专利名称：一种用液相色谱分离测定杀鼠酮及其位置异构体的方法
技术领域：
本发明涉及一种高效液相色谱法，尤其涉及一种茚满二酮类鼠药杀鼠酮及 其位置异构体的高效液相色谱分离测定方法。
杀鼠酮(2-新戊酰—1，3-茚二亂Pindone)为茚满二酮类抗凝血类鼠药，具 有适口性好、靶谱广、对人畜安全等优点，对家鼠、野鼠均有良好的杀灭作用， 目前己广泛用于家庭和农业灭鼠。其分子式C14H1403;分子量230.26;其化 学结构式如下
杀鼠酮的位置异构体为异杀鼠酮(2-特戊酰-1,3-茚二酮，Valone)，其化学 结构式为
目前杀鼠酮的合成主要由邻苯二甲酸酯与甲基异丁基酮反应制得(田明祥, 辽宁化工，1999, 28(2): 122-123)或由邻苯二甲酸酯与偏二芳烃基丙酮反应制 得(CN1074897)，但不管来用哪一种形式的合成路线均不可避免地含有以杂质 形式存在的位置异构体，为控制最终产品的质量，建立位置异构体的分离分析 方法，对生产过程的质量控制非常重要。
常规分离位置异构体的方法常常采用专用色谱柱进行分离，不但成本高而 且分离难度大，分离时间长，有时需添加不挥发性无机盐缓冲液进行流动相的
背景技术：
<formula>formula see original document page 3</formula>改性，造成与质谱检测器的不相容性。
发明内容
本发明的目的在于针对现有技术的不足，提供一种用液相色谱分离测定杀 鼠酮及其位置异构体的方法，本发明的方法可用于杀鼠酮和异杀鼠酮的生产过 程、最终产品的质量控制、临床毒物诊断和环境分析等各个领域。
本发明的目的是通过以下技术方案来实现的 一种用液相色谱分离测定杀 鼠酮及其位置异构体的方法，包含以下步骤
(1) 取杀鼠酮或异杀鼠酮的产品适量，用低级醇或含低级醇的溶剂溶解样品，
并配制成每1mL含杀鼠酮或异杀鼠酮0.01~10 mg的样品溶液。
(2) 以普通C18色谱柱为固定相，缓冲液-低级醇溶液为流动相，对样品溶液 进行杀鼠酮或异杀鼠酮位置异构体的分离测定；设置流动相的流速为0.5 1.5 mL/min，检测波长为250~300 nm,色谱柱柱温为20-50 °C。
进一步地，所述普通C18色谱柱是牌号为XDBC18或XBridgeC18的色 谱柱。
进一步地，所述缓冲液-低级醇溶液的体积比为2:98 50:50。
进一步地，所述低级醇为甲醇、乙醇或异丙醇，优选为甲醇。
进一步地，所述缓冲液包括一种弱酸盐和一种有机酸，弱酸盐为乙酸铵、
甲酸铵或碳酸氢铵，其浓度为1.0~200mmol/L。有机酸为甲酸、乙酸或三氟乙
酸，其体积比浓度为0.01 2%。
进一步地，所述流动相的流速优选为1.0 mL/min，色谱柱柱温优选为30 'C，
最佳检测波长优选为280 nm。
本发明的有益效果是本法采用普通C18色谱柱，以一种可挥发性的弱酸
盐缓冲液对流动相进行改性快速准确地实现了杀鼠酮和异杀鼠酮位置异构体的
分离与测定，从而实现了杀鼠酮中微量位置异构体(异杀鼠酮)和异杀鼠酮中
微量位置异构体(杀鼠酮)的控制和分离，保证了杀鼠酮和异杀鼠酮产品的质
量可控和临床中毒病人的毒物鉴定需求。
图1为流动相为甲醇/乙酸铵-乙酸缓冲液(5 mmol/L, pH=5.5) =(70:30, v/v) 的HPLC图，图中，1号峰为杀鼠酮的色谱峰，2号峰为异杀鼠酮的色谱峰，且杀鼠酮的主峰在6.2 min左右。
图2为流动相为乙醇/甲酸铵-甲酸缓冲液(50mmol/L, pH=5.5)=(60:40， v/v) 的HPLC图，图中，1号峰为杀鼠酮的色谱峰，2号峰为异杀鼠酮的色谱峰，且 杀鼠酮的主峰在7.0 min左右。
图3为流动相为甲醇/碳酸氢铵-乙酸缓冲液(10 mmol/L， pH=5.0) =(50:50, v/v)的HPLC图，图中，1号峰为杀鼠酮的色谱峰，2号峰为异杀鼠酮的色谱峰， 且杀鼠酮的主峰在10.0 min左右。
