专利名称：：临床检验凝血酶时间(tt)测定体外诊断试剂盒的制作方法
技术领域：
：本发明属生物
技术领域：
，特别是涉及一种临床检验凝血酶时间(TT)測定的体外诊断试剂盒。
背景技术：
：随着当今社会人口老龄化进程的加快，各类血栓性疾病日益成为致病、致死及恶化人类生活质量的因素，尤其是心、脑血管血栓性疾病。根据世界卫生组织的报告，血栓疾病为全球总死亡率的第一位常见原因。血栓形成是导致心、脑和外周血管事件的最后关键环节，是致残致死的直接原因，没有血栓就没有心脑血管事件。现在全人类正面临着血栓栓塞性疾病的巨大挑战，迫切需要应用科学的指南来指导血栓栓塞性疾病的诊断和治疗。血栓栓塞性疾病涉及各学科领域，如心血管内科、神经内科、血液科、呼吸科、肿瘤科、肾内科、血管外科、骨科、妇产科、麻醉科、心血管外科、神经外科、普外科等。因而，血栓与止血的实验室检査的临床重要性与日倶增，检验内容不断扩大，工作量也日益增多；不断出现的方法革新和自动化，改变了以往单靠手工操作，自配试剂，工作效率低的局面。与此同时，要求方法标准化和实行质量控制的呼声也愈来愈高。凝血,是作用于凝血过程中的一种蛋白，与游离的纤维蛋白原相结合，从而将其演变为不可溶的纤维蛋白，使血液凝固。而凝血酶时间(TT)是检测共同通路终端上纤维蛋白原变成纤维蛋白的方法，也是检査受试者血浆纤维蛋白原转变为纤维蛋白能力的过筛实验，是检测凝血、抗凝、及纤维蛋白原溶解系统功能的一个简便试验。TT延长常见于肝素增多或类肝素物质存在，SLE，肝病，肾病，纤维蛋白原降解产物(FDP)增多及DIC、低(无)纤维蛋白原血症、异常纤维蛋白原血症(纤维蛋白原机制不良血症)，异常球蛋白血症或免疫球蛋白增多等疾病；TT縮短见于血液中有钙离子存在或血液呈酸性等。因此，凝血酶时间(TT)测定对检测血栓性疾病的防治有重要意义，是血栓与止血检测中的重要项目。
发明内容本发明的目的是为了提供一种筛选类肝素抗凝物存在及纤维蛋白原含量减少和作为肝素治疗及溶纤治疗监测的体外诊断试剂盒。为解决上述技术问题，本发明是这样实现的一种临床检验凝血酶时间测定体外诊断试剂盒，其特征在于它是由凝血酶、缓冲液组成。所述的临床检验凝血酶时间测定体外诊断试剂盒，其特征在于缓冲液由下述原料制成甘氨酸49%;聚乙二醇-80000.30.8%;BSA2%;氯化钠0.430.54°/。；NaN31%。；余量为水。所述的临床检验凝血酶时间测定体外诊断试剂盒，其特征在于缓冲液中甘氨酸的最适含量应选为6。％。所述的临床检验凝血酶时间测定体外诊断试剂盒，其特征在于缓冲液中聚乙二醇-8000的最适含量应选为0.5%。所述的临床检验凝血酶时间测定体外诊断试剂盒，其特征在于缓冲液中氯化钠的最适含量应选为0.51%。本发明相比现有技术具有如下优点-1.本发明通过研究反应机理，用独特的缓冲液稳定凝血酶活性，在凝血酶试剂复溶后37'C条件下能够稳定七天，与一般市售产品相比，在稳定性和重复性方面较好，结果准确性较高。因此，对于各级医院来说，使用方便、节省时间、减少浪费并降低医疗成本。2.适用面广，对于光学法、磁珠法原理的血凝仪测定结果一致性好，具有很好的兼容性，使不同医院的检验结果之间具有可比性，对于推行检验报告"一单通"具有重要意义。具体实據方式本发明的设计是由凝血酶、缓冲液组成。该缓沖液由下述原料制成-甘氣醸49%;聚乙二醇-80000.30.8%;BSA2%;氯化钠0.430.54%;NaN31%。；余量为水。其中，该缓冲液中甘氨酸的最适含量应选为6%，聚乙二醇-8000的最适含量应选为0.5%，氯化钠的最适含量应选为0.51%。本发明还将结合实例作进一步详述实施例一本发明试剂盒的应用1.检测原理待测血浆加入适量的凝血酶溶液，纤维蛋白原转变为不溶性纤维蛋白，测定凝固所需的时间，即为待测血浆凝血酶时间(TT)。2.检测步骤凝血酶冻干品用一定体积的缓冲液复溶。以太平洋TS400C血凝仪为例，操作步骤如表l:表l本发明试剂盒操作步骤试剂加样量待劂血桨(正常质控血浆)加入测试杯100u137'C预温孔预温3分钟，移入测虽孔并激活测试通道。凝血酶(室温)100P1仪器进行自动测试并记录结果。其它血凝仪测定时，按照相应的仪器说明书提供的参数操作。实施例二三种不同配比缓冲液测定结果的比较A种缓冲液配方甘氨酸4%;聚乙二醇-80000.3%;氯化钠0.43%;NaN31%。；BSA2%;余量为水。