专利名称：：一种对伞花烃的含量测定方法
技术领域：
：本发明涉及医药领域，具体涉及一种对伞花烃的含量测定方法，具体涉及中药制剂中对伞花烃的含量测定方法。
背景技术：
：对伞花烃是一种有芳香气味的无色透明液体，在自然界中分布极广，一般均以少量存丫卜于多种植物的精油中，如土荆芥油，杂樟油，杜鹃花油，杜香油等。目前对伞花烃的含量测定均采用气相色谱方法，多选用固定相为含5%苯基的甲基聚硅氧烷的色谱柱，且均为外标汰测定，而内标法测定尚未见报道。荆花胃康胶丸由天津天士力制药股份有限公司生产，是土荆芥油加入适量精炼植物油制成的胶丸制剂，具有理气散寒，消热化瘀功能。由于本品所含的成份多且复杂，且有的结构及性状极其相似，原质量控制方法采用药典规定的经典挥发油测定法测定总挥发油的含量，不能反映其中有效成份的含量的变化。测定总挥发油的含量需首先确定其相对密度。然lfU，土荆芥挥发油中各成分的含量因产地不同，所取部位不同而异，其相对密度也很难确定为固定值；且采用经典挥发油测定法，操作步骤较为繁琐，时间较长，不利于微量、快速、准确的定量。因此，有必要建立更先进，更有效的方法来控制荆花胃康胶丸的质量。
发明内容本发明的目的在于为了解决上述问题，提供了一种对伞花烃的含量测定方法。为了更有效的控制荆花胃康胶丸的质量，本发明建立气相色谱方法测定该方中的单体指标成分对伞花烃的含量。本发明首次采用内标法，并首次选用固定相为含氰丙基苯基的甲^聚硅氧烷的色谱柱。与原经典挥发油测定法测定总挥发油含量相比较，本发明操作简单快速，准确可靠，灵敏度、精密度和回收率高，重现性好,能更有效控制荆花胃康胶丸原料和制剂的说明质量°本发明通过以下方案予以实施a.内标溶液的制备；b.供试品溶液的制备；c.校正因子的测定；d.所得供试品溶液进行气相色谱法测定。其中步骤a中配制的内标溶液浓度为0.120mg-niL—'，所采用内标物为苯甲醚；歩骤b中配制的供试品溶液浓度为1~50mgTtiL-';步骤c中校正因子的测定为配制含0.1200^，011^对伞花烃和0.1~2011^*1111/|内标物的溶液，注入气相色谱仪，进行分析，即得歩骤a、b、c中各种溶液的制备采用低级有机酸酯类或石油醚为溶剂，其中低级有机酸酯类包括A酸B酯A为甲、乙、丙或丁，B为甲、乙、丙或丁；步骤d中对所得供试品溶液进行气相色谱法测定采用弹性石英毛细管柱固定相为含5%20%氰丙基的苯基甲基聚硅氧烷；所用载气为99.999%高纯氮；载气流速为0.33mL'min";进样口温度为180250°C;检测器温度为200300。C;升温程序为5(TC至300。C。其中步骤a中配制的内标溶液浓度优选为2m『mL人步骤b中配制的供试品溶液浓度优选为7.5mg'mL—';步骤c中校正因子的测定对伞花烃对照品溶液浓度优选为0.5mg'ml/1，内标物溶液浓度优选为0.5mg'mL—';步骤a、b、c中各种溶液的制备优选乙酸乙酯为溶剂；歩骤d中对所得供试品溶液进行气相色谱法测定采用弹性石英毛细管柱固定相优选含"％械丙基苯基的甲基聚硅氧烷；载气流速优选lmL'min";进样口温度优选2(XTC;检测器温度优选220。C;升温程序优选为50。C，保持0min，以1.5°C/min升至80°C，保持Omin，再以15°C/min升至200°C，保持5min。本发明建立气相色谱方法测定该方中的单体指标成分对伞花烃的含量。与原经典挥发油测定法测定总挥发油含量相比较，本发明操作简单快速，准确可靠，灵敏度、精密度和回收率高，重现性好，能更有效控制荆花胃康胶丸原料和制剂的质量。采用本发明测定供试品中对伞花烃的含量，供试品用量小，操作简单快速，所得结果准确可靠，解决了目前所采用方法中存在的操作繁琐，耗物耗时等问题。方法学考察本发明通过精密度、回收率等指标进行了方法学考察。