专利名称：实验动物膀胱功能测定方法
技术领域：
本发明涉及一种功能实验方法，具体涉及一种实验动物膀胱功能的测定方 法。本方法可以用于测定实验动物膀胱逼尿肌的兴奋性、自律性、收缩能力以 及顺应性。
背景技术：
膀胱功能为周期性储尿和排尿。在储尿期，达到最大膀胱容量前，膀胱内
压较低并维持相对稳定，无逼尿肌收缩；在排尿期，逼尿肌收缩，尿道内、外 括约肌协调性松弛，排空膀胱。逼尿肌作为一种存在于膀胱的特殊平滑肌，属 于单个单位平滑肌(single-unit smooth muscle)或内脏平滑肌(visceral smooth muscle),该类平滑肌的特点是牵张刺激能够引起肌肉的收缩反应，并 且这类平滑肌中还存在少数具有自主节律性的细胞，可以成为起博点，带动整 个肌肉的电活动和机械活动。生理学把组织受到刺激后产生动作电位的能力称 为兴奋性，刺激量的变化可以反映组织的兴奋性。对于逼尿肌而言，引起逼尿 肌自发收缩的机械性张力阈值越小，表明其兴奋性越高。反之，张力阈值越大， 其兴奋性越低。另外，肌条在阈刺激下诱发的收缩频率可以反映出逼尿肌的自 律性。肌肉的收缩能力是指与负荷无关的、决定肌肉收缩的内在的特性，它的 变化直接影响肌肉收缩产生的张力和(或)肌肉縮短的程度以及缩短速度，最 大和平均收缩力能够反映逼尿肌收缩能力的变化情况。膀胱的顺应性是反映膀 胱壁以最小压力变化换取最大容量的先天能力，顺应性的高低主要随着膀胱的 粘弹性和逼尿肌肌张力的改变而改变。膀胱的粘弹性特点可以使膀胱壁伸展所 产生的张力在膀胱充盈速度减慢或者停止时降低或者停止，产生所谓的压力释 放效应，而当膀胱壁伸展速度超过压力释放速度时，充盈期膀胱内压则有一定' 升高。膀胱平滑肌、胶原纤维、粘膜及粘膜下肌层的弹性也均可影响膀胱的顺 应性。膀胱功能正常的重要标志是在储尿期保持膀胱内低压状态,这与膀胱的舒张功能密切相关。
逼尿肌是一个平滑肌肌束交叉聚集的整体单位，平滑肌束的自由交叉移动 调整着膀胱腔内容积压力的变化，实现尿液贮存和排出的功能。不同于血管壁 或胃肠道平滑肌呈环行或纵行的分层排列，逼尿肌细胞在膀胱壁的分布是由直 径较大的平滑肌细胞交织排列成相对紧密的肌肉束，各東之间自由交叉，没有 固定的方向，是不同平面的肌纤维相互交错，呈三维分布。除膀胱颈外，整个膀 胱壁尤如肌東编织的网状物，因此，从结构学观点来看，从任何一个切面都难 以得到完整的逼尿肌细胞，而这种特殊的结构是与膀胱排尿期逼尿肌细胞能同 步而有效地收缩这一功能相适应的。
目前用于评价逼尿肌收缩功能的方法主要有
1. 在体膀胱测压实验
抓起大鼠使直立位，此时大鼠可出现自主排尿。用5%水合氯醛腹腔注射麻 醉(300mg/kg)，仰卧固定，消毒下腹部，耻骨上切口显露膀胱，41/2号头皮针穿 刺进膀胱作为膀胱测压管，lmL注射器经穿刺针连接导管测定残余尿后，将测压 导管经三通管分别与尿动力仪及微量灌注泵相连，腹腔内放置硬膜外导管作为 腹压测定管并与尿动力仪的相应连接管相连。以0.2mL/min的速度用生理盐水 灌注膀胱，进行充盈性膀胱测压，记录膀胱压力变化与灌注量之间的关系。膀 胱的顺应性以灌注量变化与膀胱压力变化的比值表示，膀胱最大容量以出现尿 道口连续漏尿时的膀胱灌注量表示。在储尿期出现造成膀胱内压升高超过 15cmH20柱的逼尿肌收縮波即为逼尿肌不稳定。
2. 离体膀胱测压实验
