专利名称：一种流感a、b病毒抗原胶体金联合检测试纸条的制作方法
技术领域：
本发明属于生物检测领域，具体涉及一种流感A、B病毒抗原检测试纸条及其应用。
背景技术：
目前流感A、B病毒的检测以组织培养、双份血清的抗体检测作为“金标准”，但该方法操作繁琐复杂，时间长，对流感的及时发现、及时预报和预防起不到指导作用，但对分析病毒种群的遗传学和抗原性变化以及发现新病毒仍具有重要作用。流感快速检测常用的方法有直接、间接荧光法(IFA/DFA)、酶免疫测定法(EIA)、酶活性测定法(神经氨酸酶测定)、APAAP桥联酶标检测法、核酸扩增法(PCR)，但均存在需要昂贵的仪器、操作复杂、时间长、需专业人员等问题，不能同时检测流感A、B病毒两种抗原。
发明内容
本发明的目的是提供一种方便、快捷地，能够同时检测流感A、流感B两种病毒抗原的试纸条，发明人通过在硝酸纤维膜(NC膜)上同时包被流感A单克隆抗体FluA-McAb、流感B单克隆抗体FluB-McAb和抗鼠IgG三个条带，并应用结合胶体金标记的FluA-McAb、FluB-McAb两种抗体，实现了在一个试剂条上同时检测两种抗原的目的，完成了本发明。克服了现有技术操作复杂、繁琐、时间长、需要仪器、不能同时检测两种抗原的不足。
本发明提供了一种检测试纸条，其特征在于，它包含(1)同时包被流感A单克隆抗体FluA-McAb、流感B单克隆抗体FluB-McAb和质控抗鼠IgG三个条带的硝酸纤维膜；
(2)含有胶体金标记FluA-McAb和胶体金标记FluB-McAb的玻璃纤维膜。
优选的本发明所述试纸条，它还包含(1)反应支持物；(2)吸水垫；(3)金标抗体保护膜，同时具有吸水功能。
其中反应支持物优选PVC板；吸水垫优选滤油纸；金标抗体保护膜优选用聚脂膜、玻璃纤维或滤纸纤维。
本发明还公开了所述试纸条在检测流感A、流感B两种病毒抗原中的应用。
本发明的技术方案是采用纯化的流感A、B单克隆抗体(FluA、B-McAb)和抗鼠IgG分别固相于硝酸纤维膜上(NC膜)，结合胶体金标记的FluA、B-McAb，应用膜层析双抗体夹心法的原理检测鼻咽分泌物中的流感A、B病毒。
本发明的有益效果是一份标本，一个试纸条同时能检测流感A、B两种病毒抗原。省去二次检测的手续，方便、快速、简捷，不需特殊仪器设备，不需专业培训，结果清晰易辨，操作简单，易于推广，适合基层，适合于突发事件的大批量检测，适合流调，对流感的诊断起到辅助检测作用。
图1A本发明试纸条的正面示意图；B本发明试纸条的侧面示意图；1吸水垫；2硝酸纤维膜(A包被FluA-McAb的条带；B包被FluB-McAb的条带；C包被抗鼠IgG的质控条带)；3含有胶体金标记FluA-McAb和胶体金标记FluB-McAb的玻璃纤维膜；4金标抗体保护膜；5反应支持物。
图2检测结果示意图；依次为流感A、B阳性；流感A阳性；流感B阳性；阴性；无效。
具体实施例方式
实施例1流感A、B病毒抗原联合检测试纸条(参见图1)反应支持物为6.2cm×0.4cm PCV板；吸水垫为2cm×0.4cm的滤油纸；1.8cm×0.4cm的硝酸纤维膜依次包被抗鼠IgG，FluA-McAb，FluB-McAb；含有0.4cm×0.4cm胶体金标记的FluA、B-McAb玻璃纤维膜；金标抗体保护膜为2.7cm×0.4cm的聚脂膜；即形成了流感A、B病毒抗原联合检测试纸条。
实施例2检测方法(参见图2)留取鼻咽部分泌物，放入装有细胞裂解液的小瓶内，将实施例1试纸条“4”处插入瓶内(直至观察完结果后方可取出试纸条)，样品中的液体吸起上行，10-15分钟判读结果如含有流感A或B抗原，则与试纸条上胶体金标记的流感A或B-McAb形成相应的复合物，上行与包被在硝酸纤维膜上的流感A或B-McAb结合，形成红色线条，即在“A”或“B”处形成红色条带。
无论是否含有相对应的抗原，胶体金标记McAb继续向上爬行与包被在膜上的抗鼠IgG形成红色沉淀线，即在“C”处形成红色条带。此线是质控线，如胶体金失效，此线就不会出现，说明试纸条失效。
阳性结果会出现2条或3条红色沉淀线，阴性结果出现1条红色沉淀线，如不出现线条说明试纸条失效。
实验例1临床检测结果经检测1005例流感样病人样本，流感A、B病毒同时感染，出现A、B、C三条带1例，占0.01％；流感A病毒感染，出现A、C两条带374例，占37.2％；流感B病毒感染，出现B、C两条带413例，占41.1％。与目前常规应用的间接荧光法相比较，灵敏度99.8％，特异度100％。
权利要求
1.一种检测试纸条，其特征在于，它包含(1)同时包被流感A单克隆抗体FluA-McAb、流感B单克隆抗体FluB-McAb和质控抗鼠IgG三个条带的硝酸纤维膜；(2)含有胶体金标记FluA-McAb和胶体金标记FluB-McAb的玻璃纤维膜。
2.根据权利要求1所述试纸条，它还包含(1)反应支持物；(2)吸水垫；(3)金标抗体保护膜。
3.根据权利要求2所述试纸条，其中反应支持物选用PVC板。
4.根据权利要求2所述试纸条，其中吸水垫选用滤油纸。
5.根据权利要求2所述试纸条，其中金标抗体保护膜选用聚脂膜、玻璃纤维或滤纸纤维。
6.权利要求1-5之任一所述试纸条在检测流感A、流感B两种病毒抗原中的应用。
全文摘要
本发明提供了一种能同时检测流感A、B病毒抗原的快速检测试纸条。它是在同一硝酸纤维膜(NC膜)上，分别包被流感A、流感B单克隆抗体(FluA－McAb、FluB－McAb)及抗鼠IgG，结合胶体金标记的FluA－McAb、FluB－McAb，应用膜层析双抗体夹心法，同时检测标本中流感A、B两种病毒抗原。应用本发明试纸条检测，减少了许多繁琐的程序，且方便快捷，10－15分钟判读结果，不需特殊仪器也不需专业培训，适合医院等基层单位，适合大规模的流行病学调查及应付突发事件。
文档编号G01N33/547GK1904615SQ200510012268
公开日2007年1月31日 申请日期2005年7月28日 优先权日2005年7月28日
发明者刘明 申请人:北京庄笛浩禾生物医学科技有限公司