专利名称：利用6－姜酚肟测定生姜及其制品中6－姜酚的方法
技术领域：
本发明涉及药食兼用材料——生姜及其制品中有效成分的测定方法。
背景技术：
生姜(Zingiber officinal Roscoe)既是常用的蔬菜、调味品，又是常用的中药材(包括鲜姜汁、生姜皮，以及炮制后的煨姜、姜炭等都是中医治病常用的药物)，能够疆御百邪，有发表、散寒、止呕、化痰等功效。因其“可蔬、可和、可果，可药，其利之博矣”，《神龙本草经》将其列为上品，大陆药典和台湾药典均收载的姜流浸膏、姜酊目前仍然是广为应用的胃病良药。我国民间流传有“晨吃三片姜，赛过人参汤”、“晚吃萝卜早吃姜，不用医生开药方”等谚语。正是对于这些药食经验的总结，我国卫生部将生姜规定为药食兼用资源。现代科学研究证实了生姜的这些保健或药效作用都与姜酚有直接或间接的关系。20世纪80年代，国外的药理试验已经证实，分离出的粗姜酚能刺激粘膜，促进胃液分泌，在肠道中能抑制异常发酵，促进气体排放，对大脑皮质和血管运动中枢有兴奋作用，能增进血液循环。最新的实验和临床观察证实姜酚有强心、降血脂、防治心血管疾病、抗氧化、抗衰老、抗疲劳、抗肿瘤、止呕、止晕、抑制前列腺素合成、防腐杀虫、驱虫、护肤美容等多方面的生物活性。根据姜酚的这些生物活性，可以开发适用于不同人群的多种调味品、保健食品、药品、化妆品，还可以开发绿色农药等等。
姜酚(gingerol)是生姜中的辣味物质，也是生姜的主要生物活性成分，它包括6-姜酚(1)，8-姜酚(2)，10-姜酚(3)，12-姜酚(4)等十余种成分(见图1)，这些成分的性质、结构是类似的，其分子结构中都有C3-羰基和C5-羟基，这使得姜酚的化学性质极不稳定。例如，在酸性条件下，C4的活泼氢极易与C5的羟基一起脱水形成姜脑(Shogaol)；在加热或碱性条件下，C4和C5间的碳碳键断裂形成姜酮(Zingerone)和相应的醛(见图1)。另外，姜酚的含量少，仅为生姜干重的2％-3％。由于生姜中姜酚稳定性差、种类多、含量少，因此，不易于测定。我国还没有一个完美的国家标准对生姜及其制中的姜酚进行准确的测定。
在科学研究中，人们应用滴定法、光度法、溶出伏安法测定时间及其制品中姜酚的含量，但这些方法都是测定的姜酚总量，且因受生姜或生姜制品中本底物质的影响，使得测定结果常常偏高，有时与姜酚的实际含量相差甚远。其分析结果不能满足以姜酚为主要有效成分生产药品和保健食品等产品的要求。
由于姜酚本身沸点高，难以汽化，因此，不能采用气相色谱法测定姜酚；通过硅烷化或乙酰化可获得能够挥发的姜酚衍生物，但仍然因缺乏标样和因形成的衍生物复杂而难以准确测定姜酚。事实上，目前已几乎没有人采用该法了。
高压液相色谱法可常温测定，能够最大限度地减少姜酚在测定过程中的变化，是相对较好的测定方法。然而，不仅姜酚色谱峰的定性需要姜酚标样，而且根据色谱分析的定量理论知道，测定姜酚时的内标(或外标)工作曲线、相对定量校正因子等都需要以酚标样为前提进行测定。因此，该测定方法仍然受姜酚标样的限制。
总之，由于姜酚稳定性差，标样难得，目前还不能对生姜及其制品中的姜酚进行准确、快速测定。
姜酚肟是姜酚类似物，CN 1680290A对6-姜酚肟等姜酚肟类似物的生产方法及其作用作了详细的描述。其中所描述的6-姜酚肟可以在一定的条件下发生脱肟反应而形成6-姜酚，可以作为定性或定量测定6-姜酚的标样，但到目前为止，还没有这方面的探索。
发明内容
本发明的目的就是提供一种应用6-姜酚肟快速、准确测定生姜及其制品中6-姜酚含量的方法。
