专利名称：一种监测叶绿素a的方法
技术领域：
本发明涉及一种监测方法，特别是涉及一种监测叶绿素a的方法，属于环保监测技术。
背景技术：
藻类具有叶绿体，含有叶绿素a，b，c，d，各类胡萝卜素及叶黄素等，能够进行光合作用。叶绿素a包含在所有的藻类之中，约占藻体有机物干重的1％-2％。在光合作用过程中，叶绿素b，c，d所吸收的光能都要传递给叶绿素a，因而叶绿素a是间接衡量藻类生物量的较理想指标。在利用化学氧化剂除藻时，不宜采用计数法。大多数强氧化剂能够穿透藻类细胞壁，快速扩散至藻细胞内部氧化叶绿素，使藻类代谢终止，并死亡。由于氧化剂直接作用于叶绿素，使得叶绿素a法更具有实际意义。但药品在常用剂量范围内，不足以使藻体完全溶裂，因而藻细胞减少有限，镜检可见完整的硅藻细胞结构。对于群体藻类较多的水体而言，氧化剂还会破坏细胞间的胶质，导致藻细胞分散开来，给计数工作带来极大困难和误差。现有监测叶绿素a的方法主要有分光光度法和荧光光度法。其中分光光度法监测叶绿素a的机理是由于在叶绿素a的吸收光谱曲线上存在最大的吸收峰663nm，故可用分光光度测定其含量。在实际操作中，由于其操作步骤的缺陷，致使试验的进展缓慢，无法满足日益严格的环保监测需要。
发明内容
本发明的目的在于克服现有技术存在的上述不足，在通过大量的试验后，对现有的分光光度法进行了改进，给出了一种监测叶绿素a的方法，这种新的监测方法提高了试验的效率，加快了试验的进程。具有操作方便、快捷等优点。
本发明给出的技术方案是这种监测叶绿素a的方法包括有下列步骤组成(1).采集水样每天须在同一时间，同一取样点，液面下同一深度采集水样；(2).过滤水样在避光条件下进行抽滤，在蔡氏滤器上装好滤膜，将刚采集来的水样进行稀释，取出100mL稀释完的水样进行抽滤，抽滤时，抽滤的压力不大于150mm汞柱，在水样被抽干前加入0.2mLMgCO3悬液，直至抽干水样；(3).提取将滤膜放于研钵内，加2～3mL90％的丙酮溶液，匀浆，然后用移液管将匀浆移入带刻度的玻璃离心管中，用90％丙酮冲洗两次，最后补加90％丙酮于离心管中，使管内总体积为10mL，塞紧塞子并注意遮光，充分振荡，放入温度为4C°冰箱内避光提取18～24h；(4).离心测定光密度提取完毕后，置离心管于3500r/min的台式离心机上，进行对称布置离心10min取出离心管，用移液管将上清液移入刻度离心管中，塞上塞子，3500r/min再离心10min；用移液管将提取液移入1.5cm比色皿中，将比色皿放入分光光度计4中，以体积分数90％的丙酮溶液作为空白，待提取液稳定20min后，分别在750nm、663nm、645nm、630nm波长下测提取液的光密度(OD)；(5).最后按下列的叶绿素a浓度计算公式，计算样品提取液中的叶绿素a浓度Pa为Pa(ug/L)＝11.64*(OD663-OD750)-2.16*(OD645-OD750)+0.1*(OD630-OD750)在本发明给出的上述技术方案中，所采用的设备、试剂、计算公式均为现有技术。
与现有技术相比，本发明的有益效果是提高了试验的效率，加快了试验的进程，还具有操作方便、快捷等特点。
图1为本发明给出实施例的流程图；图2为在玻璃离心管中，叶绿素a值随稳定时间的变化情况；图3为在塑料离心管中，叶绿素a值随稳定时间的变化情况。
具体实施例方式
