专利名称：己烯雌酚分子印迹固相萃取小柱及其制备方法
技术领域：
本发明涉及分析化学领域，具体地说是应用于测定动物性食品中人工合成雌激素己烯雌酚(DES)残留量的样品溶液的高选择性纯化、富集的己烯雌酚分子印迹固相萃取小柱及其制备方法。
背景技术：
己烯雌酚(Diethylstilbestrol，DES)为一种具有酚羟基结构的人工合成雌激素，欧美等许多国家禁止将其用于动物饲料中。由于己烯雌酚的滥用，对动物性食品中己烯雌酚的残留检测引起了国内外的高度重视。若按规定量，动物组织和体液中己烯雌酚的残留状况为在肌肉、脂肪中的浓度是很低的，通常＜0.5μg/kg，肝中的浓度＜2μg/kg，排泄物和胆汁中浓度虽然最高，但也只有0.5～20μg/kg。为了使低浓度样品在检测器上有影响，有必要对样品进行DES的富集和浓缩。通常条件下，用有机溶液提取DES能得到很好的回收率，但同时也提取了大量的脂溶性物质，不易与DES分离，想用NaOH萃取，但NaOH又与脂肪酸发生皂化反应。直接用稀的NaOH溶液提取又得不到好的回收率。固相萃取方法是一种简单、方便、适用的预处理。但是C18固相萃取小柱不能很好的分离DES和脂肪。
发明内容
本发明的目的在于提供一种可简单、快速、高效测定动物性食品中人工合成雌激素己烯雌酚(DES)残留量的样品溶液的高选择性纯化和富集的己烯雌酚分子印迹固相萃取小柱及其制备方法。
本发明的技术方案是这样实现的
(一)己烯雌酚分子印迹固相萃取小柱是用研磨到10～60μm的己烯雌酚(DES)印迹分子聚合物0.2～1.0g填充在聚丙烯外壳的小柱内。
(二)己烯雌酚分子印迹固相萃取小柱的制备方法包括以下步骤(1).己烯雌酚(DES)印迹分子聚合物的制备将聚合原料模板分子已烯雌酚Diethylstilbestrol(DES)、功能单体甲基丙烯酸(MAA)、交联剂二甲基丙烯酸乙二醇酯(EDMA)，按模板分子∶功能单体∶交联剂＝1～5∶4～10∶20～100，依次加入到圆底烧瓶中，再加入引发剂偶氮二异丁腈(AIBN)、致孔剂乙醇、氯仿、乙醚等，超声5～30min，通氮气5～40min，真空，在40～90℃水浴中反应5～48h；(2)将印迹分子聚合物研磨到10～60μm左右，用V(醋酸)/V(乙醇)＝5～30∶95～70冲洗，丙酮沉降，去除细小的颗粒；(3)称量分子印迹聚合物的质量0.2～1.0g；(4)填充在聚丙烯外壳的小柱内；由于己烯雌酚(DES)印迹分子聚合物是一种有固定孔穴大小和形状及有确定排列的功能基团的交联聚合物，它对DES模板分子的立体结构具有“记忆”功能，可应用于用于测定动物性食品中人工合成雌激素己烯雌酚(DES)残留量的样品溶液的高选择性纯化、富集。
本印迹柱较普通溶剂萃取法、C18固相萃取法更为简单、快速、高效。选择聚丙烯材料外壳的小柱有利于最后获得的DES固相萃取小柱可于微波腔中进行在线的快速净化、洗提，并与色谱分离系统形成一体化联机系统。
具体实施例方式
以下通过具体实施方式
对本发明作进一步说明。
实施例1
(一).己烯雌酚(DES)印迹分子聚合物的制备反应原料列表分子量反应用量反应试剂(g/mol) 摩尔量(mmol) 质量(g) 实际用量Diethylstilbestrol268.40.500.134 270mgDES甲基丙烯酸 MAA68.012.0 0.136 0.136ml二甲基丙烯酸乙二醇酯198.22 10.01.687 2.0mlEDMA偶氮二异丁腈 AIBN 164.21 0.1219.7 19.7g乙腈 6ml致氯仿 6ml孔乙醚 6ml剂上述三种液体 6ml将反应试剂Diethylstilbestrol(MES)、甲基丙烯酸(MAA)、二甲基丙烯酸乙二醇酯(EDMA)、偶氮二异丁腈(AIBN)、致孔剂按上述表格的用量依次加入到圆底烧瓶中，超声15min，通氮气5min，密封，60℃水浴，24h。
(二)、己烯雌酚分子印迹固相萃取小柱的制备将印迹分子聚合物研磨到26μm左右，用V(醋酸)/V(乙醇)＝10∶90冲洗，丙酮沉降，去除细小的颗粒，得到粒径在某一区间内3、称量印迹分子聚合物的质量0.2～1.0g；4、将印迹分子聚合物填充在固相小柱内(三)己烯雌酚分子印迹固相萃取小柱用于测定动物性食品中人工合成雌激素己烯雌酚(DES)残留量的样品溶液的高选择性纯化、富集。
具体操作如下(1)先将小柱用甲醇冲洗，(2)加入样品溶液1.5ml；(3)洗脱溶液为甲醇、乙醇和水的混合溶液，有机溶剂与水的比例为0.5～4∶1。洗脱液体积范围在2～10个小柱体积。
权利要求
1.己烯雌酚分子印迹固相萃取小柱，其特征在于是将研磨到10～60μm的己烯雌酚(DES)印迹分子聚合物0.2～1.0g，填充在聚丙烯外壳的小柱内。
2.己烯雌酚分子印迹固相萃取小柱的制备方法，其特征在于包括以下步骤(1).己烯雌酚(DES)印迹分子聚合物的制备将聚合原料模板分子已烯雌酚Diethylstilbestrol(DES)、功能单体甲基丙烯酸(MAA)、交联剂二甲基丙烯酸乙二醇酯(EDMA)，按模板分子∶功能单体∶交联剂＝1～5∶4～10∶20～100，依次加入到圆底烧瓶中，再加入引发剂偶氮二异丁腈(AIBN)、致孔剂乙醇、氯仿、乙醚等，超声5～30min，通氮气5～40min，真空，在40～90℃水浴中反应5～48h；‘(2)将印迹分子聚合物研磨到10～60μm左右，用V(醋酸)/V(乙醇)＝5～30∶95～70冲洗，丙酮沉降，去除细小的颗粒；(3)称量分子印迹聚合物的质量0.2～1.0g；(4)填充在聚丙烯外壳的小柱内。
全文摘要
本发明公开了应用于测定动物性食品中人工合成雌激素己烯雌酚(DES)残留量的样品溶液的高选择性纯化、富集的己烯雌酚分子印迹固相萃取小柱及其制备方法。以己烯雌酚作分子模板制备分子印迹聚合物，它是一种有固定孔穴大小和形状及有确定排列功能基团的交联聚合物，它对己烯雌酚模板分子的立体结构具有“记忆”功能，用此材料装填于聚丙烯小柱中，得到己烯雌酚分子印迹固相萃取小柱。用于残留分析样品溶液中己烯雌酚的高选择性分离富集。本印迹柱较普通溶剂萃取法、C18固相萃取法更为简单、快速、高效。
文档编号G01N30/08GK1601272SQ20041004686
公开日2005年3月30日 申请日期2004年10月26日 优先权日2004年10月26日
发明者陈波, 马金余, 刘程 申请人:湖南纽尔科技有限公司