仰卧位固定大鼠，100mg/kg体重腹腔注射乌拉坦进行麻醉，取下腹正中切 口，结扎双侧输尿管，远离膀胱颈部离断尿道，完整取出膀胱，置于37°C, pH -7.4,充氧(95%02, 5%0)2)的Krebs营养液中备用。
取一硬膜外导管， 一端经尿道插入离体膀胱并妥善固定，另一端经三通管分别连接微量灌注泵和尿动力仪，作膀胱灌注和测压之用。全部实验过程均在
37°C, pH = 7.4,充氧(95%02, 5%C02)的Krebs营养液中进行。首先将离体膀胱 温育平衡30min,接着以0. 2mL/min的速度用0.9%生理盐水进行膀胱灌注。当 膀胱压力上升达到前10min压力的2倍以上时容量为膀胱最大容量。排空膀胱 后静置15min，. Krebs营养液中加入lmmol/L Carbachol再次进行恒速灌注，当 达到最大膀胱容量时记录膀胱压力的变化情况；以0. 09mL/min灌注达1/2最大 膀胱容量时停止灌注，更换肌槽内Krebs液，加入lmmolISO作用15min后，观 察膀胱压力改变。
3.离体逼尿肌肌条实验
击打大鼠致昏，剪开下腹部取出膀胱，称重后即刻放入4"CKrebs营养液中 备用。解剖镜下剔除膀胱粘膜，由内向外切取8咖长，2鹏宽的膀胱内侧壁纵行 肌条，取一根肌条，两端以4/0丝线结扎， 一端固定于肌条固定板底部，另一 端与拉力传感器感应头相连。将肌条置于充满Krebs液的恒温器官槽中，无张 力情况下温浴30min。在实验过程中器官槽内的液体温度利用恒温泵保持在 37°C，通以含95%氧气，5%二氧化碳的混合气体，釆用恒压灌流方式保持灌流槽 内的液体成分不变。逐渐缓慢牵拉肌条使肌条张力增加，直至出现每分钟1次~ 7次的自发收缩，此时的肌条张力作为自发收缩的张力阈值。在静置过程中就出 现自发收缩者，张力阈值为0。稳定'15min,连续记录肌条张力变化45min，记 录单位时间内期相性收缩峰数目，为自发性收缩频率；连续计算10个收缩峰的 收縮幅度，取平均值，为平均收缩力；在该时间段纪录最大收缩幅度，为最大 收缩力。
以上各种实验中，离体逼尿肌肌条实验是最常釆用的反应膀胱收缩能力的 实验。对于逼尿肌肌条的釆集，文献中大多是釆用膀胱前壁的纵行肌条，国内 学者对其进行了改进，釆用膀胱侧壁的纵行肌条。众所周知，膀胱壁是由犬牙 交错的平滑肌纤维组织交织而成的，犹如起自尿道的互相交织的球形囊袋，膀胱的肌层直接地不可分离地延续到尿道的肌层， 一直到膀胱尿道接合部(通常 称为膀胱颈)。膀胱的肌层从功能上划分为体部和底部。膀胱底逼尿肌的近端位 于包绕两侧近膀胱输尿管区的输尿管外鞘，远端位于尿道肌层，通过膀胱尿道 连接部一直延续。膀胱体逼尿肌的肌肉组织以肌東形式组成，肌束在膀胱壁内 不断发出分支，又不断再结合，同时改变着深度和方向，彼此交织在一起，最 终膀胱体逼尿肌构成了一个互相交织的网状结构，使得排尿时能够进行整体一 致地收缩。膀胱体逼尿肌的肌束在延续为膀胱底逼尿肌时进行了重新排列，膀 胱底逼尿肌由膀胱壁所有方向的肌肉组织所组成，在膀胱颈区形成环形、三角 形等形状的复合排列。由于膀胱逼尿肌的这一特殊结构特点，使得无论釆集膀 胱前壁还是侧壁的逼尿肌肌条，都不是一个完整的结构单位，用逼尿肌肌条试 验来观察膀胱的功能改变，只能够部分反映出膀胱的功能。更为重要的是，如 果单纯用逼尿肌肌条来测定膀胱功能，也不能反映出逼尿肌的顺应性。
进一步的研究表明，膀胱体部的环形收缩力要大于纵向收缩力，且占主导 地位。逼尿肌肌条试验采用的是纵向切取组织，因此，在反映逼尿肌收缩力方
面也存在着一定的缺陷。
在体和离体膀胱测压试验虽然可以在一定程度上了解膀胱的顺应性，但是
