专利名称：胶体金免疫层析法在水、农及畜产品检测中的应用的制作方法
技术领域：
本发明涉及水产品、农产品及畜产品检测技术，具体涉及胶体金免疫层析法在水、农及畜产品检测领域的应用，属生物医学技术领域。
背景技术：
现有技术中，水产品、农产品及畜产品检测通常采用色谱技术，由于其具有高灵敏度、高分离效率、高选择性，几乎成为现代各行业分析实验室中必备的分析手段。
但是，色谱技术存在下述缺陷1)样品的预处理程序繁琐，要求高；2)对操作时使用的水及各种溶剂有着严格的要求；3)操作过程复杂，时间长；4)需要经过专业培训的技术人员操作，操作人员要有丰富的相关经验；操作人员必须了解影响色谱分析的各种干扰因素，了解所使用的预处理方法的优缺点，才能获得可靠的分析结果；5)需要昂贵的仪器设备辅助，难以在城市及中小企业中普及；6)仪器保养的要求高，保养的好坏直接影响分析结果的准确性；7)检测费用高。
胶体金免疫层析技术是一项九十年代的先进生物技术，它具有特异性强，敏感性高，简易快速，试剂易保存，成本低廉及不需要特异设备等优点，主要应用于卫生、防疫、检验部门。
发明内容
本发明针对水产品、农产品及畜产品检测手断单一、条件受限等问题，将胶体金免疫层析技术引入到水产品、农产品及畜产品的检测领域。属于用途发明，是将公知的技术用于新的目的，能够产生预料不到的技术效果。其技术内容如下胶体金免疫层析法在畜产品检测中的应用。
胶体金免疫层析法在水产品检测中的应用。
胶体金免疫层析法在农产品检测中的应用。
胶体金免疫层析法中需检小分子包括各种激素、农药、杀虫剂及抗生素。所述农药包括有机磷、有机硫、有机氮化合物或氨甲基甲醛酯类化合物。所述抗生素包括黄曲霉素、链霉素、金霉素、四环素、土霉素、氯霉素等抗生素及其盐酯及制剂。
胶体金免疫层析中需检小分子包括Aristllochiaspp、氯霉素(Chloramphenicol)、氯仿(Chloroform)、Chlorpromazine、秋水仙素(Colchicine)、氨苯砜(Dapsone)、Dimetridazole、甲硝达唑(Metronidazole)、硝基呋喃Nitrofurans(包括呋喃唑酮Furazolidone)、Ronidazole。
胶体金免疫层析中需检小分子还包括兴奋剂类克伦特罗Clenbu-terol、沙丁胺醇Salbutamol、希马特罗Cimaterol及其盐、酯及制剂；性激素类己烯雌分Diethylstilbestrol、双烯雌分、己烷雌分及其盐、酯及其制剂；具有雌激素样的物质玉米赤霉醇Zarand、去甲雄三烯醇酮Trenbolone、醋酸甲孕酮Mengestrol Acetate及制剂；氨苯砜(Dapsone)及制剂；硝基呋喃类呋喃唑酮Furazolidone、呋喃苯烯酸钠Nifurstyrenate Sodium及制剂；硝基化合物硝基酚钠Sodiumnitrophenolate、硝呋烯腙Nitrovin及制剂；催眠、镇定类安眠酮Methaqualone及制剂；林丹(丙体六六六)Lindane；毒杀芬(氯化烯)Camahechlor；呋喃丹(克百威)Carbofuran；杀虫脎(克死螨)Chlordimeform；双甲醚Amitraz；酒石酸锑钾Antimony potassiumtatrate；锥虫胂胺Tryparsamide；孔雀石绿Malachite green；五氯酚酸钠Pentachlorophenol sodium；各种汞制剂氯化亚汞(甘汞)Calomel、硝酸亚汞Mercurous、醋酸汞Mercurous acetate、吡啶基醋酸汞Pyridylmercurous acetate；性激素类甲基睾九酮Methyltesto sterone、丙酸睾酮、苯丙酸诺龙、苯甲酸雌二醇Estradiol Benzoate及其盐、酯及制剂；催眠、镇静类氯丙臻Chlorpromazine、地西泮(安定)Diazepam及其盐、酯及制剂；硝基咪唑类甲硝唑Metronidazole、地美硝唑Dimetronidazole及其盐、酯及制剂。
