专利名称：一种炭疽芽孢杆菌荚膜抗原胶体金检测试纸条的制作方法
技术领域：
本发明属于生物检测领域，具体涉及一种炭疽芽孢杆菌荚膜抗原胶体金检测试纸条及其应用。
背景技术：
炭疽(anthrax)是由炭疽芽孢杆菌(Bacillus anthrax)引起的一种人畜共患急性传染病。牧民、农民、皮毛和屠宰工作者易受感染。
80年代以来，在炭疽实验诊断技术方面有了长足的发展，常用的抗体检测方法有ELISA法、酶标-SPA法、PCR法、荧光免疫法等。
但这些检测技术与实际需求仍有不少的差距，主要表现在需要特殊的仪器设备，并且要求专业技术人员在专业的实验室进行检测，操作复杂，耗时长，不适宜于现场即时检测。
发明内容
(一)要解决的技术问题本发明的目的是提供一种方便、快捷的检测炭疽芽孢杆菌荚膜抗原的试纸条，发明人通过在硝酸纤维膜(NC膜)上同时包被抗荚膜抗原抗体(单克隆抗体或多克隆抗体)和抗鼠IgG二条带，并应用结合胶体金标记的抗荚膜抗原单克隆抗体，实现了用试纸条快速检测炭疽芽孢杆菌荚膜抗原的目的，完成了本发明。克服了现有技术操作复杂、耗时长、需要特殊仪器和专业操作人员的不足。
(二)技术方案本发明提供了一种检测试纸条，其特征在于，它包含(1)包被炭疽荚膜抗体(单克隆抗体或多克隆抗体)和质控抗鼠IgG二条带的硝酸纤维膜；(2)含有胶体金标记炭疽荚膜单克隆抗体的玻璃纤维膜。
优选的本发明所述试纸条，它还包含
(1)反应支持物；(2)吸水垫；(3)金标抗体保护膜。
其中反应支持物优选PVC板；吸水垫优选滤油纸；金标抗体保护膜，同时具有吸水功能，优选用聚脂膜、玻璃纤维或滤纸纤维。
本发明还公开了所述试纸条在检测炭疽芽孢杆菌荚膜抗原中的应用。
本发明的检测样本可以是皮肤损害的分泌物、痰、呕吐物、排泄物、血液、脑脊液。
本发明的技术方案是采用纯化的炭疽芽孢杆菌荚膜抗体(单抗或多抗)和抗鼠IgG分别固相于硝酸纤维膜上(NC膜)，结合胶体金标记的荚膜单抗，应用膜层析双抗体夹心法的原理检测样本中炭疽芽孢杆菌。
(三)有益效果本发明的有益效果是用试纸条检测炭疽芽孢杆菌荚膜抗原，可以提供炭疽感染的直接证据，对炭疽的诊断起到辅助检测作用。该方法简便、快捷、准确，不需特殊仪器设备，不需专业培训，检测结果清晰易辨，操作简单，易于推广，适合医院等基层单位的即时检测和大规模的流行病学调查。
图1A本发明试纸条的正面示意图；B本发明试纸条的侧面示意图；1吸水垫；2硝酸纤维膜(T包被炭疽芽孢杆菌荚膜抗体条带；C包被抗鼠IgG的质控条带)；3含有胶体金标记的荚膜抗原单抗的玻璃纤维膜；4金标抗体保护膜；5反应支持物。
图2检测结果示意图；从左至右依次为T、C两条线显色为阳性；C一条线显色为阴性；T、C两条线未显色为无效。
具体实施例方式
实施例1炭疽芽孢杆菌胶体金检测试纸条(参见图1)反应支持物为6.5cm×0.4cm PCV板；吸水垫为2cm×0.4cm的滤油纸；2cm×0.4cm的硝酸纤维膜依次包被抗鼠IgG、炭疽芽孢杆菌荚膜抗体；含有0.4cm×0.4cm胶体金标记的荚膜抗原单抗的玻璃纤维膜；金标抗体保护膜为2.5cm×0.4cm的聚脂膜；即形成了炭疽芽孢杆菌荚膜抗原胶体金检测试纸条。
