专利名称：心肌肌钙蛋白Ⅰ快速定量测定用标准条的制作方法
技术领域：
本实用新型涉及一种新的心肌肌钙蛋白I快速定量测定试剂盒中的标准条构造与加工，应用于酶联测定方法中，使测定更为方便、准确与快速。
背景技术：
心肌缺血性损伤，特别是急性心肌梗塞(AMI)是威协人类生命的主要疾病之一，临床化学家和临床科学家一直努力寻找和探索特异性好、灵敏度高的血清指标。心肌肌钙蛋白I(cardiac troponin I，cTnI)具有高度的心肌特异性，当心肌细胞受损时，血液中cTnI出现时间早，持续时间长，与心肌损伤程度及预后密切相关。因此，它可作为心肌损伤的一种特异性指标，在心脏病的诊断及预后判断中具有十分重要的意义。
心肌肌钙蛋白I测定可分为定性与定量测定两种方法。定性测定主要运用层析原理，制作试纸片完成，其优点是速度快、操作方便，但其缺点是仅能显示阳性、阴性结果，无具体数值，不能观察其动态变化和根据数值判断梗死时间、面积及预后，且敏感性低，易受多种因素干扰。定量测定主要依据酶联免疫与化学发光原理设计，绝大部分运用了二株单克隆抗体(少部分仅用一株单克隆抗体或其中一株用多克隆抗体)，一株单克隆抗体为捕获抗体，另一株单克隆抗体为标记抗体，二株单克隆抗体与标准品或待测样本结合，形成酶联夹心法测定。测定中一般需通过数个从低到高或从高到低的已知标准点来制定标准曲线，再根据标准曲线来精确计算待测样本的心肌肌钙蛋白I的含量。已知标准点加样采取两种方法(1).给一个最高浓度标准点，测定时对倍稀释后对应加入；(2).预先配置各个浓度标准点，测定时对应加入酶联孔内。第一种办法很繁锁，第二种办法增加了试剂盒内瓶子的数量；上述两种办法都增加了用户操作的负担，且标准品打开后易降解，一般仅能使用一次，不能灵活用于临床不同数量标本的测定。
发明内容
本实用新型的目的是提供一种能有效克服上述测定方法的不足，且能快速定量测定人体心肌肌钙蛋白I的含量的标准条，并同时提供一种该标准条的加工方法。
本实用新型的目的是通过如下技术解决方案实现的1、心肌肌钙蛋白I快速定量测定用标准条，采用8-12孔常用酶联条，其特征在于在酶联条的各孔中附着有浓度按常规量递增或递减的心肌肌钙蛋白I混合物。
2、上述的标准条，所述的选定孔为1-6孔或2-7孔。
3、上述的标准条，所述的选定孔中的心肌肌钙蛋白I的含量经加工后为0、0.2、0.4、0.8、1.6、3.2μg/L；或0、3.2、1.6、0.8、0.4、0.2μg/L；或0、0.1、0.3、0.9、2.7μg/L；或0、2.7、0.9、0.3、0.1μg/L。
酶联条各孔中的混合物系经先后联结链亲和素与生物素标记的心肌肌钙蛋白I单克隆抗体或直接联结心肌肌钙蛋白I单克隆抗体后，加入不同浓度的心肌肌钙蛋白I，再经真空干燥、降解后而得。
4、心肌肌钙蛋白I快速定量测定用标准条的加工方法，包括如下工艺步骤方案一(1).采用数条8-12孔常用酶联条(一般用8孔条)，1-6或2-7孔联结好链亲和素(5-20μg/ml)，常用洗液(如PBS，含0.05％Tween-20)洗1-3次。
(2).0.5～1％白蛋白或其它常用封闭液封闭，洗液洗1-3次。
(3).加入1000-3000ng/ml(优选1500ng/ml)含量的生物素标记的捕获单克隆抗体，孵育一定时间60分钟)或4℃过夜，洗液洗1-3次。
(4).酶联条选定孔内加入零浓度与从低到高或从高到低的心肌肌钙蛋白I标准(高出需要浓度(5-20倍)，37℃孵育一定时间(优选60分钟)，洗液洗1-3次。
(5).真空干燥箱内30-45℃(优选37℃)干燥0.5-2小时(优选1小时)。
(6).密封后置37℃水浴降解12-48小时(优选24小时)。
(7).随机取出1条降解后标准条，用未降解的心肌肌钙蛋白I标准品为标准，不同牛血清浓度(20％-40％左右，选定的血清浓度即为试剂盒中的标准稀释液)校标，因不同的血清浓度对标准品有不同的抑制作用，使加工后的标准点成为所需的标准点浓度。
(8).分条密封包装备用。
方案二(1).采用数条8-12孔常用酶联条(一般用8孔条)，1-6或2-7孔联结好抗心肌肌钙蛋白I单克隆抗体(5-20μg/ml)，37℃孵育一定时间(优选60分钟)或4℃过夜，常用洗液(如PBS，含0.05％Tween-20)洗1-3次。