胶体金免疫层析法中需检小分子包括滴滴涕、磺胺类、恶喹酸、多氯联苯、腹泻性贝类毒素(DSP)、麻痹性贝类毒素(DSP)。
采用本发明方法，具有特异性强、敏感性高、简易快速、费用低廉的等优点，尤其适于各级防疫、检验部门推广使用。
四
图1是本发明工艺流程图。
五具体实施例方式
下面结合附图和实施方式对本发明作进一步说明参见图1，本发明的应用主要包括以下步骤1.原料准备
1)单克隆抗体的制备取杂交瘤细胞株在体外常规培养、传代，用需检小分子-载体注射BALB/C小鼠腹腔，收取腹水，以亲和层析法提纯单克隆抗体。
2)多克隆抗体的制备用需检小分子-载体多次免疫山羊或家兔，提取抗血清纯化后得羊抗鼠IgG或兔抗鼠IgG。
3)胶体金的制备用柠檬酸三钠等还原剂将氯金酸还原成胶体金颗粒。
4)单克隆抗体胶体金标记将胶体金与单克隆抗体按最适比例混匀，使胶体金与抗体形成稳定的胶体颗粒，通过纯化浓缩形成抗体—胶体金标记物。2.生产步骤1)将单克隆抗体—胶体金标记物包被于聚脂纤维膜上。
2)将需检小分子-载体和羊(兔)抗鼠IgG用点膜机点于硝酸纤维素膜的检测区带和控制区带上，充分干燥，使硝酸纤维素膜牢固地吸附抗体。
3)将上述玻璃纤维膜和硝酸纤维素膜通过复合压膜机，复合在PVC塑料薄板上。
4)将复合好的塑料薄板置于分切机上，分切成单人份试剂条，也可制成试剂板结构。
5)将单人份试剂条(试剂板)装入配套的塑料盒内。
6)将塑料盒，干燥剂放入包装袋内，封口，待检。
7)待检品抽检其灵敏度，特异性和稳定性合格出厂。
本发明应用方法(一)胶体金试剂条操作1、样本采集2、样本简单处理3、检测1)在检测前先将样本和试剂条放在室温条件下放置一段时间(10分钟)，使其恢复至室温；2)从铝箔袋中取出检测试剂条，按MARK线下箭头所示的方向将试剂条浸入样本溶液中，液面不得超过MARK线，5-8秒后取出，平放在操作台上；3)5-15分钟内判断结果，30分钟后判断的结果无效。
(二)胶体金试剂板操作1、样本采集2、样本简单处理3、检测1)在检测前先将样本和试剂板放在室温条件下放置一段时间(10分钟)，使其恢复至室温；2)从铝箔袋中取出检测试剂板，平放在操作台上，往加样孔中滴加3滴(约120ul)样品溶液；3)5-15分钟内判断结果，30分钟后判断的结果无效。
(三)结果判断如果样品中没有要检测的小分子物质存在，则检测线处出现红色条带，同时质控线上也出现红色条带，此时结果为阴性；如果样品中存在要检测的小分子物质，则检测线处无条带出现，但质控线上出现红色条带，此时结果为阳性。如果质控线上无红色条带出现，则产品失效。
例如，检测新鲜牛肉中的己烯雌酚激素。
以用己烯雌酚胶体金免疫层析试剂板检测牛肉中的己烯雌酚为例1.样本采集称取5g(±0.1g)新鲜牛肉样品。
2.样本简单处理将样品用小型绞肉机绞碎，放入50ml离心管中加入10ml甲醇，充分搅拌、振荡20min，于3000r/min离心10min，将上清液移出；残渣中再加10ml甲醇，混匀后振荡20min，于3000r/min离心10min，合并上清液备用。
3.检测1)将样品及试剂板放在室温条件下10min，使样品恢复至室温状态。
2)从铝箔袋中取出检测试剂板，平放在操作台上，往加样孔中滴加3滴(约120ml)样品溶液。
3)5-15分钟内判断结果，30分钟后判断的结果无效，判断方法同前。
同样，检测水产品如检测鳗鱼中的恶喹酸；检测农产品如检测花生中的黄曲霉素、蜂蜜产品中的链霉素均可采用本方法。
权利要求
1.胶体金免疫层析法在畜产品检测中的应用。
