专利名称：作为前列腺癌相关抗原的RM2抗原(β1,4－GalNAc－disialyl－Lc的制作方法
技术领域：
本发明是关于一种作为人前列腺癌相关抗原的特异性糖类抗原的鉴定。
背景技术：
在美国每2.75分钟诊断出一例前列腺癌，每年出现超过230000例的新病例。前列腺癌是男性中诊断出的最常见的癌症(占所有新癌症病例的32％以上)，每年估计有29900名男性死于前列腺癌。在美国，前列腺癌在所有类型癌症中的发病率最高。在其他发达国家也观察到类似趋势。
目前前列腺特异性抗原(Prostate-specific antigen，PSA)用于诊断前列腺癌，因为所述疾病常常伴随着该抗原在血清水平(＞6.1纳克/毫升)上的升高。但是，PSA是一种蛋白抗原，在正常前列腺和前列腺癌中都有发现。良性前列腺肥大(Benign Prostate Hypertrophy，BPH)和前列腺炎也伴随着PSA水平升高，因此PSA水平不能作为前列腺癌的决定性指标。
很多类型的癌症发生异常糖基化作用(细胞表面形成异常糖链)。异常糖基化作用的模式和伴随特定类型癌的特异性糖基表位表达已经被用作诊断多种类型人类癌症的标准。
已经开始寻找伴随人前列腺癌表达、但不伴随正常前列腺或良性前列腺肥大表达的异常糖链。本发明是关于一种被称为“RM2抗原”(β1，4-GalNAc-disialyl-Lc4)的结构的鉴定，该结构特异结合单克隆抗体(monoclonal antibody，mAb)RM2。
发明内容
本发明基于先前对肾细胞瘤(renal cell carcinoma，RCC)抗原的搜寻结果，将其应用于前列腺癌的研究。最初，RCC细胞系TOS1被用作免疫原以得到与RCC反应的单克隆抗体；该单克隆抗体被称为“RM2”。被RM2识别的抗原结构随后被鉴定为β1，4-GalNAc-disialyl-Lc4(图1)。RCC为相对罕见的癌症类型，并且不是所有RCC都表达所述结构。由于泌尿生殖系统的器官具有共同的胚胎发育，对代表不同疾病分期的35例前列腺癌病例中RM2抗原的表达进行了系统检查。所有这35例病例都显示出与单克隆抗体RM2的阳性反应性即存在RM2抗原，其中18例病例为中度或强阳性；17例病例为弱阳性。所有35例正常的腺体中都观察到阴性或非常弱的染色，6例良性前列腺肥大未观察到染色。中度/强阳性病例和弱阳性病例的中值格里森分数(Gleason score)分别为8和7。
良性前列腺肥大中的阴性RM2表达，使RM2特别适用于诊断。良性前列腺肥大在PSA测定中常常伴随轻度到中等程度的升高值(4-10纳克/毫升)。由于RM2在良性前列腺肥大中不表达，RM2区分前列腺癌和良性前列腺肥大的能力将在升高的PSA为4-10纳克/毫升的男性中，用血清RM2测试选择活组织检查病例时非常有用。9个根治性前列腺切除术(Radicalprostatectomy)样本中，5个表现出中度/强阳性(moderately/strongly positive，m/s)染色，4个表现出弱阳性染色(weakly positive，w)。5个m/s染色病例中的4个为病理非器官局限性的(non-organ confined)，而4个w染色病例均为器官局限性的。虽然检查的病例数目少，但RM2阳性和病理分期之间存在明显相关性(p＜0.02)。临床局部前列腺癌中的病理分期预测对选择治疗方案非常重要，即选择根治性前列腺切除术还是放射治疗。上述数据表明RM2还可以用于预测临床局部前列腺癌中的病理分期，其中在约40％的同时期根治性前列腺切除术组中发现了病理非器官局限性癌。
根据现有数据，经过PSA测试的大多数男性病人的PSA值显示为4-10纳克/毫升。然而，通过活组织检查发现，PSA值在此范围的病人只有25％患有前列腺癌，即具有“高”PSA值的病人超过70％未患有前列腺癌。世界范围使用PSA测试意味着金钱、时间和劳动力的巨大浪费，并使病人有心理压力。