对于膀胱的兴奋性、自律性以及收缩能力方面还是存在着缺陷。
发明内容
本发明的目的是提供一种实验动物膀胱功能测定方法，釆用膀胱体部的肌 环来评定膀胱功能改变，以更客观有效地评价离体膀胱的收缩功能，全面客观 地评估逼尿肌功能的变化。
本发明的膀胱功能测定方法包括以下步骤 l.配置Krebs营养液
Krebs营养液中的各种成分及其浓度分别为NaCl 118mmol/L， KC1 4. 75mmol/L， MgS04 1. 18mmol/L， KH2P04 1. 18mmol/L， NaHC03 24. 8mmol/L，葡萄糖10. Ommol/L, CaCl2 2. 5mmol/L, pH=7. 35 (HC1溶液缓冲)。
2. 制备逼尿肌肌环
以25%乌拉坦腹腔内注射麻醉大鼠，剪开下腹部取出膀胱，放入4°Ckerbs 营养液中备用。在膀胱体部沿膀胱横断面切取环形肌环，剔除膀胱粘膜。
3. 肌环机械性收缩实验
恒温器官槽内加入10mLkrebs营养液，通入由95%02和5%0)2组成的混合气 体，调定温度至37°C,启动powerlab系统，将肌环一端固定于恒温器官槽底部， 另一端与拉力传感器感应头相连，并将肌环全部浸没于krebs营养液中。保持 肌环处于无张力的状态，将分析系统的每个通道调零，以排除肌环重量。逐渐 缓慢牵拉肌环使张力增加，直至出现每分钟1次 7次的自发收缩，此时的肌环 张力作为自发收缩的张力阈值。在静置过程中就出现自发收缩者，张力阈值为0。 使肌环初始张力保持在0 0.5g之间，再次静置15 30min，待其基线平稳并出 现稳定收缩后，连续记录肌条张力变化45min,记录单位时间内期相性收缩峰数 目，为自发性收缩频率；连续计算10个收缩峰的收缩幅度，取平均值，为平均
收缩力；在该时间段纪录最大收缩幅度，为最大收缩力。顺次加入不同浓度的M 受体激动剂Carbachol 0. lmL (1 x 10-'°、 3xl(T1。、 1 x l(T9、 3xl(T、 1 x l(T8、 3 xl(T8、 lxl0墨7、 3xl0画7、 lxl0—6、 3xl0習6、 lxi(r5、 3 x lO—5mol/L)，釆用衡压 灌流方式保持灌流槽内的液体成分不变。每加一药物浓度后约3~5min出现平 台期，此时标记并迅速加下一浓度药物。加药后出现的收缩情况可反应逼尿肌 的收缩变化能力，便于比较不同动物模型的逼尿肌收缩能力的差异。
4. 肌环机械性舒张实验
恒温器官槽内加入10mLkrebs营养液，通入由95%02和5%0)2组成的混合气 体，调定温度至37°C,启动powerlab系统，将肌环一端固定于恒温器官槽底部， 另一端与拉力传感器感应头相连，并将肌环全部浸没于krebs营养液中。保持 肌环处于无张力的状态，将分析系统的每个通道调零，以排除肌环重量。加入40mmol/L的KC1,肌环出现收缩，待其到达最大收缩，并达到平台期时，顺次 加入不同浓度的异丙肾上腺素(ISO) 0. lmL (lxl(T， 3xl(T， lxl(T, 3xl0一9， lxl(T8， 3xl0—8， lx10-7， 3xl0-7, lx10-6, 3xl(T6， lxl(T5， 3xl(T5mol/L),实验过 程中釆用衡压灌流方式保持灌流槽内的液体成分不变。每加一药物浓度后约3~ 5min出现平台期，此时标记并迅速加下一浓度药物。
