专利名称：一种三分群血细胞分析仪稀释液的生产方法
技术领域：
本发明涉及一种三分群血细胞分析仪稀释液的生产方法。
背景技术：
三分群血细胞分析仪是目前我国普及使用的血常规检测仪器，长期以来这类仪器和试剂在我国均为进口，因试剂价格高昂和供货不及时等原因，给医院和患者带来沉重的经济负担和不便。在我国普及使用的三分群血细胞分析仪中，各种品牌不少于20种，由于各种仪器的稀释比例和测定方法的差异，各种仪器的试剂配方各不相同，不同型号和生产厂家的血细胞分析仪必须使用专用的配套试剂，这是血细胞分析仪试剂开发的一个重要难点。
血细胞分析仪细胞计数是在稀释液形成的稳定电场中完成的，稀释液的本质就是电解质液，而不同仪器由于对细胞形成的电子信号的强弱的范围要求不同，所以对电解质的电导率大小要求略有差异。同时由于红细胞平均体积这一参数，要求测定环境的PH值和渗透压与血液的原有渗透压接近，否则红细胞平均体积大小将由于红细胞涨大或皱缩而变大或变小。
各型电阻法三分类血细胞分析仪试剂配制原理基本相同，成份也大同小异主要由氯化物、硫酸盐、缓冲体系(磷酸盐或硼酸缓冲液等)等组成。但不同品牌型号仪器，由于软硬件结构不同，其血标本用量、稀释液用量及稀释液与溶血剂的用量比不同。导致不同品牌型号的仪器的稀释液各组分浓度不同而不能通用。
以往的试剂配方主要是根据稀释液的PH值、渗透压、电导率等理化指标来调整配制试剂配方。其主要缺点是1、产品成本高；2、加入防腐剂影响分类测定效果、增加生产成本，3、稀释液配方组成忽略了对白细胞分类的影响。
发明内容
本发明的目的是提供一种三分群血细胞分析仪稀释液的生产方法，该方法工艺配方合理，不添加防腐剂。
本发明是这样来实现的，生产的原料主要是NaCl、Na2SO4、KCL、乙二胺四乙酸和磷酸盐缓冲液，其工艺步骤为
1、纯净水制备纯净水采用自来水制备，步骤包括(1)电渗析除盐；(2)阴、阳离子交换柱除盐；(3)0.22微米超虑过滤除微粒，使纯净水的电导率小于5μs/cm；2、缓冲液配制配制1/30M，PH6.0～8.0的Na2HPO4-KH2PO4缓冲液1000升，充分搅混匀，0.22微米超滤过滤；3、溶解配制5～2000g乙二胺四乙酸，5～3000gKCL，50～5000gNaCl，50～20000gNa2SO4，并且NaCl和Na2SO4的摩尔比在0.5～1.5之间，用100～500升Na2HPO4-KH2PO4缓冲液加热溶解，充分搅混匀，冷却备用；4、定容配制将上述溶解备用的溶液与剩余的磷酸盐缓冲液混和，用电导率小于5μs/cm的纯净水定容到1000升，充分搅混匀。
5、过滤灌装将定容混匀好的稀释液，用0.22微米超虑过滤，用20L软塑料桶灌装，密封，包装；6、包装材料处理(1)20L软包装用5～30％洗洁精浸泡6～12小时；(2)电导率小于5μs/cm的纯净水荡洗3～4次，要求没有泡沫为止；(3)荡洗完毕，将水清空，每个包装里加入50～1000μl的甲醛，密封待用；7、产品生产过程要求是在30万级的洁净厂房或相对封闭的洁净生产环境中生产。所有生产设备和管道(包括纯净水阳离子交换柱之后的设备和管道)每天配制之后必须用5～30％NaOH溶液浸泡，配制之前放出NaOH溶液，用电导率小于5μs/cm的纯净水冲洗3～4遍，测定洗水PH值接近中性为止。最后的过滤灌装必须尽可能的在密闭条件下进行，灌装完毕立刻密封包装。
本产品的特征是生产的原料主要是NaCl、Na2SO4、KCL、乙二胺四乙酸和磷酸盐缓冲液，配方既保证稀释液电导率、PH值和摩尔渗透浓度符合仪器和测定要求，又确定了最佳NaCl和Na2SO4摩尔比范围，配合溶血剂提高白细胞分类测定的准确性。本产品配方中没有添加防腐剂，采用科学合理的生产工艺保证产品质量，产品保质期可达2年。
本发明的积极效果是(1)NaCl和Na2SO4为稀释液的主要组成，使稀释液成本降低；(2)通过控制NaCl和Na2SO4在稀释液中的摩尔比例，有效的辅助得到最佳白细胞分类结果；(3)本产品运用GMP质量管理原则，结合实际经验，制定了科学合理的生产工艺，产品不添加防腐剂，保质期可达到2年；(4)本方法的生产工艺简单、容易实现工业化。
具体实施例方式