因此发现伴随人前列腺癌但并不伴随正常前列腺或良性前列腺肥大表达的特异性抗原，是非常重要的医学进步。本发明提供了一种诊断前列腺癌的方法，该方法包括在从怀疑患有前列腺癌的病人取得的样本中，检测具有以下所示的表位结构的RM2抗原的存在或水平升高 其中，R表示载体。
在优选实施方式中，用特异性结合RM2抗原的抗体检测RM2抗原。在更优选的实施方式中，所述抗体为RM2单克隆抗体。
本发明还提供了用于诊断前列腺癌的试剂盒，该试剂盒包括(a)至少一个特异性结合RM2抗原的部分(moiety)，所述RM2抗原具有以下所示的表位结构，取自从怀疑患有前列腺癌的病人中获得的样本 其中，R表示载体；(b)用所述试剂盒诊断前列腺癌的说明书(instruction)；以及(c)选择性地包括的通过所述部分与所述抗原的特异性结合检测所述抗原的存在的装置。
图1RM2抗原的结构；
图2在具有不同格里森分数的前列腺癌活组织检查样本中RM2抗原表达的免疫组织学图；A组样本1(格里森分数5+4)；B组样本2(格里森分数4+5)；C组样本3(格里森分数5+4)；D组样本4(格里森分数3+3)；E组样本5(格里森分数4+3)；F组样本6(格里森分数4+3)；放大倍数200倍；在正常腺体中观察到阴性RM2免疫染色或只观察到弱的RM2免疫染色；图3根治性前列腺切除术样本中RM抗原表达的免疫组织学图；A组样本1(格里森分数3+4)；B组样本2(格里森分数4+4)；C组样本3(格里森分数4+5)；放大倍数200倍；ms中度/强，w弱，RP根治性前列腺切除术；图4良性前列腺肥大(A组)和正常前列腺(B组)病例的根治性前列腺切除术样本中RM2抗原表达的免疫组织学图；在良性前列腺肥大中未观察到RM2免疫染色，并且在正常腺体中只观察到很弱的RM2染色；放大倍数100倍；图5通过RM2对前列腺癌细胞系的蛋白印迹分析(Western blotanalysis)；A组RM2免疫染色；B组小鼠IgM免疫染色(阴性对照)；1、PC3(5微克)，2、LNCap(5微克，3、PC3(10微克)，4、LNCap(10微克)，5、PC3(15微克)，6、LNCap(15微克)，7、PC3(20微克)，8、LNCap(20微克)，M分子量标记(size marker)；除了LNCap和PC3中的几条其它带，RM2检测到作为主要带的49千道尔顿糖蛋白。
具体实施例方式
A、RM2抗原和抗体。人类肿瘤通过与鞘糖脂或糖蛋白结合的特异性糖类抗原的表达而得到辨别(Hakomori，S.1989 Adv.Cancer Res.52，257-331；Hakomori，S.1996 Cancer Res.56，5309-5318)，基于这一普通概念，描述在RCC中高度表达的慢迁移神经节苷脂(slow-migrating ganglioside)的存在(Saito，S.，Orikasa，S.，Ohyama，C.，Satoh，M.和Fukushi，Y(1991)Int.J.Cancer 49，329-334)。通过用RCC细胞系TOS1免疫小鼠，然后反复克隆分泌能识别由RCC组织表达的慢迁移神经节苷脂的抗体的杂交瘤，建立单克隆抗体RM2(Saito，S.，Levery，S.B.，Salyan，M.E.K.，Goldberg，R.I.，和Hakomori，S.1994 J.Biol.Chem.269，5644-5652)。通过一维和二维的1H核磁共振(1H-NMR)以及质谱对由所述称作“RM2抗原”的单克隆抗体RM2识别的抗原的结构的进一步系统研究明确了该结构为β1，4-GalNAc-disialyl-Lc4(图1)。所述结构非常新，由“神经节系列(ganglio-series)”(图1中1区)和“二唾液酸乳糖系列1型链(disialyl lacto-series type 1 chain)”(图1中2区)基团组成(Ito，A.，Levery，S.B.，Saito，S.，Satoh，M.，和Hakomori，S.2001J.Biol.Chem.276，16695-16703)。