一、仪器、试剂与样品仪器惠普HP6890气相色谱仪及FID检测器；对照品对伞花烃对照品，购自Sigma-Aldrich公司(含量》99.5%)，批号063070/1;试剂乙酸乙酯，色谱纯，Merck公司；苯甲醚，化学纯，中国医药集团上海化学试剂公司；供试样品土荆芥油；荆花胃康胶丸(由天津天士力制药股份有限公司提供，批',)051002)。二、色谱条件色谱柱毛细管柱DB-1701，30mmX0.25mm(I.D.)，0.25(im(Flim);柱流速l.OmL'mirf1;柱温程序升温，50'C(保持Omin)，1.5°C/min升至80。C(保持Omin)，15°C/min升至2()()t(保持5min);分流模式15:1;进样口温度20(TC;检测器温度22(TC;进样量l.(HlL。三、方法学考察1.对照品溶液的制备取对伞花烃对照品适量，精密称定重量为49.85mg，置于10mL量瓶中，用乙酸乙酯溶解，定容，制成浓度为4.985mg'mL—1的对照品溶液。2.内标溶液的制备取苯甲醚适量，精密称定重量为U0.70mg.用乙酸乙酯溶解，定容至50mL,制成浓度为2.214mg'mL—1的内标溶液。3.供试品溶液的制备取供试品适量，精密称定，置2mL量瓶中，加入少量乙酸乙酯溶解，再加入0.5mL内标液，用乙酸乙酯定容，摇匀，即得。4.校正因子测定分别精密量取1.980mg'mL—'的对照品溶液和内标溶液各0.5mL，置于2mL量瓶中，加乙酸乙酯定容，摇匀。吸取lpL注入气相色谱仪，计算校正因子。结果见表l。表1校正因子测定实验<table>tableseeoriginaldocumentpage7</column></row><table>5.标准曲线的绘制分别精密量取浓度为4.985mg'mL"对伞花烃对照品溶液0.05mL，0.2mL，0.3mL，0.5ml.，0.6mL，1.0mL于2mL容量瓶中，加入0.5mL内标溶液，用乙酸乙酯定容，摇匀，配制成浓度分别为0.125mg.mL"，0.499mg.mL"，0.748mg.mL-1，1.246mg.mL-1，1.496mg'mL-1，2.493mg*mL—'的对照品溶液。分别吸取各对照品溶液l.OpL注入气相色谱仪分析，记录峰l化积。以对伞花烃峰面积与内标峰面积之比为横坐标，以对伞花烃溶液浓度为纵坐标，绘制fe准曲线，在0.0078吗0.1558吗范围内呈良好线性关系，相关系数为R2=l，标准曲线为〉=0.4347x-0.0035。6.稳定性试验分别在第O、1、4、8、12、24h，吸取新制备的同一供试品溶液1.0pL，注入气相色谱仪分析，计算对伞花烃含量的RSD为0.3%，表明供试品溶液在24h内稳定。结果见表2。表2稳定性试验结果稳定时间/h含量％RSD/%18.6848.680.388.70128.71248.737.仪器精密度试验取同一对照品溶液，吸取l.OpL注入气相色谱仪分析，连续分析6次，计算各峰面积比的RSD为0.3n/。。结果见表3。表3<table>tableseeoriginaldocumentpage8</column></row><table>8.重复性试验依"供试品溶液制备"项下方法制备供试品溶液6份，各吸取1.(^L注入气相色谱仪分析，计算对伞花烃含量，测定结果的RSD为1.5%。重复性试验结果见表4。表4重复性试验结果<table>tableseeoriginaldocumentpage8</column></row><table>9.回收率试验依法配制浓度为1.21mg'mL"的对伞花烃对照品溶液。分别称取供试品约8.4mg，7.0mg，5.6mg各三份，置于2mg容量瓶中，精密称定，用少量乙酸乙酯溶解；分别加入对照品溶液0.4mL，0.5mL，0.6mL，加入0.5mL内标溶液，用乙酸乙酯定容，摇匀，配制成样品与对照品中对伞花烃浓度比分别为1.5:1，1:1，1:1.5的溶液，各吸取l.OpL注入气相色谱仪分析，计算对伞花烃含量，计算平均回收率为97.9%，RSD为2.0M。