本发明的目的是通过如下技术方案实现的以6-姜酚肟脱肟反应形成的6-姜酚进行定性测定，并以6-姜酚肟作为测定内标，从而测定生姜及其制品中的姜酚含量。
具体包括如下步骤A、生姜及其制品的样品处理将被测物溶于乙腈与醋酸的混合液中配制成样品溶液；并在该样品溶液中加入6-姜酚肟作为内标；B、把6-姜酚肟溶于乙腈与醋酸的混合液中，混匀后在40～80℃温度下反应10～72小时，生成6-姜酚，并用高压液相色谱仪测定6-姜酚和6-姜酚肟的高压液相色谱图，作为定性测定标准物质；C、用高压液相色谱仪分别测定样品中6-姜酚和6-姜酚肟的峰面积；
D、通过下式计算被测物中6-姜酚含量C＝1.051 X fi As C0/A0…………………………①式中C所测样品中的6-姜酚浓度；X稀释倍数；fi6-姜酚肟与6-姜酚282nm时的摩尔吸光度比，此处作为二者的相对校正因子，此处取1.181；As样品中6-姜酚的峰面积；C0样品中6-姜酚肟的浓度；A0样品中6-姜酚肟的峰面积；1.051由6-姜酚肟分子量/6-姜酚分子量＝309/294而计算得。
为了较好实现本发明，所述A步骤中，在处理生姜及其制品的样品时，利用2体积的乙腈与3体积的质量浓度为2％的醋酸混合液进行提取、稀释、定容，配成含0.2克鲜姜/ml的样品溶液后，再加入1～10微克/ml的6-姜酚肟作为内标。
所述B步骤中，称取6-姜酚肟1～20毫克，溶于1ml乙腈中，加入2％ NaHCO3溶液1.5ml，混匀后置50～60℃烘箱中反应12～15小时。
所述C步骤中，高压液相色谱仪测定条件为流动相2体积的乙腈与3体积的2％醋酸混合液；流速1～2mL/min；色谱柱反相[C18]柱4.6mm×25cm；柱温30℃；紫外检测波长282nm。
本发明利用6-姜酚肟常温下呈现结晶粉状状态，容易保存和使用的特性，使用6-姜酚肟作为测定时的内标，可准确快速地测量出生姜及其制品中6-姜酚的含量，具有广泛的实用价值。
图1是姜酚在不同条件下分解成姜脑或姜酮的变化示意图。
图2是6-姜酚的高压液相色谱图。
图3是6-姜酚肟的高压液相色谱图。
图4是测定鲜姜中6-姜酚的高压液相色谱图。
具体实施例方式
实施例一鲜姜中6-姜酚的测定1、样品的处理将鲜姜洗净、切条后，置打浆机中打浆。称取1.000克姜浆，利用2体积乙腈与3体积2％醋酸混合液，将其定容至10ml，即配成0.200克鲜姜/ml的样品溶液。将其置超声波匀浆器中振荡混匀，于3000转速离心，取上清液用0.22μm尼龙滤膜过滤。滤液即可作为测定鲜姜中6-姜酚的样品。进样量2微升。
在所准备的样品中加入5微克6-姜酚肟作为内标。
2、高压液相色谱仪测定的条件测定时的进样量为2微升。流动相2体积的乙腈与3体积的2％醋酸混合液；流速1～2mL/min；色谱柱反相[C18]柱4.6mm×25cm；柱温30℃；紫外监测波长282nm。分别记录6-姜酚峰面积与6-姜酚肟的峰面积。
3、6-姜酚的定性称取6-姜酚肟5～20毫克，溶于1ml乙腈中，加入2％ NaHCO3溶液1.5ml，混匀后置60℃烘箱中反应12～15小时。该反应液中的6-姜酚肟可变成6-姜酚，以此反应生产的6-姜酚进行定性。按照上述条件测定6-姜酚和6-姜酚肟的高压液相色谱图分别为图2和图3。
4、鲜姜中6-姜酚测定及其含量的计算由上述鲜姜样品所测的6-姜酚的高压液相色谱图为图4。据①式计算6-姜酚的含量为0.09±0.041％(n＝3)。
