专利名称：乳制品大肠杆菌快检纸片的制作方法
技术领域：
本发明涉及一种乳制品大肠杆菌快检纸片，是一种专门用于监督乳制品的卫生指标，快速检测指示菌—大肠杆菌的鉴定试剂。其主要成分是优质蛋白胨、氯化钠、磷酸氢二钾、乳糖、琼脂糖、1.6％溴甲酚紫溶液、4％TTC溶液、蒸馏水按比例混合后经灭菌浸渍于中速定性滤纸上烘干，包装备用。乳制品大肠杆菌快检纸片可用于卫生、防疫、质检、食品加工、畜牧、生物工程等领域的乳制品卫生指标的鉴定试剂，已有大肠杆菌试剂很多，性能单一，一种试剂只适合于一种乳制品的大肠杆菌的培养检测；需要特殊培养条件；成本及价格高；操作方法复杂，检测步骤达不到快速一步法，检测时间长；敏感性差、特异性弱、准确性低；大肠杆菌的检测结果无法定量分析；在检测中易受干扰因素影响等缺点。因此，各行业希望能有一种克服已有产品不足的乳制品大肠杆菌快检纸片。
背景技术：
大肠菌群是人类粪便中的主要细菌，具有作为指示菌的一般特性，因而被用来作为反映乳制品中有否污染的指示菌。大肠杆菌数的高低，表明了乳制品污染的程度，也反映了对人体健康危害性的大小。目前大肠杆菌作为评价乳制品卫生质量的主要指标之一，已被国内外广泛应用。本发明的目的在于提供一种能克服已有产品不足的专用于监督乳制品的卫生质量，快速检测大肠杆菌的鉴定试剂。具有适合于各种乳制品的大肠杆菌的培养检测；不需要特殊培养条件；成本及价格低；操作方法简便易行，检测步骤达到快速一步法，检测时间短；敏感性好、特异性强、准确性高；大肠杆菌的检测结果可定量分析；含有缓冲剂，在检测中不易受乳制品中干扰因素影响等特点的乳制品大肠杆菌的鉴定试剂。
发明内容
本发明的要点在于选择合适的组分，并进行合理混配，经一系列现代生物技术溶解、校正PH、高温灭菌、冷却、加指示剂、浸渍纸片、恒温烘干、无菌包装等工艺而成一种专业的乳制品大肠杆菌快检纸片。
本发明选择的配方如下(组分及其重量百分比％)优质蛋白胨(0.8-1.5)；氯化钠(0.4-0.6)；磷酸氢二钾(0.3-0.5)；乳糖(1.2-1.7)；琼脂糖(0.08-0.12)；1.6％溴甲酚紫溶液(0.4-0.8)；4％TTC溶液(2.3-2.8)；蒸馏水加至100。
优质蛋白胨作为主要的组分，该组分为细菌的氮源，为培养大肠杆菌提供其生长所需要的营养和能量；氯化钠作为主要的组分，该组分为无机盐，为培养大肠杆菌提供其生长所需要的渗透压；磷酸氢二钾作为主要的组分，该组分为缓冲剂，为培养大肠杆菌提供其生长所需要一定的氢离子浓度，以保持较稳定的pH环境；乳糖作为主要的组分，该组分为细菌的碳源，为培养大肠杆菌提供其生长所需要的新陈代谢的能源，同时大肠杆菌能分解乳糖产酸产气；琼脂糖作为主要的组分，该组分为培养基的赋形剂，溶解冷却后可将培养基中的有效成分凝固并挂载于纸片上；1.6％溴甲酚紫溶液、4％TTC溶液为指示剂，利用大肠杆菌能分解乳糖产酸使指示剂颜色变化来鉴别乳制品大肠杆菌是否生存，从而推导乳制品的卫生质量。
本发明产品的制备方法是1)将新华中速定性滤纸，切成10×12厘米，叠成5×6厘米大小的双层纸片六份，经干烤或高压灭菌(高压后于37℃温箱烘干)后备用。
2)将耐高温的聚丙塑料薄膜袋，可按实验要求压合成一定规格的袋，100℃15分灭菌后备用。
3)将蛋白胨、氯化钠、磷酸氢二钾、乳糖、琼脂糖、蒸馏水按比例混合加热溶解，冷后调pH7.0-7.2，再按量加入1.6％溴甲酚紫溶液，混匀100℃15分灭菌，冷至60℃左右按量加入4％TTC溶液，混匀。
4)浸渍纸片用无菌镊子将纸片排放于消毒的大搪瓷盘内，放40℃左右恒温室或37℃温箱烘干，无菌操作装入消毒的塑料袋内，包装好放冰箱保存备用。