回收率试验结果见表5。表5回收率试验结果<table>tableseeoriginaldocumentpage8</column></row><table>四、含量测定分别精密称取各供试品适量，依"供试品制备"项下方法制备供试品溶液。各吸取1.0|il.，注入气相色谱仪，每份连续分析两次，计算平均含量。含量测定实验结果见表6。表6含量测定实验结果_^_对伞花烃含量/%土荆芥(晋江)种子挥发油土荆芥(漳州)种子挥发油6.91荆花胃康胶丸挥发油12.48土荆芥干燥全草挥发油8.69土荆芥无种子全草挥发油8.61与原质量控制方法的比较1方法U取五批不同批号的荆花胃康胶丸，分别依原质量控制方法一经典挥发油测定法(中国药典1990年版一部附录48页)测定挥发油总量。具体歩骤取由天津天士力制药股份有限公司生产的同一批号(051002)荆花胃康胶丸40粒，置烧瓶中，加水500ml与玻璃珠数粒，振摇混合后，连接挥发油测定器与lHl流冷凝管，自冷凝管上端加水使充满挥发油测定器的刻度部分，并溢流入烧瓶时为止，置屯热套中缓缓加热至沸，并保持微沸约5h，至测定器中挥发油量不再增加，停止加热，放'ff:片刻，开启测定器下端的活塞，将水放出，至油层上端到达刻度0线上端5mm处为止。放置lh以上，再开启活塞使油层下降至其上端恰与刻度O线平齐，读取挥发油量，按相对密度0.970计算，即得挥发油总量，再计算平均每丸总挥发油含量。1.2取与方法1完全相同的五批不同批号荆花胃康胶丸挥发油，分别依本发明测定其中对伞花烃的含量。具体步骤取对伞花烃对照品适量，精密称定重量为19.80mg，置于10mL量瓶中，川乙酸乙酯溶解，定容，制成浓度为1.980mg'mL"的对照品溶液；取苯甲醚适量，精密称定审量为110.70mg，用乙酸乙酯溶解，定容至50mL，制成浓度为2.214mg'mL—1的内标液；分別精密量取对照品溶液和内标溶液各0.5mL，置于2mL量瓶中，加乙酸乙酯定容，摇匀。吸取lpL注入气相色谱仪，计算校正因子。取供试品约15mg，精密称定，置2mL量瓶中，加入少量乙酸乙酯溶解，再加入0.5mL内标液，用乙酸乙酯定容，摇匀；吸取1.0nL注入气相色谱仪分析。GC条件为色谱柱为毛细管柱DB-1701，30mmX0.25mm(I.D.)，0.25nm(Flini);载气流速为l.OmL'min—1;升温程序为5(TC(保持Omin)，1.5°C/min升至8(TC(保持Omin)，15°C/min升至20(TC(保持5min);分流模式为15:1;进样口温度为20(TC;检测器温度为22()°C。采用内标法测定对伞花烃含量。2结果比较<table>tableseeoriginaldocumentpage10</column></row><table>3结论采用本发明可以精确地测定其指标成份对伞花烃的含量，对荆花胃康胶丸进行更为有效的质量控制。图l、荆花胃康胶丸成品中对伞花烃含量测定GC色谱图图2、荆花胃康胶丸原料中对伞花烃含量测定GC色谱图图3、对伞花烃对照品GC色谱图。具体实施例方式下面通过实施例进一步详细说明本发明的有益效果，该实施例仅用于说明本发明而对木发明并没有限制。以下各实施例中，供试品均采用由天津天士力制药股份有限公司生产的批号为051002的荆花胃康胶丸。实施例l取对伞花烃对照品适量，精密称定重量为19.80mg，置于10mL量瓶中，用乙酸乙酯溶解，定容，制成浓度为1.980mg'mL—1的对照品溶液；取苯甲醚适量，精密称定重量为110.70mg.用乙酸乙酯溶解，定容至50mL，制成浓度为2.214mgTnL—1的内标液；分别精密量取对照,',"溶液和内标溶液各0.5mL，置于2mL量瓶中，加乙酸乙酯定容，摇匀。