专利名称：乙肝e抗原免疫逃避检测基因芯片及其试剂盒的制作方法
技术领域：
本实用新型属于临床检测的基因芯片技术领域，具体地说涉及一种乙肝e抗原免疫逃避 检测基因芯片及其试剂盒。
背景技术：
我国是世界上乙肝病毒感染最严重的国家。通常对乙肝进行两对半检测是临床诊断与血 液筛查的重要内容。乙肝e抗原是检测中的一项重要指标。e抗原来源于乙型肝炎病毒的核 心。査出e抗愿，其意义就等于査出核心抗原，表示病毒复制活跃，并且传染性较强。要了 解HBsAg阳性的人有没有传染性，比较常用而又可靠的检测方法就是验e抗原和e抗体。乙 肝e抗原免疫逃避可引起临床血清学对乙肝e抗原的漏检，从而不利于判断病人的传染性及 治疗愈后情况。目前临床上还没有针对乙肝e抗原漏检采取专门诊断方法。发明内容为了提供一种检测乙肝e抗原漏检的方法，提供了一种乙肝e抗原免疫逃避检测基因芯 片及其试剂盒。本实用新型采用下述技术方案提供一种乙肝e抗原免疫逃避检测基因芯片，在固相载 体上固定检测乙肝e抗原免疫逃避的特异DNA探针，所说的探针序列可以为 probel W GAT TAG GTT AAA GGT CTT probe 1MGAT TAG GTT AAT GGT CTT probe2 W GGT TAA AGG TCT TTG TAC probe2MGGT TAA AGA TCT TTG TAC probe3 W ACC AGC ACC ATG CAA CTT probe3MACC AGC ACC CTG CAA CTT probe4W TTG GGT GGC T TTG GGG CAT probe4MTTG GGT GGC T TTA GGG CAT probe7C 1 TTG GAG CTT CTG TGG AGT所述的固相载体是NC膜，尼龙膜，硅胶片，或玻片，固相载体是经过化学修饰的，固 相载体可以是经过醛基化修饰的玻片。本实用新型还提供一种如上所述的乙肝e抗原免疫逃避检测基因芯片试剂盒，由乙肝e 抗原免疫逃避检测基因芯片和配套使用的试剂组成；配套使用的试剂包括对血清样本进行处 理的处理液，对处理样本进行扩增标记的扩增液，与磁阵列进行杂交反应的杂交液，洗涤液， 酶标工作液，和检测液；在血清样本的检测过程中配套试剂盒与乙肝e抗原免疫逃避检测基 因芯片是联合使用的。所述的乙肝e抗原免疫逃避检测基因芯片的试剂盒，其特征在于，所述的配套使用的试 剂可以扩增标记引起乙肝e抗原免疫逃避的突变DNA基因片断，所述的样本扩增液由乙肝e 抗原免疫逃避的突变DNA基因片断扩增引物和聚合酶链式反应液组成，所述的引物有生物素标记，所述的引物序列可以是Primer 5，-B1735 aggagttgggggaggagattaPrimer 3' -B1965 tcagaaggcaaaaatcagagt所述的乙肝e抗原免疫逃避检测基因芯片的试剂盒，其特征在于，所述的与微阵列进行 杂交反应的杂交液，和用于洗涤的洗涤液主要成分是SSC和SDS。所述的乙肝e抗原免疫逃避检测基因芯片的试剂盒，其特征在于，所述的酶标工作液由 辣根过氧化物酶标记的亲和素组成，所述的检测液由发光物和过氧化氢二种试剂组成，使用 前混合，所述的发光物为鲁米诺、异鲁米诺或其衍生物。综上所述，本实用新型提供了一种经济简便的方法，用于对乙肝e抗原免疫逃避的检测, 避免临床血清学对乙肝e抗原的漏检，从而判断病人的传染性及治疗愈后情况。'
图1为检测乙肝e抗原免疫逃避基因的探针矩阵示意图具体实施方式
本实用新型的目的，是这样实现的，将设计的特异性探针固定于玻片、膜、硅片、高分 子材料载体表面上，形成具有微阵列的基因检测芯片。将待测样本经过处理，用专门设计的 引物扩出所需片断，与载体表面探针微阵列经过杂交，再用发光仪进行检测得到结果。探针设计probe 1W GAT TAG GTT AAA GGT CTTprobelM GAT TAG GTT AAT GGT CTTprobe2 W GGT TAA AGG TCT TTG TACprobe2M GGT TAA AG A TCT TTG TACprobe3W ACC AGC ACC ATG CAA CTTprobe3M ACC AGC ACC CTG CAA CTTprobe4W TTG GGT GGC T TTG GGG CATprobe4M TTG GGT GGC T TTA GGG CATprobe7C 1 TTG GAG CTT CTG TGG AGT引物设计Primer 5 ， -B173 5 aggagttgggggaggagatta Primer 3,-B1965 tcagaaggcaaaaatcagagt实施例1:按以下方法对各测试血请样品进行检测1. 按照产品说明书对血清样本进行处理，提取病毒核酸。2. 加入PCR扩增液，对处理得到的核酸样品进行扩增标记，用带BIOTIN标记的引物给产物标记上生物素e3. 加入反应区域，10-20ul。4. 42'C保温保湿反应60分钟。5. 用洗液洗涤4-6次，每次2分钟，振动。6. 加入亲和反应液，10-20ul。7. 在42。C反应15-20min。8. 用洗液洗涤4-6次，每次2分钟，晃动。