B种缓冲液配方甘氨酸6%;聚乙二醇-80000.5%;氯化钠0.51°/。；NaN31%。；BSA2%;余量为水。C种缓冲液配方甘氨酸9%;聚乙二醇-80000.8%;氯化钠0.54°/。；NaN31%。；BSA2%;余量为水。将凝血酶冻干品分别用一定体积的A种、B种、C种缓冲液复溶，在太平洋T^400C血凝仪上测定同一正常质控血浆(TT值1016秒)。(结果见表2)表2表明，A、B、C三种缓冲液的配比不同对测定结果的影响较大，其中B种缓冲液测定结果较稳定，至少可稳定七天，而A、C两种缓冲液分别在第六和第五天时出现延长现象，稳定性欠佳。表2<table>tableseeoriginaldocumentpage7</column></row><table>实施例三凝血酶试剂复溶后与市售TT试剂稳定性比较凝血酶冻干品用一定体积的缓冲液复溶，然后将复溶后试剂置于37"C保存。在太平洋TS400C血凝仪上测定同一正常质控血浆(TT值1016秒)，市售试剂同步进行测定。(结果见表3)表3表明，本发明的TT试剂在复溶后的七天内测定结果比较稳定，而市售试剂在第三天时就开始明显变化，这一结果对临床检验科来说非常重要，因为它可以减少浪费，从而降低成本表3<table>tableseeoriginaldocumentpage8</column></row><table>实施例四与市售TT试剂重复性比较凝血酶冻干品用一定体积的缓冲液复溶，按实施例一所述方法操作，重复测定10次。同一正常质控血浆(TT值1016秒)凝血酶时间(TT)在太平洋TS400C血凝仪上测得。(表4)表4表明，本发明所讲的TT试剂与市售试剂相比，变异系数(CV)较小，重复性较好。表4<table>tableseeoriginaldocumentpage8</column></row><table><table>tableseeoriginaldocumentpage9</column></row><table>实施例五与市售TT试剂在光学法和磁珠法血凝仪上测定结果的比较凝血酶冻干品用一定体积的缓冲液复溶，分别在光学法和磁珠法血凝仪上测定同一正常质控血浆(TT值1016秒)，重复测定10次，计算均值(X)，进行统计学分析，采用t检验比较两者的差异。(表5)经统计分析，本发明所讲的TT试剂在光学法和磁珠法血凝仪上测定结果比较P>0.05，无显著性差异，结果基本一致，具有很好的兼容性，相比之下，市售试剂P<0.01，差异非常显著，兼容性欠佳。表s光学法与磁珠法血凝仪上测定结果比较<table>tableseeoriginaldocumentpage9</column></row><table>综上所述仅为本发明的较佳实施例而已，并非用来限定本发明的实施范围。即凡依本发明申请专利范围的内容所作的等效变化与修饰，都应为本发明的技术范畴。权利要求1.一种临床检验凝血酶时间测定体外诊断试剂盒，其特征在于它是由凝血酶、缓冲液组成。2.根据权利要求1所述的临床检验凝血酶时间测定体外诊断试剂盒，其特征在于缓冲液由下述原料制成-甘氨酸49%;聚乙二醇-80000.30.8%;BSA2%;氯化钠0.430.54%;NaN31%Q;余量为水。3.根据权利要求2所述的临床检验凝血酶时间测定体外诊断试剂盒，其特征在于缓冲液中甘氨酸的最适含量应选为6%。4.根据权利要求2所述的临床检验凝血酶时间测定体外诊断试剂盒，其特征在于缓冲液中聚乙二醇-8000的最适含量应选为0.5%。5.根据权利要求2所述的临床检验凝血酶时间测定体外诊断试剂盒，其特征在于缓冲液中氯化钠的最适含量应选为0.51%。全文摘要本发明涉及一种临床检验凝血酶时间(TT)测定体外诊断试剂盒。它是由凝血酶、缓冲液组成，用于筛选类肝素抗凝物存在及纤维蛋白原含量减少和作为肝素治疗及溶纤治疗监测。其优点在于凝血酶试剂复溶后稳定时间长、重复性好，同时对于光学法、磁珠法原理的血凝仪测定结果一致性较好，因此对大中小型医院均适用，使不同医院之间的检验结果具有可比性，对于推行检验报告“一单通”具有重要意义，为临床血栓与止血类疾病的诊断治疗提供可靠的实验数据。文档编号G01N33/86GK101221188SQ200710036409公开日2008年7月16日申请日期2007年1月12日优先权日2007年1月12日发明者朱美萍,谢永华申请人:上海太阳生物技术有限公司