实施例二姜油树脂中6-姜酚的测定1、样品的处理称取姜油树脂0.1000克，用2体积乙腈与3体积2％醋酸混合液定容至5ml，即配制成每毫升含0.02克姜油树脂的样品溶液。将其置超声波匀浆器中振荡混匀，于10000转速离心，取上清液用0.22μm尼龙滤膜过滤。滤液即可作为测定鲜姜中6-姜酚的样品。
2、高压液相色谱仪测定的条件同实施例一。
3、6-姜酚的定性同实施例一。
4、生姜及其制品中6-姜酚含量的计算据①式计算6-姜酚的含量为4.01±0.18％(n＝3)。
实施例三 干姜中6-姜酚的测定1、样品的处理称取1.000克干姜，用2体积的乙腈与3体积的2％醋酸混合液10毫升，置超声波匀浆器中振荡混匀，于3000～10000转速离心，取上清液用0.22μm尼龙滤膜过滤。用2体积的乙腈与3体积的2％醋酸混合液进行进行定容至100毫升。在所准备的样品中加入500微克6-姜酚肟作为内标。
2、高压液相色谱仪测定的条件同实施例一。
3、6-姜酚的定性同实施例一。
4、生姜及其制品中6-姜酚含量的计算按照①式计算6-姜酚的含量为0.22±0.016％(n＝3)。
权利要求
1.一种利用6-姜酚肟测定生姜及其制品中的6-姜酚的方法，其特征在于以6-姜酚肟脱肟反应形成的6-姜酚进行定性测定，并以6-姜酚肟作为测定内标，从而测定生姜及其制品中的姜酚含量。
2.根据权利要求1所述的方法，其特征在于包括如下步骤A、生姜及其制品的样品处理将被测物溶于乙腈与醋酸的混合液中配制成样品溶液；并在该样品溶液中加入6-姜酚肟作为内标；B、把6-姜酚肟溶于乙腈与醋酸的混合液中，混匀后在40～80℃温度下反应10～72小时，生成6-姜酚，并用高压液相色谱仪测定6-姜酚和6-姜酚肟的高压液相色谱图，作为定性测定标准物质；C、用高压液相色谱仪分别测定样品中6-姜酚峰面积和6-姜酚肟的峰面积；D、通过下式计算被测物中6-姜酚含量C＝1.051 X fi As C0/A0；式中C所测样品中的6-姜酚浓度；X稀释倍数；fi6-姜酚肟与6-姜酚282nm时的摩尔吸光度比，此处作为二者的相对校正因子，此处取1.181；As样品中6-姜酚的峰面积；C0样品中6-姜酚肟的浓度；A0样品中6-姜酚肟的峰面积；1.051由6-姜酚肟分子量/6-姜酚分子量＝309/294而计算得。
3.根据权利要求2所述的方法，其特征在于所述A步骤中，在处理生姜及其制品的样品时，利用2体积的乙腈与3体积的质量浓度为2％的醋酸混合液进行提取、稀释、定容，配成含0.2克鲜姜/ml的样品溶液后，再加入1～10微克/ml的6-姜酚肟作为内标。
4.根据权利要求2所述的方法，其特征在于所述B步骤中，称取6-姜酚肟1～20毫克，溶于1ml乙腈中，加入2％NaHCO3溶液1.5ml，混匀后置50～60℃烘箱中反应12～15小时。
5.根据权利要求2所述的方法，其特征在于所述高压液相色谱仪测定条件为流动相2体积的乙腈与3体积的2％醋酸混合液；流速1～2mL/min；色谱柱反相[C18]柱4.6mm×25cm柱温30℃；紫外监测波长282nm。
全文摘要
本发明公开了一种以6－姜酚肟脱肟反应形成的6－姜酚进行定性测定，并以6－姜酚肟作为测定内标，从而测定生姜及其制品中的姜酚含量。本发明利用6－姜酚肟常温下呈现结晶粉状状态，容易保存和使用的特性，使用6－姜酚肟作为测定时的内标，可准确快速地测量出生姜及其制品中6－姜酚的含量，具有广泛的实用价值。
文档编号G01N30/06GK1811412SQ200510120629
公开日2006年8月2日 申请日期2005年12月16日 优先权日2005年12月16日
发明者黄雪松 申请人:暨南大学