有浅表性胃窦炎时，血清胃蛋白酶原I浓度下降到低于阈值可指示患癌症和恶性贫血的危险度增高，其中所述阈值根据所选方法的特异性和灵敏度为20-30μg/l。胃泌素-17浓度仍如上述高于它的参考值。
在胃窦和胃体的萎缩性胃炎严重程度都增加的情况下，血清胃蛋白酶原I浓度低于其阈值表明患癌症的危险度增加，血清胃泌素-17在其参考值下限处，或者在其阈值以下，表明患癌症的危险度增加。这些胃炎表型都与胃癌高风险度有关。
以上所说的用联合的方法对胃不同部位的粘膜的胃炎表型的评价如表1所示。
表1血清胃蛋白酶原I和胃泌素-17联合方法评价胃体或胃窦部粘膜的胃炎表型表1
表型1＝正常，2＝浅表型胃炎，3＝轻度，4＝中度，5＝重度萎缩性胃炎SPGI＝血清胃蛋白酶原ISG-17＝血清胃泌素-17参考文献1. MARSHALL，BJ，WARREN JR胃炎和消化性溃疡患者胃内未确定的弯曲状杆菌。柳叶刀1984，i1311-1314。
2. GOODWIN CSSydney体系微生物胃炎。胃肠病血液学杂志(J.Gastroenterol Hepatol)1991，6235-237。
3. DIXON MF幽门螺杆菌和消化性溃疡；组织病理学方面。胃肠病血液学杂志1991，6125-130。
4. RAUWS EAJ，LANGENBERG W，HOUTHOFF HJ ZANEN HC，TYTGAT GNJ幽门炎弯曲杆菌相关的慢性活动期胃窦炎，胃肠病学(Gastroenterology)1988，9433-40。
5. SIURALA M，SIPPONEN P，KEKKI M在芬兰人群样本中的幽门炎弯曲杆菌与胃粘膜的形态和功能的关系。肠道(Gut)1988，29909-916。
6. PRICE AB，LEVI J，DOLBY JM，DUNSCOMBE PL，SMITH A，CLARK J，等，幽门炎弯曲杆菌在消化性溃疡疾病中；微生物学，病理学和扫描电镜检查。肠道1985，261183-1188。
7. MISIEWICZ JJSydney体系胃炎的新分类。胃肠道血液学杂志1991，6207-208。
8. PRJCEAbSydney体系组织学分类。胃肠病血液学杂志1991，6209-222。
9. WHITEHEAD R，TRUELOVE SC，GEAR MWL慢性胃炎纤维胃镜活检标本的组织学诊断。临床病理学杂志(J Clin Pathol)1972，251-11。
10. CORREA P慢性胃炎一种临床病理学分类。美国胃肠病杂志(Am J Gastroenterol)1988，83504-09。
11. YARDLEY.JH.慢性胃炎和十二指肠炎病理学。胃肠病病理学，由Goldman H，Appelman HD，Kauffman N Baltimore编写WilIiams和Wilkins，1990，69-143页12. SIURALA M，SIPPONEN P.KEKKI M慢性胃炎动力学和临床方面。Scand J Gastroenterol 1985，20(增刊109)69-76。
13. SIURALA M，VARIS K，KEKKI M慢性胃炎新近展流行病学，遗传学，动力学。胃肠前沿研究(Front Gastrointest Res)，1980，6148-165。
14. CHELIR，SANTI I，CIANCAMERA G，CANCIANI G萎缩性胃炎的临床和统计学追踪。美国疾病诊断杂志(AmJDigDis)1973，181061-1066。
15. CHELI R，PERASSO A，GIACOSAA胃炎，BerlinSpringer Verlag，1987。
16. SIPPPONEN P，KEKKI M，SIURALA M在胃癌病人和代表较大正常人群的对照组中胃炎和肠化生的年龄相关趋势。英国癌症杂志1984，49521-530。
17. VILLAKO K，SIURALA M不同人群样本的胃炎表现(behavior)和相关状态1981，13114-118。
18. CHELI R，SIMON L，ASTE H，FIGUS IA，NIGOLD G，BAJTAI A等无症状的匈牙利和意大利人群中的萎缩性胃炎和肠化生。内窥镜检查(Endoscopy)1980，12105-108。