逼尿肌肌条试验釆用的是纵向切取的组织，在反映逼尿肌收縮力方面存在 着一定的缺陷。在体和离体膀胱测压试验虽然可以在一定程度上了解膀胱的顺 应性，但是对于膀胱的兴奋性、自律性以及收缩能力方面还是存在着缺陷。本 发明的实验动物膀胱功能测定方法对逼尿肌的取材部位及取材方式进行了改 进，切取膀胱体部的肌环进行膀胱肌环实验，可以全面了解膀胱的顺应性、兴 奋性、自律性和收缩能力，并且由于膀胱肌环恰好取材于环状的膀胱组织，故 能够很好地了解膀胱的环状收縮情况。
本发明釆用膀胱体部的肌环来评定膀胱功能改变，在舒张试验中通过KC1 来诱发出逼尿肌的最大收缩，然后利用异丙肾上腺素使逼尿肌舒张，从而通过 用药后降低的收缩力来间接反应逼尿肌的舒张能力；在收缩试验中通过逐渐增 加牵张力来诱发逼尿肌收缩，通过增加牵张力以了解逼尿肌兴奋性的方式。因 此，本发明的实验动物膀胱功能测定方法既综合了在体和离体膀胱测压试验以 及逼尿肌肌条试验的特点，又考虑到膀胱的收缩是以膀胱体部环形收缩为主的 因素，从而能够更客观有效地来评价离体实验中膀胱的收缩功能和更全面客观 地评估逼尿肌功能的变化。
图1是6周龄正常大鼠膀胱逼尿肌肌环经不同浓度的Carbachol液刺激后 的收缩反应曲线；
图2是6周龄糖尿病大鼠膀胱逼尿肌肌环经不同浓度的Carbachol液刺激 后的收缩反应曲线； 图3是12周龄正常大鼠膀胱逼尿肌肌环经不同浓度的Carbachol液刺激后 的收缩反应曲线；
图4是12周龄糖尿病大鼠膀胱逼尿肌肌环经不同浓度的Carbachol液刺激 后的收缩反应曲线；
图5是6周龄正常大鼠膀胱逼尿肌肌环经不同浓度的ISO液刺激后的收缩
反应曲线；
图6是6周龄糖尿病大鼠膀胱逼尿肌肌环经不同浓度的ISO液刺激后的收 缩反应曲线；
图7是12周龄正常大鼠膀胱逼尿肌肌环经不同浓度的ISO液刺激后的收缩 反应曲线；
图8是12周龄糖尿病大鼠膀胱逼尿肌肌环经不同浓度的ISO液刺激后的收 縮反应曲线；
图9是正常对照组大鼠逼尿肌肌条牵张试验记录(1); 图IO是正常对照组大鼠逼尿肌肌条牵张试验记录(2); 图ll是糖尿病大鼠逼尿肌肌条牵张试验记录(自发收缩)； 图12是糖尿病大鼠逼尿肌肌条牵张试验记录(收縮力增强)； 图13是糖尿病大鼠逼尿肌肌条牵张试验记录(张力阈值显著增高/收缩力 降低)。
具体实施例方式
实施例1
分别取6周龄正常大鼠、6周龄糖尿病大鼠、12周龄正常大鼠和12周龄糖 尿病大鼠，以25%乌拉坦腹腔内注射麻醉，剪开下腹部取出膀胱，放入4'Ckerbs 营养液中备用。在膀胱体部沿膀胱横断面切取环形肌环，剔除膀胱粘膜，制成 膀胱逼尿肌肌环，以下述方法进行测定。
恒温器官槽内加入10mLkrebs营养液，通入由95%02和5%0)2组成的混合气
体，调定温度至37°C，启动powerlab系统，将肌环一端固定于恒温器官槽底部， 另一端与拉力传感器感应头相连，并将肌环全部浸没于krebs营养液中。保持 肌环处于无张力的状态，将分析系统的每个通道调零，以排除肌环重量。逐渐 缓慢牵拉肌环使张力增加，直至出现每分钟l次-7次的自发收縮，此时的肌环 张力作为自发收缩的张力阈值。在静置过程中就出现自发收缩者，张力阈值为0。 使肌环初始张力保持在0~0. 5g之间，再次静置15 30min，待其基线平稳并出 现稳定收缩后，连续记录肌条张力变化45min，记录单位时间内期相性收缩峰数 目，为自发性收縮频率；连续计算10个收缩峰的收缩幅度，取平均值，为平均 收缩力；在该时间段纪录最大收縮幅度，为最大收缩力。顺次加入浓度为1 x l(T、 3 x l(T1。