9. 加检测液20ul/孔，使检测液均匀分布于反应区域。10. CCD检测，视发光信号强度曝光30-60秒。实施例2:按以下方法对各测试血请样品进行检测.按照产品说明书对血清样本进行处理，提取病毒核酸。2. 加入PCR扩增液，对处理得到的核酸样品进行扩增标记，用带荧光标记的引物给 产物标记上荧光。3. 加入反应区域，10-20ul。4. 42'C保温保湿反应60分钟。5. 用洗液洗涤4-6次，每次2分钟，振动。6. 用共聚焦荧光显微镜或荧光扫描仪检测获得结果。结果判定依据不同指标的CutOff值，参考标准品梯度曲线，判定样品血清的阴阳性。 与此同时，用常规方法对测试的血清样品进行常规检测。结果表明，用本实用新型的试 剂盒得出的测试结果与常规方法相同。序列表probe 1W GAT TAG GTT AAA GGT CTTprobe 1M GAT TAG GTT AAT GGT CTTprobe2W GGT TAA AGG TCT TTG TACprobe2M GGT TAA AGA TCT TTG TACprobe3W ACC AGC ACC ATG CAA CTTprobe3M ACC AGC ACC CTG CAA CTTprobe4W TTG GGT GGC T TTG GGG CATprobe4M TTG GGT GGC T TTA GGG CATprobe7C 1 TTG GAG CTT CTG TGG AGTPrimer 5 ， -B173 5 aggagttgggggaggagatta Primer 3 ， -B1965 tcagaaggcaaaaatcagagt
权利要求1. 一种乙肝e抗原免疫逃避检测基因芯片，其特征在于固相载体上固定有带有乙肝e抗原免疫逃避相关核酸序列的DNA探针，所说的探针的核酸序列可以为如下一组序列probe1W GAT TAG GTT AAA GGT CTTprobe1M GAT TAG GTT AAT GGT CTTprobe2W GGT TAA AGG TCT TTG TACprobe2M GGT TAA AGA TCT TTG TACprobe3W ACC AGC ACC ATG CAA CTTprobe3M ACC AGC ACC CTG CAA CTTprobe4W TTG GGT GGC TTTG GGG CATprobe4M TTG GGT GGC TTTA GGG CATprobe7C1 TTG GAG CTT CTG TGG AGT。
2. 如权利要求l所述的乙肝e抗原免疫逃避检测基因芯片，其特征在于，所述的固相载体是 硝酸纤维素膜，尼龙膜，硅胶片，或玻片。
3. 如权利要求l所述的乙肝e抗原免疫逃避检测基因芯片，其特征在于，所述的固相载体可 以是醛基化的玻片。
4. 一种包含如权利要求l所述的乙肝e抗原免疫逃避检测基因芯片的试剂盒，由乙肝e抗原 免疫逃避检测基因芯片和配套使用的试剂组成；配套使用的试剂包括对血清样本进行处理的 处理液，对经过处理的样本进行扩增标记的扩增液，与微阵列进行杂交反应的杂交液，洗涤 液，酶标工作液，和检测液。
5. 如权利要求4所述的乙肝e抗原免疫逃避检测基因芯片的试剂盒，其特征在于，所述的扩 增液由乙肝e抗原免疫逃避突变基因片段的扩增引物和聚合酶链式反应液组成。
6. 如权利要求5所述的乙肝e抗原免疫逃避检测基因芯片的试剂盒，其特征在于，所述的引 物有生物素标记。
7. 如权利要求5或6所述的乙肝e抗原免疫逃避检测基因芯片的试剂盒，其特征在于，所 述的引物序列可以是-Primer 5,-B1735. aggagttgggggaggagatta Primer 3，-B1965 tcagaaggcaaaaatcagagt。
8. 如权利要求4所述的乙肝e抗原免疫逃避检测基因芯片的试剂盒，其特征在于，所述的与 微阵列进行杂交反应的杂交液，和洗涤液的主要成分是SSC和SDS。
9. 如权利要求4所述的乙肝e抗原免疫逃避检测基因芯片的试剂盒，其特征在于，所述的酶 标工作液由辣根过氧化物酶标记的亲和素组成。
10. 如权利要求4所述的乙肝e抗原免疫逃避检测基因芯片的试剂盒'其特征在于，所述的 检测液由鲁米诺、异鲁米诺或其衍生物和过氧化氢二种试剂组成。
专利摘要本实用新型提供一种乙肝e抗原免疫逃避检测基因芯片及其试剂盒，属于临床检测的基因芯片技术领域，包括固相载体上固定有检测乙肝e抗原免疫逃避的特异DNA探针的基因芯片和配套使用的试剂；配套使用的试剂包括对血清样本进行处理的处理液，对处理样本进行扩增标记的扩增液，与微阵列进行杂交反应的杂交液，洗涤液，酶标工作液，和检测液；在血清样本的检测过程中配套试剂与乙肝e抗原免疫逃避检测基因芯片是联合使用的。本实用新型可用于乙肝e抗原免疫逃避的检测，避免临床上乙肝e抗原漏检，从而有利于判断乙肝病人的传染性及治疗愈后情况。
文档编号G01N33/576GK201083740SQ20072007190
公开日2008年7月9日 申请日期2007年6月29日 优先权日2007年6月29日
发明者汪宁梅, 穆海东, 罗芳英, 飒 黎 申请人:上海裕隆生物科技有限公司