19. SIPPONEN P慢性胃炎和溃疡危险度。Scand J Gastroenterol1990，25193-196。
20. SIPPONEN P，AARYNEN M，KAARIAINEN I，KETTUNEN P，HELSKE T，SEPPALAK在预测伴随的十二指肠溃疡时的慢性胃窦炎，Lewisa阳性表型和男性性别。Scand J Gastroenterol 1989，24581-588。
21. SIPPONEN P，SEPPALA K，AARYNEN M，HELSKE T，KETTUNEN P慢性胃炎和胃十二指肠溃疡对胃炎病人伴有十二指肠和胃溃疡的危险度的案例对照研究。肠道1989，30922-929。
22. SIPPONEN P，VARIS K，FRAKI O，KORRI U-M，SEPPALA K，SIURALA M有或没有胃炎的病人患症状明显型十二指肠溃疡和胃溃疡的十年积累性危险度研究。对454例病人的临床追踪。Scand J Gastroenterol1990，25966-973。
23. VARIS K，KEKKI M，HARKONEN M，SIPPONEN P & SAMLOFFIM 1991血清胃蛋白酶原I和血清胃泌素在筛查具有胃癌高危险度的萎缩性全胃炎中的作用。ScandJ Gastroenterol 26(增刊186)117-123。
24. BERSON SA & YALOW RS，(1971)从胃肠道组织提取的胃泌素的免疫反应性特征。胃肠病学60215-22225. LAMERS C，HARRISON A，IPPOLITI A & WALSH J(1979)正常人和十二指肠溃疡病人的循环胃泌素的分子形式。胃肠病学76117926. LELWALA-GURUGE J，NILSSON I，JUNGH A & WADSTROM T(1992)幽门螺杆菌细胞表面蛋白在ELISA中作抗原使用并与三种商品化ELISA比较。Scand J Infect Dis 24457-465。
权利要求
1.评估个体患消化性溃疡的危险度的方法，此方法包括以下步骤-定量确定所述个体的血清样品中胃蛋白酶原I和胃泌素-17的浓度-为每种分析物选择方法特异性参考值和阈值-将所测的胃蛋白酶原I和胃泌素-17浓度与它们各自的方法特异性参考值和阈值比较，当血清中胃蛋白酶原I和胃泌素-17浓度都大于各自参考值的上限，或者血清胃蛋白酶原I浓度大于它的参考值上限且胃泌素-17浓度在参考值范围内或者小于其阈值时，指示此个体患消化性溃疡的危险度增加。
2.根据权利要求1的方法，其中在血清样品中还测定幽门螺杆菌抗体。
3.根据权利要求1的方法，其中血清胃泌素-17浓度还用蛋白刺激试验测定，在所述试验中测量基线状态下以及高蛋白标准餐后的所述浓度，缺乏应答则指示有胃溃疡的危险。
4.根据权利要求1，2，或3的方法，其中胃蛋白酶原I和胃泌素-17利用塑料，玻璃，或纤维素支持物用免疫学方法测定。
5.根据权利要求4的方法，其中支持物是微滴板。
6.根据权利要求1到5中任何一项的方法，其中用基于测量吸收值，荧光或发光的方法来测定胃蛋白酶原I和胃泌素-17。
7.根据权利要求4到6中任何一项的方法，其中为了测定胃蛋白酶原I的浓度，使用抗胃蛋白酶原I的单克隆抗体或多克隆抗体。
8.根据权利要求4到7中任何一项的方法，其中为了测定胃泌素-17的浓度，使用抗胃泌素-17的单克隆抗体或多克隆抗体。
9.根据前述权利要求中任何一项的方法，其中胃蛋白酶原I，胃泌素-17和幽门螺杆菌测定方法与试剂盒方法相结合，其中用单克隆抗体和多克隆抗体以及基于吸收值，荧光或发光的检测方法在微滴板上同时进行测定。
全文摘要
本发明关注一种通过确定个体中胃炎的存在及其局部解剖学表型而评价消化性溃疡的方法,其中定量测定该个体血清样品中胃蛋白酶原I和胃泌素－17浓度,选择针对每种分析物的方法特异性参考值和阈值,根据所测胃蛋白酶原I和胃泌素－17浓度与它们各自的方法特异性参考值和阈值比较来评价胃炎的局部解剖特征和表型,将所评价的胃炎表型与消化性溃疡的危险度相关联。
文档编号G01N33/577GK1355888SQ00808720
公开日2002年6月26日 申请日期2000年4月28日 优先权日1999年4月30日
发明者彭蒂·西波南, 马蒂·哈科南, 奥斯莫·斯沃瓦尼米, 埃里克·福斯布洛姆 申请人:拜奥希特公司