B、作为前列腺癌相关抗原的RM2抗原。由于泌尿生殖组织和器官与个体发育相关，本发明的发明人假定在RCC中表达的抗原可能也在其他泌尿生殖癌中，特别是在发生率和死亡率最高的前列腺癌中表达。对从40例前列腺癌病例中取得的活组织检查样本进行了初步研究。活组织检查样本包括了前列腺癌的所有分期，大多数为晚期的样本。也就是说约66％的活组织检查样本取自患有“非器官局限性”前列腺癌的患者。用标准组织学操作将组织用福尔马林固定并用石蜡包埋。40个样本中，35个样本的结构保存完好，能够评价免疫组织学结果。18例为中度或强阳性，17例为弱阳性。下面描述这些病例。
活组织检查样本1、18例中度/强阳性病例·年龄(中值)72.5岁·PSA值(中值)40纳克/毫升(值域2.5-3797纳克/毫升)
·格里森分数(中值)8(全部18个病例)3个病例评分为65个病例评分为73个病例评分为87个病例评分为9·临床分期局部化(localization)程度(T)T2及低于T26例T3及高于T312例发生转移D2分期(转移至骨或远淋巴结，超越局部淋巴结)5例D1分期(转移至局部淋巴结)1例未发生转移Tlc-T4N0M012例(Tlc4例，T22例，T35，T41例)2、17例弱阳性病例·年龄(中值)71岁·PSA值(中值)37纳克/毫升(值域7-1723纳克/毫升)·格里森分数(中值)7(全部17个病例)3个病例评分为67个病例评分为74个病例评分为83个病例评分为9·临床分期局部化(localization)程度(T)
T2及低于T26例T3及高于T311例发生转移D2分期(转移至骨或远淋巴结，超越局部淋巴结)4例D1分期(转移至局部淋巴结)1例未发生转移Tlc-T3N0M012例(Tlc3例，T23例，T36例)根治性前列腺切除术样本(共9例)·年龄(中值)65岁·PSA值(中值)6.1纳克/毫升(值域4.4-13.2纳克/毫升)1、5例中度/强阳性病例·格里森分数73例·格里森分数81例·格里森分数91例·非器官局限性(pT3及高于pT3)4例·器官局限性(pT2及低于pT2)1例2、4例弱阳性病例·格里森分数82例·格里森分数92例·器官局限性(pT2及低于pT2)4例C、作为肿瘤细胞糖蛋白的RM2抗原。如上面A部分所述，原本发现RM2为鞘糖脂(二唾液酸神经节苷酯)。然而在肿瘤细胞中出现的一些抗原能通过十二烷基硫酸钠聚丙烯酰胺凝胶电泳(sodium dodecyl sulfatepolyacrylamide gel electrophoresis，SDS-PAGE)及随后的蛋白印迹分析而检测到。简言之，细胞置于冰上，用冰冷的磷酸缓冲液(PBS)冲洗，并用细胞裂解缓冲液(20mM pH7.4的三羟甲基氨基甲烷(Tris)、150mM NaCl、2mM乙二胺四乙酸(EDTA)、1％乙基苯基聚乙二醇(NP40)、50mM NaF、10微克/毫升抑肽酶(aprotinin)、10微克/毫升亮肽酶素(leupeptin)、1mM苯甲基磺酰氟化物(PMSF)、1mM Na3VO4)裂解。通过12000转/分钟离心5分钟使提取物澄清。含有等量蛋白的溶胞产物通过在10％的SDS-PAGE上电泳而解离然后转移至Hybond P聚偏二氟乙烯膜(Amersham Biosciences，瑞典)。用含有1％牛血清白蛋白(BSA)的三羟甲基氨基甲烷缓冲盐水-吐温封闭剂(TBS-Tween)封闭上述膜，然后和初级抗体孵育。用适当的过氧化物酶偶联的次级抗体，然后用增强化学发光检测系统(ECL，BoehringerMannheim，德国)检测结合的抗体。
重要的一点是，与鞘糖脂抗原相比，糖蛋白抗原更容易从细胞中释放出来。许多在血清检查时用作诊断探针的肿瘤相关抗原是糖蛋白而不是鞘糖脂D、前列腺癌的诊断方法本发明提供了一种诊断前列腺癌的方法，该方法包括在从怀疑患有前列腺癌的病人取得的样本中，检测具有以下所示的表位结构的RM2抗原的存在或水平升高 其中，R表示载体。