实施例一、以国产TEK-II系列三分群血细胞分析仪稀释液为例，其工艺步骤为1、纯净水制备纯净水采用自来水制备，步骤包括(1)电渗析除盐；(2)阴、阳离子交换柱除盐；(3)0.22微米超虑过滤除微粒。要求纯净水的电导率小于5μs/cm；2、缓冲液配制配制1/30M，PH＝7.0的Na2HPO4-KH2PO4缓冲液1000升，充分搅混匀，0.22微米超滤过滤；3、溶解配制乙二胺四乙酸0.2g/l，氯化钾0.28g/l，NaCl2.74g/l，Na2SO48.78g/l，其中NaCl与Na2SO4的最佳摩尔比为1∶1.30～1∶1.35，用100～300升Na2HPO4-KH2PO4缓冲液加热溶解，充分搅混匀，冷却备用；4、定容配制将上述溶解备用的溶液与剩余的磷酸盐缓冲液混和，用电导率小于5μs/cm的纯净水定容到1000升，充分搅混匀；5、过滤灌装将定容混匀好的稀释液，用0.22微米超虑过滤，用20L软塑料桶灌装，密封，包装；6、包装材料处理(1)20L软包装用5～30％洗洁精浸泡6～12小时；(2)电导率小于5μs/cm的纯净水荡洗3～4次，要求没有泡沫为止；(3)荡洗完毕，将水清空，每个包装里加入100～500μl的甲醛，密封待用；7、产品生产过程要求是在30万级的洁净厂房或相对封闭的洁净生产环境中生产。所有生产设备和管道(包括纯净水阳离子交换柱之后的设备和管道)每天配制之后必须用5～30％NaOH溶液浸泡，配制之前放出NaOH溶液，用电导率小于5μs/cm的纯净水冲洗3～4遍，测定洗水PH值接近中性为止。最后的过滤灌装必须尽可能的在密闭条件下进行，灌装完毕立刻密封包装。
实例相同摩尔渗透压浓度，不同NaCl和Na2SO4的摩尔比的稀释液与相同无氰化钾溶血剂配合使用，测定临床血样结果比较如下。
表1稀释液配方
表1中3个稀释液配方的摩尔渗透压浓度相同，其理化指标接近，如表2所示。
表2稀释液的理化指标
将上述3个配方不同的稀释液与相同的自配无氰化钾溶血剂在TEK-II三分群血细胞分析仪上测定临床血样5份，比较发现白细胞分类值不同，随着NaCl和Na2SO4的摩尔比的增大，淋巴细胞百分比含量增加，中性粒细胞百分比含量减少。表3为1号血样的白细胞分类测试结果。表4为2号血样的白细胞分类测试结果。表5为3号血样的白细胞分类测试结果。表6为4号血样的白细胞分类测试结果。表7为5号血样的白细胞分类测试结果。表8为自配TEK-II试剂与人工分类结果比较。
表3样品1白细胞分类测试结果
表中WBC为白细胞数量，LY％为淋巴细胞百分比含量，Mid％中间细胞百分比含量，GR％为中性粒细胞百分比含量。
表4样品2白细胞分类测试结果
表5样品3白细胞分类测试结果
表6样品4白细胞分类测试结果
表7样品5白细胞分类测试结果
表8自配TEK-II试剂与人工分类结果比较
表9分类可比性检验结果
由以上统计结果可知，自配无氰化钾溶血剂和稀释液配方测定血液样品，中间细胞检测的相关性由原有的65％提高到75％，由此大大提高了血细胞分析仪临床检测结果的可靠性。
权利要求
1.一种三分群血细胞分析仪稀释液的生产方法，其特征是生产工艺步骤为1)纯净水制备纯净水采用自来水制备，步骤包括(1)电渗析除盐；(2)阴、阳离子交换柱除盐；(3)0.22微米超虑过滤除微粒，使纯净水的电导率小于5μs/cm；2)缓冲液配制配制1/30M，PH6.0～8.0的Na2HPO4-KH2PO4缓冲液1000升，充分搅混匀，0.22微米超滤过滤；3)溶解配制5～2000g乙二胺四乙酸，5～3000gKCL，50～5000gNaCl，50～20000gNa2SO4，并且NaCl和Na2SO4的摩尔比在0.5～1.5之间，用100～500升Na2HPO4-KH2PO4缓冲液加热溶解，充分搅混匀，冷却备用；4)定容配制将上述溶解备用的溶液与剩余的磷酸盐缓冲液混和，用电导率小于5μs/cm的纯净水定容到1000升，充分搅混匀；5)过滤灌装将定容混匀好的稀释液，用0.22微米超虑过滤，用20L软塑料桶灌装，密封，包装。
全文摘要
一种三分群血细胞分析仪稀释液的生产方法，其生产工艺步骤为(1)纯净水制备；(2)缓冲液配制；(3)溶解配制；(4)定容配制；(5)过滤灌装。本发明的积极效果是(1)NaCl和Na
文档编号G01N33/48GK101021456SQ20071005157
公开日2007年8月22日 申请日期2007年2月12日 优先权日2007年2月12日
发明者罗舜菁, 刘成梅, 邹常春, 涂宗财 申请人:南昌大学