专利名称：岩藻糖苷酶诊断试剂盒及岩藻糖苷酶活性测定方法
技术领域：
本发明涉及一种岩藻糖苷酶诊断试剂盒，同时本发明还涉及测定 岩藻糖苷酶活性的方法，属于医学检验测定技术领域。
背景技术：
1980年法国学者Deugnier等研究发现，原发性肝癌患者血清岩藻 糖苷酶升高，并被众多的研究所证实。故有人提出岩藻糖苷酶可作为 原发性肝癌的肿瘤标志物，与甲胎蛋白联合或参照应用大大提高了诊 疗价值。近年来研究发现，岩藻糖苷酶对某些疾病的发生、发展均具 有重要意义。
血清岩藻糖苷酶测定主要有荧光法和比色法。比色法以4-硝基苯a 丄-岩藻吡喃糖苷或4-硝基苯(1丄-岩藻糖苷为底物显色，本法简便，设 备要求不高，国内外广泛采用。
发明内容
本发明要解决的技术问题是提出一种利用酶比色法(Enzymatic Colorimetric Method)技术，连续监测色原在410或366nrn波长处吸 光度的变化，得以测定岩藻糖苷酶活性的方法，同时，本发明还将给 出用以实现该方法的岩藻糖苷酶诊断试剂盒，采用该试剂盒不仅可以 在紫外/可见光分析仪或半、全自动生化分析仪上进行岩藻糖苷酶活性 测定，而且测定速度快、准确度高，因而可以得到切实的推广应用。
本发明岩藻糖苷酶活性测定方法原理如下-
合成色原岩藻糖苷底物岩藻糖苷酶色原+相应岩藻糖苷 这种方法应用岩藻糖苷酶酶促反应连续监测法，岩藻糖苷酶酶解合
成色原岩藻糖苷底物释放出色原(在410或366nrn处有吸收峰)， 从而得以测定410或366nrn处吸光度上升的速度，可以测算岩藻 糖苷酶的活性大小。 实验表明，从测定结果的准确性和配制成本的经济性两方面综合 考虑，无论是单剂或双剂，如下成分关系的本发明岩藻糖苷酶诊断试
剂盒较为理想
缓冲液 500 mmol/L
稳定剂 10 mmol/L
合成色原岩藻糖苷底物 3 mmol/L
本发明的岩藻糖苷酶诊断试剂盒可以是单剂，包括
缓冲液、稳定剂、合成色原岩藻糖苷底物。 试剂盒可以是干粉状态，在使用前加水溶解后使用；也可以配制成液 体试剂，直接使用。
也可以将上述单剂试剂配成如下双剂试剂-试剂1
缓冲液 。 试剂2
缓冲液、稳定剂、合成色原岩藻糖苷底物。 合成色原岩藻糖苷底物在试剂1或试剂2中的位置可以不限。试剂盒可以是干粉状态，在使用前加水溶解后使用；也可以配制成液体 试剂，直接使用。
无论是单剂或双剂，本发明测定岩藻糖苷酶活性的方法，其合成色 原岩藻糖苷底物可以是对硝基苯基-2-o- (oc-L-吡喃岩藻糖苷)-卩-D-吡 喃半乳糖、对硝基苯基-岩藻糖苷、对硝基苯基-ot-L-吡喃岩藻糖苷或 4-甲基伞形酮-a-L-岩藻糖苷中的 一种。
具体实施例方式
下面结合实施例子对本发明作进一步的说明。 实施例一
本实施例的岩藻糖苷酶诊断试剂为单试剂，包括
柠檬酸钠缓冲液 pH6.0 500 mmol/L
稳定剂 10mmol/L 对硝基苯基-2-o- (a-L-吡喃岩藻糖苷)-p-D-吡喃半乳糖
3 mmol/L
试剂全部溶解配好后，分装入瓶，进行冷冻干燥，制成千粉试剂； 使用前，加入纯净水，复溶后使用。
在全自动生化分析仪上设定温度37'C，反应时间IO分钟，起 始吸光度《0.1，测试主波长410nm，测试副波长505nm，被测岩藻糖 苷酶样品与试剂的体积比例为1/25，反应方向为正反应(上升反应)， 延迟时间大约1分钟左右，检测时间2分钟左右。
加入样品和试剂后，使之混合并发生反应，最终将反应物置于生 化分析仪下，检测主波长410nm吸光度上升的速度，从而测算出岩藻
糖苷酶的活性大小。 实施例二
本实施例的岩藻糖苷酶诊断试剂为双试剂，包括:
试剂l
柠檬酸钠缓冲液 pH6.0
500 mmol/L
试剂2