实施例2炭疽芽孢杆菌胶体金检测试纸条(参见图1)反应支持物为6.5cm×0.4cm PCV板；吸水垫为2cm×0.4cm的滤油纸；2cm×0.4cm的硝酸纤维膜依次包被抗鼠IgG、炭疽芽孢杆菌荚膜抗体；含有0.4cm×0.4cm胶体金标记的荚膜抗原单抗的玻璃纤维膜；金标抗体保护膜为2.5cm×0.4cm的玻璃纤维；即形成了炭疽芽孢杆菌荚膜抗原胶体金检测试纸条。
实施例3炭疽芽孢杆菌胶体金检测试纸条(参见图1)反应支持物为6.5cm×0.4cm PCV板；吸水垫为2cm×0.4cm的滤油纸；2cm×0.4cm的硝酸纤维膜依次包被抗鼠IgG、炭疽芽孢杆菌荚膜抗体；含有0.4cm×0.4cm胶体金标记的荚膜抗原单抗的玻璃纤维膜；金标抗体保护膜为2.5cm×0.4cm的滤纸纤维；即形成了炭疽芽孢杆菌荚膜抗原胶体金检测试纸条。
实施例4检测方法(参见图2)按照炭疽诊断标准国家标准(GB17015-1997)实验室检测的有关规定，留取皮肤损害的分泌物，放入装有细胞裂解液的小瓶内，将实施例1试纸条“4”处插入瓶内(直至观察完结果后方可取出试纸条)，样品中的液体吸起上行，10-15分钟判读结果如样本中含有炭疽芽孢杆菌荚膜抗原，则与试纸条上胶体金标记的荚膜抗原单克隆抗体形成相应的复合物，上行与包被在硝酸纤维膜上的荚膜抗体结合，聚集而成红色线条，即在“T”处形成红色条带。
无论是否含有相对应的抗原，胶体金标记的单克隆抗体继续向上爬行与包被在膜上的抗鼠IgG形成红色沉淀线，即在“C”处形成红色质控条带。此线不出现，说明试纸条失效。
实验例临床检测结果经检测70例疑似病人的皮肤损害的分泌物，与目前应用ELISA法(T1)相比较，16例T、C两条带显色，具体结果见下表。
ELISA法(T1)与试纸条法(T2)对比实验统计表
权利要求
1.一种检测试纸条，其特征在于，它包含(1)包被炭疽荚膜抗体和质控抗鼠IgG二条带的硝酸纤维膜；(2)含有胶体金标记炭疽荚膜单克隆抗体的玻璃纤维膜。
2.根据权利要求1所述试纸条，包被在硝酸纤维膜上的炭疽荚膜抗体为单克隆抗体或多克隆抗体。
3.根据权利要求1所述试纸条，它还包含(1)反应支持物；(2)吸水垫；(3)金标抗体保护膜。
4.根据权利要求3所述试纸条，其中反应支持物选用PVC板。
5.根据权利要求3所述试纸条，其中吸水垫选用滤油纸。
6.根据权利要求3所述试纸条，其中金标抗体保护膜选用聚脂膜、玻璃纤维或滤纸纤维。
7.权利要求1-6之任一所述试纸条在检测炭疽芽孢杆菌荚膜抗原中的应用。
全文摘要
本发明提供了一种能检测炭疽芽孢杆菌荚膜抗原的胶体金检测试纸条。它是在硝酸纤维膜(NC膜)上包被炭疽芽孢杆菌荚膜抗原抗体(单抗或多抗)及抗鼠IgG，结合胶体金标记的荚膜抗原单克隆抗体，应用膜层析双抗体夹心法制成。本发明用于检测标本中炭疽芽孢杆菌荚膜抗原，对炭疽感染的诊断可起到辅助作用。应用本发明试纸条检测，减少了繁琐的程序，方便快捷，10－15分钟判读结果，不需特殊仪器，也不需专业培训，适合医院等基层单位的即时检测和大规模的流行病学调查。
文档编号G01N33/558GK1963514SQ20051008685
公开日2007年5月16日 申请日期2005年11月10日 优先权日2005年11月10日
发明者刘明 申请人:北京庄笛浩禾生物医学科技有限公司