所述方法特别用于区别良性前列腺肥大和恶性前列腺癌。
适合的载体包括(i)N连接或O连接到糖蛋白上的乳糖胺(lactosamine)链、(ii)鞘糖脂中的4糖基β1-1神经酰胺(4Glcβ1-1Cer)或者(iii)任何其它自然产生或合成的载体分子。
适合用于诊断前列腺癌的样本包括癌性前列腺组织的活组织检查样本、来自全前列腺切除术的样本以及血清。
根据本发明，诊断前列腺癌的方法可以为任何能够检测样本中RM2抗原的存在或水平升高的方法，所述样本中RM2抗原的存在或水平升高与前列腺癌的发生相互关联。检测RM2抗原存在或水平升高的方法的例子包括“三明治”免疫测定法(″sandwich″immunoassays)、电喷射离子化作用(electrospray ionization，ESI)和基质辅助激光解吸/离子化作用(matrix-assisted laser desorption/ionization，MALDI)质谱(mass spectrometry，MS)和表面胞质基因共振(surface plasmon resonance，SPR)光谱法。
使用用于PSA分析的、具有双重单克隆抗体化验的“三明治”法(McCormack RT等人，″Molecular forms of prostate-specific antigen and thehuman kallikrein gene familya new era″，Urology 45(5)729-44，1995；Karazanashvili G，Abrahamsson PA，″Prostate specific antigen and humanglandular kallikrein 2 in early detection of prostate cancer″，J.Urology 169(2)445-457，2003)，发现了一种与RM2抗原有反应性的49千道尔顿的糖蛋白，正如蛋白印迹分析证实，该糖蛋白为从肿瘤细胞中释放出来的主要糖蛋白。此外，通过用RM2进行蛋白印迹分析在各种前列腺癌细胞系中检测到较少的糖蛋白带(88千道尔顿、98千道尔顿、130千道尔顿)(见图5A及其
)。在雄激素依赖LNCap细胞和非雄激素依赖PC3细胞中都发现了所述RM2-反应性糖蛋白。将定向在所述前列腺癌细胞系中表达的非RM2表位的RM2和其它单克隆抗体结合，将有助于建立高效的具有双重单克隆抗体化验的三明治法。
基于电喷射离子化作用和基质辅助激光解吸/离子化作用质谱的显著进步，所述方法已经被应用于对患有特定癌症的病人血清中肿瘤相关糖蛋白的分析，例如Johnson PJ等人，″Structures of disease-specific serumalpha-fetoprotein isoforms″，Br.J.Cancer 83(10)1330-1337，2000；Poon TC等人，″Comprehensive proteomic profiling...of hepatocellular carcinoma and itssubtypes″，Clin.Chem.49(5)752-760，2003。顺应这种趋势，表面增强激光解吸/离子化作用-飞行时间-质谱(surface-enhanced laserdesorption/ionization-time of flight-mass spectrometry，SELDI-TOF-MS)用于鉴定糖蛋白抗原的特征(Merchant M，Weinberger SR，″Recent advancements insurface-enhanced laser desorption/ionization-time of flight-mass spectrometry″，Electrophoresis 211164-1167，2000)。事实上，病人血清中的RM2糖蛋白可以被附着在凝胶上的抗体所捕获，然后洗脱被吸附的抗原，并用ESI-MS、MALDI-MS或SELDI-TOF-MS分析。