、 1 x l(T、 3 x IO匿9、 1 x l(T8、 3 x l(T8、 1 x io墨7、 3 x l(T7、 1 x i(T6、 3 x l(T6、 lxl(T5、 3x 10-5mol/L的M受体激动剂Carbachol 0. lmL刺激逼尿肌环收缩,釆 用衡压灌流方式保持灌流槽内的液体成分不变。每加一药物浓度后约3~5min 出现平台期，此时标记并迅速加下一浓度药物。根据收缩幅度的改变，按lmg 逼尿肌组织产生的张力变化值做标准化后得到张力相对变化值。 具体测定结果见图l、图2、图3、图4。
由图l、图2显示试验结果可知，在给予不同浓度的Carbachol刺激后，逼 尿肌发生收縮反应，且随着药物浓度的增加，收縮幅度也在增大。6周龄糖尿病 大鼠的最大收缩力为(1.12±0. 16) g/mg，比正常6周龄大鼠(0.99 ±0.06) g/mg的最大收缩力增高(P<0. 05)。本试验还发现，6周龄糖尿病大鼠的半数有 效剂量浓度ECs。比正常6周龄大鼠敏感，分别为(1. 73士0. 36) xl(Tmol/L和 (2.67±0. 32) x10—7mol/L (P<0. 05),有显著统计学差异。
由图3、图4显示试验结果可知，12周龄糖尿病大鼠的最大收缩力为(1.20 ±0. I2) g/mg，与正常U周龄大鼠U.21土0. 08) g/mg的最大收缩力无明显差 异(P>0. 05); 12周龄糖尿病大鼠半数有效浓度EC5。 ( 2. 15±0. 41x10—7mol/L ) 与12周龄正常大鼠(2. 29土0.43xl(Tmol/L)无明显差异(P>0.05)，无显著统
计学差异。
表1不同时间两组大鼠膀胱逼尿肌最大收缩力(X+S, g/mg)
组别 _^_ 12周
糖尿病大鼠 1.12±0. 16* 1.20±0. 12
正常大鼠_0. 99 ± 0. 06_1.21±0. 08
注与正常大鼠比较，*有显著性差异，P<0.05 ^ 表2不同时间两组大鼠对Carbachol刺激的半数有效浓度EC5。 (X+S, x1(Tmol/L)
组另'』__12周
糖尿病大鼠 1.73±0.36* 2. 15±0.41
正常大鼠_2. 67±0. 32_2. 29±0. 43
注与正常大鼠比较，*有显著性差异，P<0.05 ^
实施例2
分别取6周龄正常大鼠、6周龄糖尿病大鼠、12周龄正常大鼠和12周龄糖 尿病大鼠，以25%乌拉坦腹腔内注射麻醉，剪开下腹部取出膀胱，放入4。Ckerbs 营养液中备用。在膀胱体部沿膀胱横断面切取环形肌环，剔除膀胱粘膜，制成 膀胱逼尿肌肌环，以下述方法进行测定。
恒温器官槽内加入10mLkrebs营养液，通入由95%02和5%(:02组成的混合气 体，调定温度至37°C,启动powerlab系统，将肌环一端固定于恒温器官槽底部， 另一端与拉力传感器感应头相连，并将肌环全部浸没于krebs营养液中。保持 肌环处于无张力的状态，将分析系统的每个通道调零,以排除肌环重量。加入 40mmol/L的KC1，肌环出现收缩，待其到达最大收縮，并达到平台期时，顺次 加入浓度为lxl(T1。， 3xl(T1。， lxl(T, 3xl(T， 1x10—8, 3xl(T8， lxl(T， 3xl(T7， lxl0一6, 3xl(T6, lxl(T5, 3xlO—5mol/L的异丙肾上腺素(ISO) 0. lmL,实验过程中釆用衡 压灌流方式保持灌流槽内的液体成分不变。每加一药物浓度后约3~5min出现 平台期，此时标记并迅速加下一浓度药物。
