专利名称：：血细胞分析仪稀释液及溶血剂的制作方法
技术领域：
：本发明属于医疗诊断仪器用试剂领域，特别涉及血细胞分析仪用试剂。
背景技术：
：稀释液和溶血剂是医学检验中血液分析仪最常用的一组试剂，是测定血红蛋白(Hb)和白细胞(WBC)计数或分类的关键试剂。溶血剂在稀释液的配合作用下，一方面使红细胞(RBC)迅速溶解，释放出血红蛋白与溶血剂结合形成稳定的血红蛋白衍生物，以供定量测定Hb,另一方面白细胞维持原有形态，并保持一定的体积，供WBC计数用，并且根据白细胞的大小来对白细胞进行三分群(淋巴细胞、中性粒细胞、中间型细胞)。1996年，国际血液学标准化委员会推荐氰化高铁血红蛋白(HiCN)测定法作为国际Hb测定标准方法，其主要物理指标为在波峰？^540nm，波谷入-504nm时，具有明显的波峰、波谷。该法虽然能较精确地测量Hb;但不能同时测定WBC,因而，无法应用于临床。目前，国内外临床医学检验学上常用的溶血剂是以有机季胺盐加氰化钾(KCN)组成的混合物，一方面其吸收光谱与HiCN较为接近，另一方面，有机季胺盐破坏RBC后，Hb与KCN迅速生成稳定的CNHb，达到测定Hb的目的，同时又不破坏WBC。但这种配伍的溶血剂的最大缺点是KCN有剧毒，不仅严重危害实验室工作人员的身体健康，同时给生产单位操作上也带来很多不便，对环境污染也极为严重。虽然临床上制定了极为严格、繁瑣的降低氰污染措施，但其对人身、环境的污染还是无法避免。中国专利CN99115572.6中公开了一种无氰溶血剂，但是其只能在CD系列、F系列血细胞分析仪器中使用，不能在其它系列仪器中使用。而且没相配的稀释液(Dil)。配制中所用的水必须是重蒸馏水，在实际生产中操作困难，成本高。而且十六烷基三甲基溴化铵比重轻，配制时有悬浮粉末在空气中漂浮。该产品吸入人体有害，要推广到实际应用中存在一些问题，其应用范围也受到限制。没从根本上解决血液检验人员包括生产人员身体受到毒素侵害的难题，比如叠氮物的污染、氰化物污染，配制中十六烷基粉末对操作者的污染。
发明内容本发明的目的在于克服现有技术之不足而提供一种既能迅速破坏RBC,又不损害WBC,且其吸收光谱接近HiCN,物理化学性质稳定的无迭氮物稀释液和无氰溶血剂，无毒又便于搡作。本发明所述的稀释液中各物质及组分如下，在l升稀释液中氯化钠12.0~4.Og硫酸钠2.0~10.Og一三二甲基脲0.8~0.5g亚硫酸铜0.2~0.5g乙二胺四乙酸二钠3.0~8.0gP底啦西啉钠Q.2~0.7g硼酸盐缓冲液调PH为7.2-7.8余为水其中氯化钠和硫酸钠的加入量为互补，但两者加入量之和《14g;—三二甲基脲和亚硫酸铜的加入量为互补，但两者加入量之和<1.0g。本发明所述的稀释液中的哌啦西啉钠，可以用氟化钠替代，其加入量为0.3~0.8g。本发明所述的哌啦西啉钠和氟化钠也可以同时加入，但两者的加入量之和<1.0g。与本发明所述的稀释液配对使用的溶血剂中各物质及组分如下，在l升溶血剂中氯化钾G.8~5.0g十二烷基三甲基氯化铵0-60.0g十八烷基三甲基溴化铵14.0~0g异丙醇6.Q~10.Oral碳酸盐或盐酸缓冲液调PH3.25.8余为水其中十二烷基三甲基氯化铵、十八烷基三甲基溴化铵的加入量为互补，但两者的加入量之和《60g。本发明所述的碳酸盐或盐酸缓冲液调溶血剂的PH3.2~5.8,是指当前述所加入的各类物质使得溶血剂大于5.8时，用盐酸缓冲液调PH至3.2~5.8;当前述所加入的各类物质使得溶血剂小于3.2时，用碳酸盐缓冲液调PH至3.2~5.8。本发明所述的稀释液和溶血剂适用于HL-系列血细胞分析仪，也可用于其它血细胞分析仪。本发明由于釆用上述方案，利用氯化钾与金属离子掩蔽剂的铜铵盐代替氰化钾，使其与血液反应后，形成稳定的血红蛋白衍生物，且在入=540皿，入-504nm时，吸收光谱曲线相似，可满足临床检验的需要；同时，试剂中不含氰化物，不含叠氮物，无毒性，能有效改善操作人员的工作环境，降低毒物对人身健康的伤害。具体实施方式实施例l。(1)稀释液的制备在纯水中分别加入氯化钠6.Og，硫酸钠5.8g,—三二甲基脲0.8g,亚硫酸铜O.2g,乙二胺四乙酸二钠3g,哌啦西啉钠O.2g,溶解，加入硼酸钠缓冲液调PH为7.3，用纯水定量一升，过滤。(2)溶血剂的制备在纯水中分别加入氯化钾3.0g,十二烷基三甲基氯化铵50g，十八烷基三甲基溴化铵8g，异丙醇10ml，溶解，用碳酸盐O.34g调PH在5.3，用纯水定量到一升，过滤。