专利名称：土霉素胶体金法检测试纸的制作方法
技术领域：
本实用新型属于用标记抗体与抗原免疫反应来测试待测物质的试纸。
背景技术：
土霉素(Oxytetracyclin)属于四环素族抗生素，具有广谱抗菌活性，其价格低廉，因此作为畜禽的饲料添加剂控制某些动物性疾病、促进动物的生长发育，被广泛应用于畜禽肉制品生产。由于其滥用所导致的药物残留对人体健康有潜在危害，因此其在动物肉制品中的残留限量受到国家农业部的严格控制，土霉素在肉制品在的残留限量为0.1mg/kg。目前，测定土霉素的方法主要有高效液相色谱(HPLC)和酶联免疫等方法，HPLC法要求有特殊的仪器设备和专业技术人员，且样品筛选量少、需要样品的前处理，因此其检测成本高、检测时间长，这些因素限制了HPLC法对土霉素检测项目的开展，不能完全满足当前食品安全对土霉素残留量检测的需要。而酶联免疫试剂主要依赖进口，检测成本较高。
发明内容
本实用新型的目的是提供使用方法简便，省时省力省钱，灵敏度高的土霉素检测试纸。
本实用新型土霉素胶体金法检测试纸包括固着于衬板7上的硝酸纤维素膜6，其特征是沿硝酸纤维素膜6纵向表面由下向上间隔地依次固着金标土霉素单抗2、土霉素偶联抗原3和抗鼠IgG抗体4，构成复合层。
所述硝酸纤维素膜6上端与上吸水垫5串联；下端或通过金标土霉素单抗2与下吸水垫1连接，或直接与下吸水垫1串联。
所述下吸水垫1、金标土霉素单抗2及上吸水垫5表面贴有不干胶纸。
所述试纸以土霉素偶联抗原3作为检测带，以抗鼠IgG抗体4作为参照带。
金标土霉素单抗和土霉素偶联抗原为最低检测标准量设置。
本实用新型原理样液中的土霉素分子由硝酸纤维素膜毛细管虹吸作用向膜上端移动，在金标单抗处，土霉素分子与金标单抗结合形成复合物；当样液中土霉素分子过量时，复合物漂移到二抗参照带被捕捉，检测带颜色不变；当土霉素分子未达到检测标准时，金标单抗漂移到检测带与土霉素偶联抗原结合，检测带显色。因此，检测带颜色随着样液中土霉素分子含量大小变化。
本实用新型整个操作过程只须20分钟，简便、快速、经济、灵敏度可达到1ppb，对牛奶、血清、饲料、尿液、肉类和组织提取物等样品进行土霉素残留量检测，可满足快速检测的要求。
图1为本实用新型主视图。
图2是本实用新型下吸水垫与金标土霉素单抗部分交叠的侧视图。
图3是本实用新型下吸水垫与硝酸纤维素膜串联的侧视图。
具体实施方式
一、试纸图中包括，下吸水垫1、金标土霉素单抗2、土霉素偶联抗原3、抗鼠IgG抗体4、上吸水垫5，硝酸纤维素膜6、塑料衬板7。将金标土霉素单抗2、土霉素偶联抗原3、羊抗鼠IgG抗体4间隔4mm顺序敷于底板7中部的的硝酸纤维素膜6上，与硝酸纤维素膜6表面形成复合层。
下吸水垫1和固相金标单抗2表面以及上吸水垫5表面贴有彩色不干胶纸。
土霉素单抗的抗体效价为15000；金标土霉素单抗和土霉素偶联抗原为标准量1ppb设置。
其中，以土霉素偶联抗原3作为检测带，以抗鼠IgG抗体4作为参照带。
膜条外观平整，材料附着牢固，宽度2.5mm，液体移行速度不低于5mm/min。
图2是将下吸水垫1粘贴于底板7靠金标土霉素单抗2一端，并与硝酸纤维素膜6表面的金标土霉素单抗2部分交叠；上吸水垫5粘贴于底板7靠参照带4一端，并与硝酸纤维素膜6一端交叠。
图3是将下吸水垫1粘贴于底板7靠金标土霉素单抗2一端，并与硝酸纤维素膜6部分交叠；上吸水垫5粘贴同图2。
本试纸为单一固体条式结构并可根据需要加装塑料保护夹片。
二、试纸使用(1)样品制备血清抽取待检动物血液，离心或静置后取透明上清夜使用；若血清有过度溶血现象，将血清用蒸馏水稀释一倍后再进行实验，否则试剂片红色太深，影响测试结果。
尿液用尿液直接进行测试，如浑浊，先离心取上清夜或蒸馏水1∶1稀释。
饲料取1g一磨碎的待测饲料加入10ml稀释液，其间每隔2min用力震荡；10min时，摇均后静置1min取上清夜100μl，用稀释液做10倍稀释后用试纸分析。
(2)操作及检测将试纸箭头端浸泡在待测样本中，不要超过下吸水垫。浸入30sec取出放平，10min读取结果。
阴性两条带都显色，且检测带颜色深于参照带颜色，说明样品中不含土霉素。
两条带都显色，且检测带颜色与参照带颜色相同或接近，说明样品的土霉素含量低于1ppb(1ng/ml)。
阳性两条带都显色，但检测带颜色浅于参照带颜色，说明检测样品中土霉素含量超过1ppb(1ng/ml)。
检测带不显色，参照带显色，说明样品中的土霉素含量高于5ppb(5ng/ml)。
检测结果如下表所示
上表均以ppb或ng/ml为检测量的单位。检测带＞、≈、＜、0是与参照带颜色比较。
权利要求1.土霉素胶体金法检测试纸，包括固着于衬板(7)上的硝酸纤维素膜(6)，其特征在于沿硝酸纤维素膜(6)纵向表面由下向上间隔地依次固着金标土霉素单抗(2)、土霉素偶联抗原(3)、抗鼠IgG抗体(4)，构成复合层。
2.根据权利要求1所述的土霉素胶体金法检测试纸，其特征在于在硝酸纤维素膜(6)上端与上吸水垫(5)串联；下端或通过金标土霉素单抗(2)与下吸水垫(1)连接，或直接与下吸水垫(1)串联。
3.根据权利要求1所述的土霉素胶体金法检测试纸，其特征在于在下吸水垫(1)、金标土霉素单抗(2)及上吸水垫(5)表面贴有不干胶纸。
专利摘要土霉素胶体金法检测试纸，本实用新型涉及用标记抗体与抗原免疫反应来测试待测物质的材料。本实用新型是将土霉素偶联抗原、抗鼠IgG抗体、胶体金标记的土霉素单抗和其它试剂固着在硝酸纤维素膜上制成，应用层析式一步竞争法的原理检测样品中的土霉素残留量。本实用新型操作过程不超过20分钟，灵敏度为2ppb，简便、经济，能够满足对牛奶、血清、饲料、尿液、肉类和组织提取物等样品进行土霉素残留快速检测的需求。
文档编号G01N33/52GK2893708SQ200620019378
公开日2007年4月25日 申请日期2006年3月23日 优先权日2006年3月23日
发明者马岚, 袁航, 葛长荣, 张曦 申请人:云南大学, 云南农业大学, 昆明云大生物技术有限公司, 马岚, 葛长荣, 张曦