具体测定结果见图5、图6、图7、图8。
由图5、图6显示试验结果可知，6周龄组大嚴在40mmol/L KC1溶液2mL 刺激后会出现一个高餘的逼尿肌收缩波，在此基础上，以不同浓度的异丙肾上腺
素(lx10—1Q~lxlO—5)诱导逼尿肌发生舒张反应，测定其半数抑制浓度ICs。(达到最
大舒张一半时的药物浓度)，糖尿病大鼠和正常大鼠的ICs。分别为-7， 37±-0. 0830
和-7.45±-0. 0345 (P<0. 05),比较可知，糖尿病大鼠组比正常大鼠组敏感。测
定两组大鼠的最大舒张力Emax发现，糖尿病大鼠和正常大鼠的Emax分别为
1. 1472±0. 0069g/mg和0. 6879±0. 101g/mg，对照组最大舒张力Emax比糖尿病组
小，且有显著统计学意义(P<0. 01)。
由图7、图8显示试验结果可知，12周龄组大鼠在40mmol/L KC1溶液2mL
刺激下也出现了明显的逼尿肌收缩波，通过不同浓度的异丙肾上腺素(lx10—"~
"10，诱导逼尿肌发生舒张反应后，收縮波随着药物浓度的增高出现不断下降。
此时糖尿病大鼠组和正常大鼠组的ICs。分别为-7. 08±-0. 0287和-7. 65±-0. 0102
(P<0. 01)，糖尿病大鼠组比正常大鼠组敏感。糖尿病大鼠组和正常大鼠组的最
大舒张力Emax分别为0. 7472±0. 0104g/mg和0. 837±0. 0034g/mg,对照组最大舒
张力Emax比糖尿病组大(P<0. 05)。
表3两组大鼠逼尿肌在不同时间段最大舒张力Emax的比较(X士s,g/mg)
组别 动物数 6周组_12周组
对照组 7 0.6879±0.101 0.837±0.0034**
糖尿病组_7 1.1472±0.0069 0.7472士0.0104***
注与6周组比较，**P<0.01, ***P< 0.001
表4两组大鼠不同时间段半数抑制浓度的比较loglC50 (X±S)
组别 动物数 6周组_12周组
对照组7 -7.45±-0.0345 -7.65±-0.0102**
糖尿病组 7 -7.37士-0.0830 -7.08±-0.0287**
注:'与6周组比较，**P<0.01
对比例1
同时进行逼尿肌肌条机械性牵张试验作为对比，实验记录图(部分)见图9~ 图13。
在逼尿肌肌条机械性牵张试验中，张力阈值波动幅度较大，在0 1.22g之 间。收缩波的频率介于l 7次/min。按lmg逼尿肌组织产生的张力变化值做标
准化后得到张力的相对变化值见表5，与表l数据进行比较，发现其最大收缩力
的值偏小。本试验数据证实了膀胱体部的环形收缩力要大于纵向收缩力，且占
主导地位。由于逼尿肌肌条试验采用的是纵向切取组织，因此在反映逼尿肌收
缩力方面也存在着一定的缺陷。
表5两组大鼠不同时段逼尿肌最大收缩力的比较(X±s，g/mg)
组别6周C12周(n-8)
糖尿病组0.89 ± 0.260.71 ± 0.25
正常对照组0.91 ± 0.250.82 ± 0.28
由于直接测定逼尿肌收缩力即发现差异，因此本试验未进一步进行加入药 物后的测定。
权利要求
1、一种实验动物膀胱功能测定方法，其特征是采用膀胱体部沿膀胱横断面切取的环形肌环进行膀胱功能测定试验。