表面胞质基因共振光谱高度灵敏并且能检测弱的相互作用(Matsuura K等人，″A quantitative estimation of carbohydrate-carbohydrate interaction...bysurface plasmon resonance″，J.Am.Chem.Soc.122(30)7406-7407，2000；Hemaiz MJ等人，″A model system mimicking glycosphingolipid clusters toquantify carbohydrate self-interactions by surface plasmon resonance″，Angew.Chem.Intl.Ed.41(9)1554-1557，2002)。这是一种通过结合附着在表面胞质基因层上的抗体来测定病人血清中的抗原的很有前景的方法，例如用附着在金膜(gold film)(″自装配单层(self-assembled monolayer)″，SAM)上的RM2抗体的抗原结合片段(Fab)衍生物来检测病人血清中存在的抗原。
在优选方法中，样本与特异性结合RM2抗原的部分接触，然后通过检测该部分与RM2抗原的特异性结合，检测该抗原的存在。与RM2抗原特异性反应的部分的例子为特异性结合RM2抗原的抗体。
在本发明的上下文中，抗体可以理解为包括多克隆抗体和单克隆抗体、单链抗体、抗体片段(如抗体可变片段(Fv)、抗原结合片段(Fab)和胃蛋白酶消化后的抗体片段(F(ab′)2)、嵌合抗体、表面重建抗体(resurfacedantibody)和人源化抗体。
本领域普通技术人员能够从多种温血动物，例如马、牛、各种家禽、兔、小鼠、仓鼠或大鼠，很容易地制备抗RM2抗原的多克隆抗体。例如能用引起哺乳动物抗体应答的免疫原形式的RM2抗原免疫哺乳动物(如小鼠、仓鼠或兔)。可以通过检测血浆或血清中的抗体滴度监测免疫作用的进展。免疫后可以得到抗血清，从所述抗血清中分离出多克隆抗体。
本发明的方法优选使用单克隆抗体。特异性结合RM2抗原的单克隆抗体可以用常规的技术很容易地制得。例如，可以通过由Kohler和Milstein1975年首创的杂交瘤技术(Nature 256，495-497)制备单克隆抗体；还参见US RE32011、US 4902614、US 4543439和US 4411993，这些文件的全部内容在此并入作为参考；还参见Monoclonal Antibodies，HybridomasA New Dimensionin Biological Analyses，Plenum Press，Kennett，McKeam和Bechtol(eds.)，1980以及AntibodiesA Laboratory Manual，Harlow and Lane(eds.)，Cold SpringHarbor Laboratory Press，1988。其他技术也可以用于构建单克隆抗体(例如，见William D.Huse等人，1989，″Generation of a Large Combinational Library ofthe Immunoglobulin Repertoire in Phage Lambda，″Science 2461275-1281；L.Sastry等人，1989″Cloning of the Immunological Repertoire in Escherichia colifor Generation of Monoclonal Catalytic AntibodiesConstruction of a HeavyChain Variable Region-Specific cDNA Library，″Proc Natl.Acad.Sci.USA865728-5732；Kozbor等人，1983 Immunol.Today 4，72 re the human B-cellhybridoma technique；Cole等人，1985 Monoclonal Antibodies in Cancer Therapy，Allen R.Bliss，Inc.