柠檬酸钠缓冲液 pH6.0 稳定剂
4-甲基伞形酮-a-L-岩藻糖苷
500 mmol/L 10 mmol/L 3 mmol/L
试剂全部溶解配好后，分装入瓶，制成液体双试剂，可以直接使用。 在全自动生化分析仪上设定温度37。C，反应时间10分钟，起始 吸光度《0.1，测试主波长366nm，测试副波长505nm,被测岩藻糖苷 酶样品与试剂1、试剂2的体积比例为2/20/5，反应方向为正反应(上 升反应)，延迟时间大约1分钟左右，检测时间2分钟左右。
加入样品和试剂后，使之混合并发生反应，最终将反应物置于生化 分析仪下，检测主波长366nm吸光度上升的速度，从而测算出岩 藻糖苷酶的活性大小。 总之，实验证明，采用本发明的测定方法完全可以通过一般生化分析 仪器得出所需的测定结果，并且灵敏度高、精确度好、不受内外源物 质的污染，便于推广应用。
权利要求
1.一种岩藻糖苷酶(EC 3.2.1.51)活性测定方法，其方法原理如下id="icf0001" file="A2006100972140002C1.gif" wi="130" he="6" top= "38" left = "40" img-content="drawing" img-format="tif" orientation="portrait" inline="no"/>将最终反应物置于可见光分析仪或半、全自动生化分析仪下，检测主波长410或366nm吸光度上升的速度，测算出岩藻糖苷酶的活性大小测定结果。合成色原-岩藻糖苷底物可以是下列底物中之任何一种对硝基苯基-2-o-(α-L-吡喃岩藻糖苷)-β-D-吡喃半乳糖(p-Nitrophenyl-2-o-(α-L-fucopyranosyl)-β-D-galactopyranoside)对硝基苯基-岩藻糖苷(p-Nitrophenyl-α-L-fucoside)对硝基苯基-α-L-吡喃岩藻糖苷(p-Nitrophenyl-a-L-fucopyranoside)以上三种底物其吸收波长皆为410nm4-甲基伞形酮-α-L-岩藻糖苷(4-Methylumbelliferyl-α-L-fucoside)吸收波长366nm。
2. —种岩藻糖苷酶诊断试剂盒，主要成分包括缓冲液 20——500 mmol/L稳定剂 1——50 mmol/L合成色原-岩藻糖苷底物 0.3——12 mmol/L其特征在于试剂盒可以是干粉状态，在使用前加水溶解后使用；也可以配制成液体试剂，直接使用。
3. 根据权利要求2所述岩藻糖苷酶诊断试剂盒，其特征在于 由缓冲液、稳定剂、合成色原-岩藻糖苷底物组成单剂试剂。
4.根据权利要求2所述岩藻糖苷酶诊断试剂盒，其特征在于由缓冲液、稳定剂、合成色原-岩藻糖苷底物组成双剂试剂；试剂1， 由缓冲液组成；试剂2，由缓冲液、稳定剂、合成色原-岩藻糖苷底 物组成。
全文摘要
本发明涉及一种岩藻糖苷酶(EC 3.2.1.51)诊断试剂盒，同时本发明还涉及测定岩藻糖苷酶活性的方法原理、试剂的组成及成分，属于医学检验测定技术领域。本发明的试剂盒主要成分包括缓冲液、合成色原-岩藻糖苷底物及稳定剂，这些成分可以配成单剂试剂盒及双剂试剂盒；通过将样品与试剂按一定的体积比混合，使之发生一系列的酶促反应，再将反应物置于可见光分析仪下，检测主波长410nm或366nm处吸光度上升的速度，从而测算出岩藻糖苷酶的活性大小。采用本发明完全可以通过可见光分析仪器得出所需的测定结果，便于推广应用。
文档编号G01N21/25GK101169366SQ20061009721
公开日2008年4月30日 申请日期2006年10月24日 优先权日2006年10月24日
发明者王尔中 申请人:苏州艾杰生物科技有限公司