吸取lpL注入气相色谱仪，计算校正因子。取供试品约5mg，精密称定为15.54mg，置2mL量瓶中，加入少";乙酸乙酯溶解，再加入0.5mL内标液，用乙酸乙酯定容，摇匀；吸取l.OnL注入气相色i普仪分析。GC条件为色谱柱为毛细管柱DB-1701，30mmX0.25mm(LD.)，0.25pm(Flim);载'〔流速为！mL'min";升温程序为5(TC保持Omin，1.5°C/min升至8(TC保持Omin，15°C/minJl至20(TC保持5min;分流模式为15:1;进样口温度为20(TC;检测器温度为220。C。采用内标法进行含量测定，结果校正因子为0.746，内标物与临近峰的分离度为10.3，对伞花烃与临近峰的分离度为5.4，对伞花烃含量为7.73nig/丸。实施例2取对伞花烃对照品适量，精密称定重量为19.80mg，置于10mL量瓶中，用乙酸乙酯溶解，定容，制成浓度为1.980mg-mL"的对照品溶液；取苯甲醚适量，精密称定重量为U0.70mg.用乙酸乙酯溶解，定容至50mL，制成浓度为2.214mg'mL—1的内标液；分别精密量取对照品溶液和内标溶液各0.5mL，置于2mL量瓶中，加乙酸乙酯定容，摇匀。吸取1^L注入气相色谱仪，计算校正因子。取供试品约15mg,精密称定为15.54mg，置2mL量瓶中，加入少'V.:乙酸乙酯溶解，再加入0.5mL内标液，用乙酸乙酯定容，摇匀；吸取l.OpL注入气相色谱仪分析。GC条件为色谱柱为毛细管柱DB-1701，30mmX0.25mm(l.D.)，0.25|am(Flim);载'〔流速为0.5mL.min";升温程序为5(TC保持Omin，1.0°C/min升至80。C保持5min，15°C/min升至280。C保持10min;分流模式为15:1;进样口温度为23(TC;检测器温度为30(TC。釆川内标法进行含量测定，结果，校正因子为0.746，内标物与临近峰的分离度为8.7，对伞花'K，与临近峰的分离度为4.2，对伞花烃含量为7.68mg/丸。实施例3取对伞花烃对照品适量，精密称定重量为19.80mg，置于10mL量瓶中，用乙酸乙酯溶解，定容，制成浓度为1.980mgTnL—1的对照品溶液；取苯甲醚适量，精密称定重量为H0.70mg.用乙酸乙酯溶解，定容至50mL，制成浓度为2.214mgTtiU1的内标液；分别精密量取对照"溶液和内标溶液各0.5mL，置于2mL量瓶中，加乙酸乙酯定容，摇匀。吸取lpL注入气相色谱仪，计算校正因子。取供试品约15mg，精密称定为15.54mg,置2mL量瓶中，加入少W乙酸乙酯溶解，再加入0.5mL内标液，用乙酸乙酯定容，摇匀；吸取l.OnL注入气相色谱仪分析。GC条件为色谱柱为毛细管柱DB-1701，30mmX0.25mm(I.D.),0.25|am(Flim);载'〔流速为2.5mL'min—';升温程序为50。C保持Omin,2.0°C/min升至8(TC保持Omin，15°C/min升至20(TC保持5min;分流模式为15:1;进样口温度为20(TC;检测器温度为22(TC。采用内标法进行含量测定，结果，校正因子为0.746，内标物与临近峰的分离度为6.5，对伞花烃'j临近峰的分离度为3.3，对伞花烃含量为7.70mg/丸。实施例4取对伞花烃对照品适量，精密称定重量为19.80mg，置于10mL量瓶中，用乙酸乙酯溶解，定容，制成浓度为1.980mg'mL—'的对照品溶液；取苯甲醚适量，精密称定重量为110.7()mg.用乙酸乙酯溶解，定容至50mL，制成浓度为2.214mg'mU1的内标液；分别精密量取对照品溶液和内标溶液各0.5mL，置于2mL量瓶中，加乙酸乙酯定容，摇匀。吸取lpL注入气相色谱仪，计算校正因子。