，pages 77-96 re the EBV-hybridoma technique to producehuman monoclonal antibodies；并还参见Michelle Alting-Mees等人，1990″Monoclonal Antibody Expression LibrariesA Rapid Alternative toHybridomas，″Strategies in Molecular Biology 31-9)。免疫化学筛选杂交瘤细胞以产生与RM2抗原特异性反应的抗体，单克隆抗体得以分离。
在此使用的术语“抗体”意指包括与RM2抗原特异性反应的抗体片段。抗体可以用常规技术片段化并用与上述完整抗体同样方法筛选有用的片段。例如，F(ab′)2片段可以通过用胃蛋白酶(pepsin)处理抗体产生。可以处理得到的F(ab′)2片段，还原二硫键以制备Fab′片段。
单链抗体可以通过用联结子(linker)连接可变重链和可变轻链而制备(参见例如Huston等人，1988 Proc.Natl.Acad.Sci.U.S.A.，85，5879-5883和Bird等人，1988 Science，242，423-426这两篇文件的全部内容在此并入作为参考)。
本发明还考虑到了嵌合抗体衍生物，即结合了非人类动物的可变区和人类恒定区的抗体分子。嵌合抗体分子可以包括，例如，结合来源于小鼠、大鼠或其它种的抗体的结构域和人类恒定区的抗原。制备嵌合抗体的各种方法已经得到描述，并且能用于制备包括免疫球蛋白可变区的嵌合抗体，所述免疫球蛋白可变区能够识别分化细胞或肿瘤细胞表面的挑选的抗原。参见例如，Morrison等人，1985；Proc.Natl.Acad.Sci.U.S.A.81，6851；Takeda等人，1985，Nature 314，452；Cabilly等人，US 4816567；Boss等人，US 4816397；Tanaguchi等人，欧洲专利公开EP 171496；欧洲专利公开EP 0173494、英国专利GB 2177096B。
本发明还考虑了表面重建单克隆抗体的应用。文献例如参见US5639641中清楚地描述了表面重建抗体的方法，所述文献的全部内容在此并入作为参考。
人源化抗体也可以用于本发明的方法。人源化抗体的方法为本领域公知，在文献中得以描述，例如，Padlan，E.等人，1991 Molecular Immunology，vol.28，pp.489-498、美国专利公开20020034765 A1以及美国专利公开2004/0058414 A1。
因此，用于本发明方法的适合的抗体包括多克隆抗体、单链多克隆抗体、多克隆抗体片段、单克隆抗体、单链单克隆抗体、单克隆抗体片段、嵌合抗体、单链嵌合抗体、嵌合抗体片段、表面重建抗体、表面重建单链抗体、表面重建抗体片段、人源化抗体、人源化单链抗体和人源化抗体片段。
特别优选用于本发明的是RM2单克隆抗体及其片段。在Saito，S.，Levery，S.B.，Salyan，M.E.K.，Goldberg，R.I.和Hakomori，S.1994 J.Biol.Chem.269，5644-5652中描述了单克隆抗体RM2及其制备方法，该文献的全部内容在此并入作为参考。
检测抗体和RM2抗原的特异性结合的方法已为本领域公知，包括免疫组织学；十二烷基硫酸钠聚丙烯酰胺凝胶电泳(SDS-PAGE)，然后蛋白印迹分析；定向到结合所述抗原的初级抗体的标记次级抗体；表面等离子体共振(SPR)光谱和分子力显微法。