本发明具有以下优点1.乳制品大肠杆菌快检纸片适合于各种乳制品大肠杆菌的培养检测。2.不需特殊培养条件。3.成本及价格低廉。4.操作方法简便易行，检测步骤达到快速一步法，检测时间比生物生化鉴定法缩短了四天，使高深的生物培养技术简化到一般人员都能掌握操作。5.产品的敏感性好、特异性强、准确性高。6.纸片有一定的规格，使乳制品大肠杆菌的检测达到快速准确定量分析。7.乳制品大肠杆菌快检纸片含有缓冲剂，在检测中不受乳制品中干扰因素影响。
具体实施例方式
下面结合实施例对本发明作进一步的详细说明按照下表所列数据(重量百分比％)及其所述步骤进行配置配方一优质蛋白胨 (0.8-1.5)；氯化钠 (0.4-0.6)；磷酸氢二钾 (0.3-0.5)；乳糖(1.2-1.7)；琼脂糖 (0.08-0.12)；1.6％溴甲酚紫溶液 (0.4-0.8)；4％TTC溶液 (2.3-2.8)；蒸馏水 加至100。
配方二优质蛋白胨 (0.9-1.4)；氯化钠 (0.5-0.6)；磷酸氢二钾 (0.4-0.5)；乳糖 (1.4-1.7)；琼脂糖 (0.08-0.1)；1.6％溴甲酚紫溶液(0.4-0.7)；4％TTC溶液 (2.3-2.8)；蒸馏水加至100。
配方三
优质蛋白胨(1.1-1.4)；氯化钠(0.5-0.6)；磷酸氢二钾(0.35-0.5)；乳糖 (1.3-1.7)；琼脂糖(0.07-0.1)；1.6％溴甲酚紫溶液 (0.5-0.7)；4％TTC溶液(2.3-2.7)；蒸馏水加至100。
配方四优质蛋白胨(0.9-1.3)；氯化钠(0.5-0.6)；磷酸氢二钾(0.4-0.5)；乳糖 (1.2-1.6)；琼脂糖(0.08-0.1)；1.6％溴甲酚紫溶液 (0.4-0.7)；4％TTC溶液(2.2-2.8)；蒸馏水加至100。
权利要求
1.一种以乳糖发酵培养基为基础液，磷酸氢二钾为缓冲剂，溴甲酚紫、TTC为指示剂，新华中速定性滤纸为载体，经一系列现代生物技术溶解、校正PH、高温灭菌、冷却、加指示剂、浸渍纸片、恒温烘干、无菌包装等工艺而成一种专业乳制品大肠杆菌快检纸片。其特征在于具有如下配方(组分及其重量百分比％)优质蛋白胨(0.8-1.5)；氯化钠(0.4-0.6)；磷酸氢二钾(0.3-0.5)；乳糖(1.2-1.7)；琼脂糖(0.08-0.12)；1.6％溴甲酚紫溶液(0.4-0.8)；4％TTC溶液(2.3-2.8)；蒸馏水加至100。
2.一种权利要求1所述乳制品大肠杆菌快检纸片的制备方法，其特征在于具有如下的步骤1)将新华中速定性滤纸，切成10×12厘米，叠成5×6厘米大小的双层纸片六份，经干烤或高压灭菌(高压后于37℃温箱烘干)后备用。2)将耐高温的聚丙塑料薄膜袋，可按实验要求压合成一定规格的袋，100℃15分灭菌后备用。3)将优质蛋白胨、氯化钠、磷酸氢二钾、乳糖、琼脂糖、蒸馏水按比例混合加热溶解，冷后调pH7.0-7.2，再按量加入1.6％溴甲酚紫溶液，混匀100℃15分灭菌，冷至60℃左右按量加入4％TTC溶液，混匀。4)浸渍纸片用无菌镊子将纸片排放于消毒的大搪瓷盘内，放40℃左右恒温室或37℃温箱烘干，无菌操作装入消毒的塑料袋内，包装好放冰箱保存备用。
全文摘要
本发明涉及一种乳制品大肠杆菌鉴定试剂——乳制品大肠杆菌快速检测纸片，用于监督乳制品的卫生指标。其主要成分是优质蛋白胨、氯化钠、磷酸氢二钾、乳糖、琼脂糖、1.6％溴甲酚紫溶液、4％TTC溶液、蒸馏水按比例混合经溶解、校正pH、高温灭菌、冷却、加指示剂、浸渍纸片、恒温烘干、无菌包装等工艺而成一种专业的乳制品大肠杆菌快检纸片。本发明具有以下优点适合于各种乳制品大肠杆菌的检测；操作简便快速易行，不需特殊培养条件；成本及价格低廉；敏感性好、特异性强、准确性高；检测结果可定量分析；含缓冲剂、不受乳制品中干扰因素的影响。
文档编号G01N33/50GK101029869SQ20061004257
公开日2007年9月5日 申请日期2006年2月27日 优先权日2006年2月27日
发明者权力敏, 曲奕, 安子蔚 申请人:权力敏