实施例2。U)稀释液的制备在纯水中分别加入氯化钠4.0g，硫酸钠10g，一三二甲基脲0.5g，亚硫酸铜O.5g,乙二胺四乙酸二钠3g,哌啦西啉钠O.25g,溶解，加入硼酸钠缓冲液调PH为7.5，同时用纯水定量一升，过滤。(2)溶血剂的制备在纯水中分别加入氯化钾O.9g，十二烷基三甲基氯化铵60g,异丙醇6ml，溶解，用碳酸氢钠调PH在4.5，同时用纯水定量到一升，过滤。实施例3。(1)稀释液的制备在纯水中分别加入氯化钠5.Og,硫酸钠9g,—三二甲基脲O.6g，亚硫酸铜O.3g,乙二胺四乙酸二钠5g，哌啦西啉钠O.5g,溶解，加入硼酸钠缓冲液调PH为7.8,用纯水定量一升，过滤。(2)溶血剂的制备在纯水中分别加入氯化钾2g，十二烷基三甲基氯化铵40g,十八烷基三甲基溴化铵4g，异丙醇9ml，溶解，用碳酸盐调PH为4.0,同时用纯水定量到一升，过滤。实施例4。(1)稀释液的制备在纯水中分别加入氯化钠8g,硫酸钠5g，一三二甲基脲O.5g，亚硫酸铜O.5g,氟化钠O.8g、乙二胺四乙酸二钠6g，溶解，加入硼酸钠缓冲液调PH为7.7,同时用纯水定量一升，过滤。(2)溶血剂的制备在纯水中分别加入氯化钾5g，十八烷基三甲基溴化铵14g，异丙醇10ml，溶解，用碳酸盐调PH为5.2,同时用纯水定量到一升，过滤。实施例5。本实施例为本发明的应用实施例及与含叠氮物稀释液和含氰化物溶血剂对比。本实施例所用的稀释液、溶血剂为按实施例l的配比配制的稀释液、溶血剂。对比组为常规的含叠氮物稀释液和含氰化物溶血剂。本实施例所用仪器HL—系列血细胞分析仪，722型分光光度计；取二十分正常人抗凝血样，两组试剂分别检测二十分标本所得(白细胞.红细胞.血红蛋白.血梢板.淋巴细胞.粒细胞)结果进行统计学处理，用t值查P值大于0.5,两者结论无显著差异。附表l为含叠氮物稀释液和含氰化物溶血剂应用于血常规检验的检验结果。附表2为本发明的稀释液、溶血剂(不含叠氮物稀释液和不含氰化物溶血剂)应用于附表l所用血标本的血常规检验的检验结果。附表3有氰化物和迭氮化物试剂与本发明(无氰化物和无选氮化物)试剂吸收峰检测对比表。其中A1为有氰化物试剂，A2为本发明试剂，组别为所用的标本号。表1<table>tableseeoriginaldocumentpage6</column></row><table>表2<table>tableseeoriginaldocumentpage7</column></row><table>表3<table>tableseeoriginaldocumentpage8</column></row><table><table>tableseeoriginaldocumentpage9</column></row><table>权利要求1.一种血细胞分析仪稀释液，其特征是在1升稀释液中氯化钠12.0～4.0g硫酸钠2.0～10.0g一三二甲基脲0.8～0.5g亚硫酸铜0.2～0.5g乙二胺四乙酸二钠3.0～8.0g哌啦西啉钠0.2～0.7g硼酸盐缓冲液调PH为7.2～7.8余为水其中氯化钠和硫酸钠的加入量为互补，两者之和≤14g，一三二甲基脲和亚硫酸铜的加入量为互补，两者之和≤1.0g。全文摘要血细胞分析仪稀释液及溶血剂，其特征是在1升稀释液中氯化钠12.0～4.0g、硫酸钠2.0～10.0g、一三二甲基脲0.8～0.5g、亚硫酸铜0.2～0.5g、乙二胺四乙酸二钠3.0～8.0g、哌啦西啉钠0.2～0.7g、硼酸盐缓冲液调pH为7.2～7.8、余为水；1升溶血剂中氯化钾0.8～5.0g、十二烷基三甲基氯化铵0～60.0g、十八烷基三甲基溴化铵14.0～0g、异丙醇6.0～10.0ml、碳酸盐或盐酸缓冲液调pH3.2～5.8、余为水，本发明试剂能形成稳定的血红蛋白衍生物，且在λ＝540nm，λ＝504nm时，吸收光谱曲线相似，可满足临床检验的需要，试剂中不含氰化物，不含叠氮物，无毒性，能有效改善操作人员的工作环境，降低毒物对人身健康的伤害。文档编号G01N15/10GK101281193SQ20081010689公开日2008年10月8日申请日期2008年6月4日优先权日2008年6月4日发明者刘郁林,文玲梅,袁水斌申请人:南昌百特生物高新技术有限公司