E、用于诊断前列腺癌的试剂盒本发明还提供了一种用于诊断前列腺癌的试剂盒，该试剂盒包括(a)至少一个特异性结合RM2抗原的部分，所述RM2抗原具有以下所示的表位结构，取自从怀疑患有前列腺癌的病人中获得的样本 其中，R表示载体，(b)用所述试剂盒诊断前列腺癌的说明书，以及(c)选择性地包括的通过所述部分与所述抗原的特异性结合检测所述抗原的存在的装置。
适合的载体如上所述。
适合的特异性结合RM2抗原的部分(moiety)可以为任何用于诊断方法的所述的部分。
说明书包括适于诊断化验的样本类型，例如用于诊断方法的上述样本类型。
F、物质组合物本发明还提供了一种分离的或纯化的含有RM2抗原的前列腺组织样本。所述组织样本通过用本领域公知的方法分离和/或纯化。在Hakomori S和Kannagi R，″Carbohydrate antigens in higher animals″，inHandbook of Experimental Immunology；Vol.1Immunochemistry(Weir DM，Herzenberg LA，Blackwell C，Herzenberg LA，eds.)，4th ed.，Blackwell ScientificPublications(Oxford；Boston)，chap.9(pp.9.1-9.39)中总结了鞘糖脂和糖蛋白的分离方法。如上述所指出的，所述抗原为糖蛋白(相对分子质量(Mr)为50千道尔顿)。这很重要，因为许多病例中，与糖蛋白抗原相比，鞘糖脂抗原并不以高水平释放。
通过本领域公知的方法，不论纯化的、分离的或未分离纯化的组织样品都能用于制备特异性结合RM2抗原的单克隆抗体。参见例如Saito，S.，Levery，S.B.，Salyan，M.E.K.，Goldberg，R.I.和Hakomori，S.1994 J.Biol.Chem.269，5644-5652，该文献的全部内容在此并入作为参考。
在此所有出版物和专利申请在相同程度上并入作为参考，相当于每篇单独的出版物和专利申请是特别并且单独指明需要并入作为参考的。虽然为了清楚和理解的目的，通过附图和实施例在一定程度上详细描述了本发明，很显然一定的改变和变化都包含在本发明权利要求的范围内。
权利要求
1.一种诊断前列腺癌的方法，该方法包括在从怀疑患有前列腺癌的病人取得的样本中，检测具有以下所示的表位结构的RM2抗原的存在或水平升高 其中，R表示载体。
2.根据权利要求1所述的方法，其中，所述方法还包括将所述样本与至少一种特异性结合所述RM2抗原的抗体接触，并通过抗体与抗原的特异性结合检测所述抗原的存在。
3.根据权利要求2所述的方法，其中，所述至少一种抗体选自由多克隆抗体、单链多克隆抗体、多克隆抗体片段、单克隆抗体、单链单克隆抗体、单克隆抗体片段、嵌合抗体、单链嵌合抗体、嵌合抗体片段、表面重建抗体、表面重建单链抗体、表面重建抗体片段、人源化抗体、人源化单链抗体和人源化抗体片段所组成的组中。
4.根据权利要求2所述的方法，其中，所述至少一种抗体为单克隆抗体。
5.根据权利要求2所述的方法，其中，所述至少一种抗体定向到由RM2单克隆抗体识别的表位。
6.根据权利要求1或2所述的方法，其中，所述样本为前列腺活组织检查样本。
7.根据权利要求1或2所述的方法，其中，所述样本为从全前列腺切除术中获得的样本。
8.根据权利要求1或2所述的方法，其中，所述样本为血清样本。
9.根据权利要求2所述的方法，其中，通过免疫组织学；十二烷基硫酸钠聚丙烯酰胺凝胶电泳，然后蛋白印迹分析；定向到结合所述抗原的初级抗体的标记次级抗体；表面等离子体共振光谱法；或分子力显微法检测所述抗原的存在。
10.根据权利要求2所述的方法，其中，所述样本为前列腺活组织检查样本，通过免疫组织学、定向到结合所述抗原的初级抗体的标记次级抗体、表面等离子体共振光谱法或分子力显微法检测所述抗原的存在。