取供试品约15mg，精密称定为15.54mg，置2mL量瓶中，加入少";.:乙酸乙酯溶解，再加入0.5mL内标液，用乙酸乙酯定容，摇匀；吸取l.OpL注入气相色谱仪分析。GC条件为色谱柱为毛细管柱DB-1701，30mmX0.25mm(I.D.)，0.25|am(Flim);载'〔流速为1.0mL'min—';升温程序为5(TC保持Omin，1.5°C/min升至8(TC保持Omin，15。CZniin升至23(TC保持5min;分流模式为15:1;进样口温度为19(TC;检测器温度为25(TC。采用内标法进行含量测定，结果，校正因子为0.746，其中内标物与临近峰的分离度为9.4，对伞花烃与临近峰的分离度为4.8，对伞花烃含量为7.75mg/丸。施例5取对伞花烃对照品适量，精密称定重量为9.91mg，置于10mL量瓶中，用乙酸乙酯溶解，定容，制成浓度为0.991mg，mL"的对照品溶液；取苯甲醚适量，精密称定重量为51.20mg,川乙酸乙酯溶解，定容至50mL，制成浓度为1.024mg'mL—1的内标液；分别精密量取对照品溶液和内标溶液各0.5mL，置于2mL量瓶中，加乙酸乙酯定容，摇匀。吸取1^L注入气相色ifi:仪，计算校正因子。取供试品约7.5mg，精密称定为6.57mg，置2mL量瓶中，加入少量乙酸乙酯溶解，再加入0.5mL内标液，用乙酸乙酯定容，摇匀；吸取l.OpL注入气相色谱仪分析,,GC条件为色谱柱为毛细管柱DB-1701，30mmX0.25mm(I.D.)，0.25|am(Flim);载气流速为l.OmLmin1;升温程序为50。C(保持Omin)，1.5°C/min升至80。C(保持Omin),15°C/min升个20(TC(保持5min);分流模式为15:1;进样口温度为200°C;检测器温度为220。C。采用内fe法进行含量测定，结果校正因子为0.755;内标物和对伞花烃与临近峰的分离度均大于1.5:测得对伞花烃含量为7.37mg/丸。实施例6吸取实施例1中配制的对伞花烃对照品溶液0.5mL，置于10mL量瓶中，用乙酸乙酯溶解，定容，制成浓度为0.099mg'mL—1的对照品溶液；吸取实施例1中配制的内标液0.5mL，置于10mL量瓶中，用乙酸乙酯溶解，定容，制成浓度为0.111mg.mL-'的对照品溶液；分别精密量取对照品溶液和内标溶液各0.5mL，置于2mL量瓶中，加乙酸乙酯定容，摇匀。吸収liaL注入气相色谱仪，计算校正因子。取供试品约1.5mg，精密称定为1.61mg，置2mL量瓶中，加入少量乙酸乙酯溶解，再加入0.5mL内标液，用乙酸乙酯定容，摇匀；吸取1.0)aL';i:入气相色谱仪分析。GC条件为色谱柱为毛细管柱DB-1701，30mmX0.25mm(I.D.)，0.25nm(Flim);载气流速为l.OmL'min-1;升温程序为50。C(保持Omin)，1.5°C/min升至8(TC(保持Omin)，15-C/min升至200。C(保持5min);分流模式为15:1;进样口温度为20(TC;检测器温度为22(TC。采用内标法进行含量测定，结果校正因子为0.756;内标物和对伞花烃'j临近峰的分离度均大于1.5;测得对伞花烃含量为7.28mg/丸。实施例7取对伞花烃对照品适量，精密称定重量为38.94mg，置于2mL量瓶中，用乙酸乙酯溶解，定容，制成浓度为19.47mg'mL"的对照品溶液；取苯甲醚适量，精密称定重量为203.4mg.川乙酸乙酯溶解，定容至10mL，制成浓度为20.34mg'mL"的内标液；分别精密量取对照品溶液和内标溶液各0.5mL，置于2mL量瓶中，加乙酸乙酯定容，摇匀。吸取^L注入气相色^仪，计算校正因子。取供试品约100mg，精密称定为99.13mg，置2mL量瓶中，加入少梟乙酸乙酯溶解，再加入0.5mL内标液，用乙酸乙酯定容，摇匀；吸取l.OpL注入气相色谱仪分析。