如图1所示，这种监测叶绿素a的方法有(1).采集水样每天须在同一时间，同一取样点1液面下同一深度采集水样；(2).过滤水样在避光条件下进行抽滤，在蔡氏滤器上装好滤膜，将刚采集来的水样进行稀释，取出100mL稀释完的水样进行抽滤，抽滤时，抽滤的压力不大于150mm汞柱，在水样被抽干前加入0.2mLMgCO3悬液，直至抽干水样；(3).提取将滤膜放于研钵内，加2～3mL90％的丙酮溶液，匀浆，然后用移液管将匀浆移入带刻度的玻璃离心管中，用90％丙酮冲洗两次，最后补加90％丙酮于离心管中，使管内总体积为10mL，塞紧塞子并注意遮光，充分振荡，放入温度为4C°冰箱3内避光提取18～24h；(4).离心测定光密度提取完毕后，置离心管于3500r/min的台式离心机2上，进行对称布置离心10min取出离心管，用移液管将上清液移入刻度离心管中，塞上塞子，3500r/min再离心10min；用移液管将提取液移入1.5cm比色皿中，将比色皿放入分光光度计4中，以体积分数90％的丙酮溶液作为空白，待提取液稳定20min后，分别在750nm、663nm、645nm、630nm波长下测提取液的光密度(OD)；(5).最后按下列的叶绿素a浓度计算公式，计算样品提取液中的叶绿素a浓度Pa为
Pa(ug/L)＝11.64*(OD663-OD750)-2.16*(OD645-OD750)+0.1*(OD630-OD750)从将比色皿放入分光光度计4中开始计时，到读数的那一刻称为稳定时间。从图2～图3中可以看出，叶绿素a随着稳定时间的增长，逐渐趋于稳定。由于丙酮本身具有挥发性，稳定时间如果一再延长，一旦被检测液的液面高度低于比色皿高度的2/3，会使测量结果出错；样品提取液中的叶绿素a浓度Pa为Pa(ug/L)＝11.64*(OD663-OD750)-2.16*(OD645-OD750)+0.1*(OD630-OD750)从叶绿素a的计算公式中，可以看出叶绿素a的值与3个差值有关，要求D663，D645，D630的光度值都比D750处的光度值大。
结合试验内容，可以得出这样的结论当稳定时间达到20min时，读数趋于稳定。
从图中可以看出，在0，5，10，15，20，25这六个时间点上，采用塑料离心管所测得的叶绿素a值，始终比采用玻璃离心管测得的值大。因为丙酮对塑料具有腐蚀性，使得从离心管中提取液体中，搀杂了塑料的成分，致使测量结果偏大。
权利要求
1.一种监测叶绿素a的方法，其特征在于包括有下列步骤组成(1).采集水样每天须在同一时间，同一取样点，液面下同一深度采集水样；(2).过滤水样在避光条件下进行抽滤，在蔡氏滤器上装好滤膜，将刚采集来的水样进行稀释，取出100mL稀释完的水样进行抽滤，抽滤时，抽滤的压力不大于150mm汞柱，在水样被抽干前加入0.2mLMgCO3悬液，直至抽干水样；(3).提取将滤膜放于研钵内，加2～3mL90％的丙酮溶液，匀浆，然后用移液管将匀浆移入带刻度的玻璃离心管中，用90％丙酮冲洗两次，最后补加90％丙酮于离心管中，使管内总体积为10mL，塞紧塞子并注意遮光，充分振荡，放入温度为4℃冰箱内避光提取18～24h；(4).离心测定光密度提取完毕后，置离心管于3500r/min的台式离心机上，进行对称布置离心10min取出离心管，用移液管将上清液移入刻度离心管中，塞上塞子，3500r/min再离心10min；用移液管将提取液移入1.5cm比色皿中，将比色皿放入分光光度计4中，以体积分数90％的丙酮溶液作为空白，待提取液稳定20min后，分别在750nm、663nm、645nm、630nm波长下测提取液的光密度(OD)；(5).最后按下列的叶绿素a浓度计算公式，计算样品提取液中的叶绿素a浓度Pa为Pa(ug/L)＝11.64*(OD663-OD750)-2.16*(OD645-OD750)+0.1*(OD630-OD750)。
全文摘要
一种监测叶绿素a的方法，属于环保监测技术，是对现有的分光光度法的改进，包括有下列步骤组成(1)采集水样；(2)过滤水样；(3)提取；(4)离心测定光密度；(5)最后按给出的叶绿素a浓度计算公式，计算样品提取液中的叶绿素a浓度。与现有技术相比，本发明提高了试验的效率，加快了试验的进程，还具有操作方便、快捷等特点。
文档编号G01N1/34GK1793846SQ20051004808
公开日2006年6月28日 申请日期2005年12月20日 优先权日2005年12月20日
发明者傅金祥, 薛飞 申请人:沈阳建筑大学