2.胶体金免疫层析法在水产品检测中的应用。
3.胶体金免疫层析法在农产品检测中的应用。
4.根据权利要求1所述的检测方法的应用，其特征在于胶体金免疫层析法中需检小分子包括各种激素及抗生素。
5.根据权利要求2或3所述的检测方法的应用，其特征在于胶体金免疫层析法中需检小分子包括各种激素、农药、杀虫剂及抗生素。
6.根据权利要求5所述的检测方法的应用，其特征在于所述农药包括有机磷、有机硫、有机氮化合物或氨甲基甲醛酯类化合物。
7.根据权利要求4或5所述的检测方法的应用，其特征在于所述抗生素包括黄曲霉素、链霉素、金霉素、四环素、土霉素、氯霉素等抗生素及其盐酯及制剂。
8.根据权利要求4或5所述的检测方法的应用，其特征在于胶体金免疫层析中需检小分子包括Aristllochiaspp、氯霉素(Chloramphenicol)、氯仿(Chloroform)、Chlorpromazine、秋水仙素(Colchicine)、氨苯砜(Dapsone)、Dimetridazole、甲硝达唑(Metronidazole)、硝基呋喃Nitrofurans(包括呋喃唑酮Furazolidone)、Ronidazole。
9.根据权利要求4或5所述的检测方法的应用，其特征在于胶体金免疫层析中需检小分子还包括兴奋剂类克伦特罗Clenbuterol、沙丁胺醇Salbutamol、希马特罗Cimaterol及其盐、酯及制剂；性激素类己烯雌分Diethylstilbestrol、双烯雌分、己烷雌分及其盐、酯及其制剂；具有雌激素样的物质玉米赤霉醇Zarand、去甲雄三烯醇酮Trenbolone、醋酸甲孕酮Mengestrol Acetate及制剂；氨苯砜(Dapsone)及制剂；硝基呋喃类呋喃唑酮Furazolidone、呋喃苯烯酸钠Nifurstyrenate Sodium及制剂；硝基化合物硝基酚钠Sodium nitrophenolate、硝呋烯腙Nitrovin及制剂；催眠、镇定类安眠酮Methaqualone及制剂；林丹(丙体六六六)Lindane；毒杀芬(氯化烯)Camahechlor；呋喃丹(克百威)Carbofuran；杀虫脎(克死螨)Chlordimeform；双甲醚Amitraz；酒石酸锑钾Antimonypotassium tatrate；锥虫胂胺Tryparsamide；孔雀石绿Malachitegreen；五氯酚酸钠Pentachlorophenol sodium；各种汞制剂氯化亚汞(甘汞)Calomel、硝酸亚汞Mercurous、醋酸汞Mercurousacetate、吡啶基醋酸汞Pyridyl mercurous acetate；性激素类甲基睾九酮Methyltesto sterone、丙酸睾酮、苯丙酸诺龙、苯甲酸雌二醇Estradiol Benzoate及其盐、酯及制剂；催眠、镇静类氯丙臻Chlorpromazine、地西泮(安定)Diazepam及其盐、酯及制剂；硝基咪唑类甲硝唑Metronidazole、地美硝唑Dimetronidazole及其盐、酯及制剂。根据权利要求5所述的检测方法的应用，其特征在于胶体金免疫层析法中需检小分子包括滴滴涕、磺胺类、恶喹酸、多氯联苯、腹泻性贝类毒素(DSP)、麻痹性贝类毒素(DSP)。
全文摘要
本发明涉及胶体金免疫层析法在水、农及畜产品检测领域的应用，属生物医学技术领域。本发明针对水产品、农产品及畜产品检测手断单一、条件受限等问题，将胶体金免疫层析技术引入到水产品、农产品及畜产品的检测领域。具有特异性强、敏感性高、简易快速、费用低廉的等优点，尤其适于各级防疫、检验部门推广使用。
文档编号G01N33/53GK1409113SQ0213358
公开日2003年4月9日 申请日期2002年8月6日 优先权日2002年8月6日
发明者张少恩 申请人:张少恩