GC条件为色谱柱为毛细管柱DB-1701，30mmX0.25mm(I.D.)，0.25nm(Flim);载气流速为l.OmL'min—1;升温程序为50。C(保持Omin)，1.5°C/min升至80。C(保持Omin)，15°C/mm升至20(TC(保持5min);分流模式为15:1;进样口温度为200。C;检测器温度为220。C。采川内标法进行含量测定，结果校正因子为0.760;内标物和对伞花烃与临近峰的分离度均人于1.5;测得对伞花烃含量为7.45mg/丸。权利要求1.一种对伞花烃的含量测定方法，由下述步骤组成a.内标溶液的制备；b.供试品溶液的制备；c.校正因子的测定；d.所得供试品溶液采用内标法进行气相色谱法测定。2.根据权利要求1所述的对伞花烃的含量测定，其特征在于步骤a中配制的内标溶液浓度为0.120mg-mL—、所采用内标物为苯甲醚。3.根据权利要求1所述的荆花胃康胶丸中对伞花烃的含量测定，其特征在于歩骤b中配制的供试品溶液浓度为150mg-mL—'。4.根据权利要求1所述的对伞花烃的含量测定，其特征在于步骤c中校正因子的测定为W制含0.120mg'mL」对伞花烃和0.120mg'mL—1内标物的溶液，注入气相色谱仪，进行分析，即得。5.根据权利要求1所述的对伞花烃的含量测定，其特征在于步骤d中对所得供试品溶液进行气相色谱法测定所用色谱柱为弹性石英毛细管柱，固定相为含5%20%氰丙基苯基的甲基聚硅氧烷。6.根据权利要求1所述的对伞花烃的含量测定，其特征在于步骤a中配制的内标溶液浓度为0.120mg.mL"，所采用内标物为苯甲醚；步骤b中配制的供试品溶液浓度为l50mg-mL-、步骤c中，配制含0.120mg'ml/1对伞花烃和0.1~20mg'mL—1内标物的溶液，注入气相色g仪，进行分析；步骤d中对所得供试品溶液进行气相色谱法测定所用色谱柱为弹性石英毛细管柱，固定相为含5%20%氰丙基苯基的甲基聚硅氧垸。7.根据权利要求6所述的对伞花烃的含量测定，其特征在于步骤a、b或c中各种溶液的制备中采用低级有机酸酯类或石油醚为溶剂。8.根据权利要求7所述的荆花胃康胶丸中对伞花烃的含量测定，其特征在于所述的低级有机酸酯类为乙酸乙酯。9.根据权利要求8所述的对伞花烃的含量测定，其特征在于对所得供试品溶液进行气相色if;法测定所用载气为99.999%的高纯氮；载气流速为0.33mL'min—';进样口温度为180°C25()。C;检测器温度为200。C300。C;升温程序为50。C至30(TC。10.根据权利要求9所述的对伞花烃的含量测定，其特征在于对所得供试品溶液进行气相色谱法测定的最佳条件为采用弹性石英毛细管柱，固定相为含14%氰丙基苯基的甲基聚娃氧'说;载气流速为lmLmin—';进样口温度为20(TC;检测器温度为22(TC;升温程序为5(TC保士.VOmin，1.5。C/min升至8(TC保持0min，15°C/min升至200。C保持5min。全文摘要本发明公开了一种对伞花烃的含量测定方法，该方法包括内标溶液的制备，供试品溶液的制备，校正因子的测定，所得供试品溶液利用内标法进行气相色谱的测定。本发明所用色谱柱为弹性石英毛细管柱，固定相为含5％～20％氰丙基的苯基甲基聚硅氧烷。本发明采用气相色谱法测定该方中的单体指标成分对伞花烃的含量，与目前暂选用的经典挥发油测定法测定总挥发油含量相比较，本发明操作简单快速，准确可靠，灵敏度，精密度和回收率高，重现性好，采用本发明能更有效的控制的质量。文档编号G01N30/00GK101183089SQ20061014617公开日2008年5月21日申请日期2006年11月13日优先权日2006年11月13日发明者于红梅,兵王,钧高申请人:天津天士力制药股份有限公司