(2).0.5～1％白蛋白或其它常用封闭液封闭，洗液洗1-3次。
(3).酶联条选定孔内加入零浓度与从低到高或从高到低的心肌肌钙蛋白I标准(高出需要浓度(5-20倍)，37℃孵育一定时间(优选60分钟)，洗液洗1-3次。
(4).真空干燥箱内30-45℃(优选37℃)干燥0.5-2小时(优选1小时)。
(5).密封后置37℃水浴降解12-48小时(优选24小时)。
(6).随机取出1条降解后标准条，用未降解的心肌肌钙蛋白I标准品为标准，不同牛血清浓度(20％-40％左右，选定的血清浓度即为试剂盒中的标准稀释液)校标，因不同的血清浓度对标准品有不同的抑制作用，使加工后的标准点成为所需的标准点浓度。
(7).分条密封包装备用。
本发明的有益效果是标准条内的标准品性能极其稳定，用户使用极其方便、准确与快速，且试剂盒内配置多条标准条，可灵活分次用于临床不同数量标本的测定。
图1为本实用新型标准条的结构示意图。
图2为本实用新型另一种标准条的结构示意图。
图中1.标准条标记，2.非标准条加工孔，3.标准条加工孔(图1为1-6孔、图2为2-7孔)。
具体实施方式
标准条加工步骤如下方案一如图2所示(1).数条8孔常用酶联条2-7孔联结好链亲和素(10μg/ml)，洗液(PBS，含0.05％Tween-20)洗2次。
(2).0.5～1％白蛋白封闭，洗液洗2次。
(3).加入1500ng/ml生物素标记的捕获单克隆抗体，孵育60分钟)4℃过夜，洗液洗3次。
(4).酶联条2-7孔内加入0、2、4、8、16、32μg/L的心肌肌钙蛋白I标准，37℃孵育60分钟，洗液洗3次。
(5).真空干燥箱内37℃干燥1小时。
(6).密封后置37℃水浴降解24小时。
(7).每块随机取出1条降解后标准条，用未降解的心肌肌钙蛋白I标准品为标准，不同牛血清浓度(20％-40％左右，选定的血清浓度即为试剂盒中的标准稀释液)校标，因不同的血清浓度对标准品有不同的抑制作用，使加工后的标准点成为所需的标准点浓度，同时注意检测其均一性、准确性及标准曲线的质量。
(8).分条密封包装备用。
方案二如图2所示(1).数条8孔常用酶联条2-7孔联结好抗心肌肌钙蛋白I单克隆抗体(10μg/ml)，孵育60分钟或4℃过夜，洗液洗3次。
(2).酶联条2-7孔内加入0、2、4、8、16、32μg/L的心肌肌钙蛋白I标准，37℃孵育60分钟，洗液洗3次。
(3).真空干燥箱内37℃干燥1小时。
(4).密封后置37℃水浴降解24小时。
(5).每块随机取出1条降解后标准条，用未降解的心肌肌钙蛋白I标准品为标准，不同牛血清浓度(20％-40％左右，选定的血清浓度即为试剂盒中的标准稀释液)校标，因不同的血清浓度对标准品有不同的抑制作用，使加工后的标准点成为所需的标准点浓度，同时注意检测其均一性、准确性及标准曲线的质量。
(6).分条密封包装备用。
权利要求1.心肌肌钙蛋白I快速定量测定用标准条，采用8-12孔常用酶联条，其特征在于在酶联条的各孔中附着有浓度按常规量递增或递减的心肌肌钙蛋白I混合物。
2.根据权利要求1所述的标准条，其特征在于上述的标准条的选定孔为1-6孔或2-7孔。
3.根据权利要求1所述的标准条，其特征在于上述的标准条的选定孔中心肌肌钙蛋白I的含量为0、0.2、0.4、0.8、1.6、3.2μg/L；或0、3.2、1.6、0.8、0.4、0.2μg/L；或0、0.1、0.3、0.9、2.7μg/L；或0、2.7、0.9、0.3、0.1μg/L。
专利摘要本实用新型涉及一种新的心肌肌钙蛋白Ⅰ快速定量测定用标准条，应用于酶联测定方法中，该标准条，采用8－12孔常用酶联条，在酶联条的各孔中附着有浓度按常规量递增或递减的心肌肌钙蛋白Ⅰ混合物。它利用心肌肌钙蛋白Ⅰ经一定程序加工、干燥、降解后极其稳定的特性，把零浓度与数个从低到高或从高到低的标准点浓度预先加工在数条酶联条的反应孔内(此酶联条称为标准条)，并应用于心肌肌钙蛋白Ⅰ快速定量测定试剂盒，使用户使用极其方便、准确与快速，且试剂盒内配置多条标准条，可灵活分次用于临床不同数量标本的测定。
文档编号G01N33/543GK2682417SQ0327840
公开日2005年3月2日 申请日期2003年9月9日 优先权日2003年9月9日
发明者苏恩本, 刘希胜, 苏恩奎 申请人:苏恩本, 南京强欣生物技术有限责任公司