2、 根据权利要求l所述的实验动物膀胱功能测定方法，其特征是包括以下a. 配置Krebs营养液以下列成分和浓度配制Krebs营养液NaCl 118鹏ol/L， KC1 4. 75腿ol/L， MgS04 1. 18mmol/L, KH2P041. 18mmol/L, NaHC03 24. 8mmol/L，葡萄糖10. Ommol/L, CaCl2 2. 5mmol/L,并调节pH=7. 35;b. 制备逼尿肌肌环以25%乌拉坦腹腔内注射麻醉大鼠，剪开下腹部取出膀胱，放入4。Ckerbs 营养液中备用。在膀胱体部沿膀胱横断面切取环形肌环，剔除膀胱粘膜；c. 肌环机械性收缩实验恒温器官槽内加入10mLkrebs营养液，通入由95%02和5% )2组成的混合气 体，调定温度至37°C,启动powerlab系统，将肌环一端固定于恒温器官槽底部， 另一端与拉力传感器感应头相连，并将肌环全部浸没于krebs营养液中；保持肌环处于无张力的状态，将分析系统的每个通道调零，以排除肌环重逐渐缓慢牵拉肌环使张力增加，直至出现每分钟1次~7次的自发收缩，此 时的肌环张力作为自发收缩的张力阈值；使肌环初始张力保持在0 0. 5g之间，再次静置15 30min，待其基线平稳 并出现稳定收缩后，连续记录肌条张力变化45min,记录单位时间内期相性收缩 峰数目，为自发性收缩频率；连续计算10个收缩峰的收缩幅度，取平均值，为平均收缩力；在该时间段纪录最大收缩幅度，为最大收缩力；顺次加入浓度分别为1 x 10—1。、 3 x l(T1。、 1 x io-9、 3 x 10—9、 1 x l(T8、 3 x 10—8、 lxl(T、 3xl(T7、 lxl0—6、 3 x 10—6、 lxio-5、 3xlO—5mol/L的M受体激动剂Carbachol 0. lmL，采用衡压灌流方式保持灌流槽内的液体成分不变，每加一药 物浓度后约3~5min出现平台期，此时标记并迅速加下一浓度药物； d.肌环机械性舒张实验恒温器官槽内加入10mLkrebs营养液，通入由95%02和5%0)2组成的混合气 体，调定温度至37X:,启动powerlab系统，将肌环一端固定于恒温器官槽底部， 另一端与拉力传感器感应头相连，并将肌环全部浸没于ki:ebs营养液中；保持肌环处于无张力的状态，将分析系统的每个通道调零，以排除肌环重量；加入40mmol/L的KC1,肌环出现收缩，待其到达最大收缩，并达到平台期 时，顺次加入浓度分别为lxl(T, 3xl0—1。， 1x10—9, 3x10—， lxl(T8, 3xl0-8， lxl(T7， 3xl(T, lxl(T6， 3xl(T6, lxl(T5， 3xl(T5mol/L的异丙肾上腺素0. lmL,实验过程中采用衡压灌流方式保持灌流槽内的液体成分不变；每加一药物浓度后约3~5min出现平台期，此时标记并迅速加下一浓度药物。
全文摘要
本发明涉及一种实验动物膀胱功能的测定方法，是采用膀胱体部沿膀胱横断面切取的环形肌环进行膀胱功能测定试验。本方法既综合了在体和离体膀胱测压试验以及逼尿肌肌条试验的特点，又考虑到膀胱的收缩是以膀胱体部环形收缩为主的因素，可以用于测定实验动物膀胱逼尿肌的兴奋性、自律性、收缩能力以及顺应性，以更客观有效地评价离体膀胱的收缩功能，全面客观地评估逼尿肌功能的变化。
文档编号G01N33/48GK101183101SQ20071013935
公开日2008年5月21日 申请日期2007年9月5日 优先权日2007年9月5日
发明者双卫兵, 利 张, 王东文, 胡操阳, 韩宾林, 高宏飞 申请人:山西医科大学第一医院