11.根据权利要求2所述的方法，其中，所述样本为从全前列腺切除术中获得的样本，通过免疫组织学、定向到结合所述抗原的初级抗体的标记次级抗体、表面等离子体共振光谱法或分子力显微法检测所述抗原的存在。
12.根据权利要求2所述的方法，其中，所述样本为血清样本，通过十二烷基硫酸钠聚丙烯酰胺凝胶电泳、然后蛋白印迹分析检测所述抗原的存在。
13.根据权利要求10所述的方法，其中，所述至少一种抗体定向到由RM2单克隆抗体识别的表位。
14.根据权利要求11所述的方法，其中，所述至少一种抗体定向到由RM2单克隆抗体识别的表位。
15.根据权利要求12所述的方法，其中，所述至少一种抗体定向到由RM2单克隆抗体识别的表位。
16.一种用于诊断前列腺癌的试剂盒，该试剂盒包括(a)至少一个特异性结合RM2抗原的部分，所述RM2抗原具有以下所示的表位结构并来自从怀疑患有前列腺癌的病人中获得的样本 其中，R表示载体，(b)用所述试剂盒诊断前列腺癌的说明书，以及(c)选择性地包括的通过所述部分与所述抗原的特异性结合检测所述抗原的存在的装置。
17.根据权利要求16所述的试剂盒，其中，特异性结合所述RM2抗原的部分为抗体。
18.根据权利要求16所述的试剂盒，其中，所述抗体选自由多克隆抗体、单链多克隆抗体、多克隆抗体片段、单克隆抗体、单链单克隆抗体、单克隆抗体片段、嵌合抗体、单链嵌合抗体、嵌合抗体片段、表面重建抗体、表面重建单链抗体、表面重建抗体片段、人源化抗体、人源化单链抗体和人源化抗体片段所组成的组中。
19.根据权利要求16所述的试剂盒，其中，所述特异性结合所述RM2抗原的部分为抗体。
20.根据权利要求16所述的试剂盒，其中，所述特异性结合所述RM2抗原的部分为单克隆抗体。
21.根据权利要求16所述的试剂盒，其中，所述特异性结合所述RM2抗体的部分定向到由RM2单克隆抗体识别的表位。
22.根据权利要求16或17所述的试剂盒，其中，所述样本为前列腺活组织检查样本。
23.根据权利要求16或17所述的试剂盒，其中，所述样本为从全前列腺切除术中获得的样本。
24.根据权利要求16或17所述的试剂盒，其中，所述样本为血清样本。
25.根据权利要求16所述的试剂盒，其中，通过免疫组织学；十二烷基硫酸钠聚丙烯酰胺凝胶电泳，然后蛋白印迹分析；定向到结合所述抗原的初级抗体的标记次级抗体；表面等离子体共振光谱法；或分子力显微法检测所述抗原的存在。
26.根据权利要求17所述的试剂盒，其中，所述样本为前列腺活组织检查样本，通过免疫组织学、定向到结合所述抗原的初级抗体的标记次级抗体、表面等离子体共振光谱法或分子力显微法检测所述抗原的存在。
27.根据权利要求17所述的试剂盒，其中，所述样本为从全前列腺切除术中获得的样本，通过免疫组织学、定向到结合所述抗原的初级抗体的标记次级抗体、表面等离子体共振光谱法或分子力显微法检测所述抗原的存在。
28.根据权利要求17所述的试剂盒，其中，所述样本为血清样本，通过十二烷基硫酸钠聚丙烯酰胺凝胶电泳，然后蛋白印迹分析检测所述抗原的存在。
29.根据权利要求17所述的试剂盒，其中，所述样本为来自机体分泌物的样本，通过十二烷基硫酸钠聚丙烯酰胺凝胶电泳、然后蛋白印迹分析检测所述抗原的存在。
30.根据权利要求26所述的试剂盒，其中，所述至少一种抗体定向到由RM2单克隆抗体识别的表位。
31.根据权利要求27所述的试剂盒，其中，所述至少一种抗体定向到由RM2单克隆抗体识别的表位。
32.根据权利要求28所述的试剂盒，其中，所述至少一种抗体定向到由RM2单克隆抗体识别的表位。
33.一种分离的前列腺组织样本，该样本包括RM2抗原。
全文摘要
一种由单克隆抗体RM2定义的新型糖类抗原β1，4－GalNAc－disialyl－Lc
文档编号G01N33/574GK1997896SQ200580010431
公开日2007年7月11日 申请日期2005年3月25日 优先权日2004年3月30日
发明者箱守仙一郎, 斋藤清一 申请人:北海道科学技术振兴财团