图4为流动相为异丙醇/乙酸铵-三氟乙酸缓冲液(100 mmol/L， pH=5.5) =(90:10， v/v)的HPLC图，图中，1号峰为杀鼠酮的色谱峰，2号峰为异杀鼠酮 的色谱峰，且杀鼠酮的主峰在13.2min左右。
具体实施例方式
本发明用液相色谱分离测定杀鼠酮及其位置异构体的方法，包含以下步骤
1. 取杀鼠酮或异杀鼠酮的产品适量，用低级醇或含低级醇的溶剂溶解样品， 并配制成每1mL含杀鼠酮或异杀鼠酮0.01 10 mg的样品溶液。
2. 以普通C18色谱柱为固定相，缓冲液-低级醇溶液为流动相，对样品溶 液进行杀鼠酮或异杀鼠酮位置异构体的分离测定；设置流动相的流速为0.5~1.5 mL/min，检测波长为250 300 nm，色谱柱柱温为20~50 °C。
所用的C18色谱柱可以是牌号为XDBC18或XBridgeC18的色谱柱。
缓冲液-低级醇溶液的体积比为2:98 50:50;低级醇选自以下化合物中的一 种甲醇、乙醇和异丙醇，优选为甲醇。缓冲液包括一种弱酸盐和一种有机酸， 弱酸盐选自乙酸铵、甲酸铵和碳酸氢铵中的一种，其浓度为1.0~200mmol/L。 有机酸选自甲酸、乙酸和三氟乙酸中的一种，其浓度(v/v)为0.01~2%。
流动相的流速优选为1.0mL/min，色谱柱柱温优选为30'C，最佳检测波长 优选为280 nm。
以下实施例用于进一步理解本发明，但不限于本实施的范围。 实施例1
仪器与条件
高效液相色谱仪Agilent 1100 series HPLC; 色谱柱ZORBAX Eclipse XDBC18色谱柱(150 x 4.6 mm, 5 ym); 流动相甲醇/乙酸铵-乙酸缓冲液(5mmol/L, pH=5.5) (70:30， v/v); 紫外检测波长280 nm;流速1.0mL/min; 进样量10|JL。 步骤
取杀鼠酮和异杀鼠酮各约5 mg，置于250 mL量瓶中，加流动相溶解并稀 释至刻度，摇匀，作为供试品溶液。分别取试剂空白溶液和供试品溶液，按上 述条件进行高效液相色谱分析，记录色谱图，结果见图1。
图1中1号峰为杀鼠酮的色谱峰，2号峰为异杀鼠酮的色谱峰。在上述条件 下杀鼠酮和异杀鼠酮的位置异构体的色谱峰分离度良好，可以满足生产的质量 控制和毒物残留分析的要求。
实施例2 仪器与条件
高效液相色谱仪Agilent 1100 series HPLC;
色谱柱ZORBAX Eclipse XDB C化色谱柱(150 x 4.6 mm, 5 pm);
流动相乙醇/甲酸铵-甲酸缓冲液(50mmol/L， pH=5.5) =(60:40, v/v);
紫外检测波长250 nm;
流速0.5mL/min;
进样量10|JL。 实验步骤
取杀鼠酮和异杀鼠酮各约5 mg，置于250 mL量瓶中，加流动相溶解并稀 释至刻度，摇匀，作为供试品溶液。分别取试剂空白溶液和供试品溶液，按上 述条件进行高效液相色谱分析，记录色谱图，结果见图2。
图2中1号峰为杀鼠酮的色谱峰，2号峰为异杀鼠酮的色谱峰。在上述条件 下杀鼠酮和异杀鼠酮的位置异构体的色谱峰分离度良好，可以满足生产的质量 控制和毒物残留分析的要求。
实施例3 仪器与条件
高效液相色谱仪Agilent 1100 series HPLC;
色谱柱Waters XBridgeC18色谱柱(150 x 3,0 mm， 5 fjm);
流动相甲醇/碳酸氢铵-乙酸缓冲液(10mmol/L， pH=5.0) =(50:50, v/v);
紫外检测波长300 nm;
流速1.5mL/min;进样量10|JL。 实验步骤
取杀鼠酮和异杀鼠酮各约5 mg，置于250 mL量瓶中，加流动相溶解并稀 释至刻度，摇匀，作为供试品溶液。分别取试剂空白溶液和供试品溶液，按上 述条件进行高效液相色谱分析，记录色谱图，结果见图3。
图3中1号峰为杀鼠酮的色谱峰，2号峰为异杀鼠酮的色谱峰。在上述条件 下杀鼠酮和异杀鼠酮的位置异构体的色谱峰分离度良好，可以满足生产的质量 控制和毒物残留分析的要求。
实施例4 仪器与条件
高效液相色谱仪Agilent 1100 series HPLC;
色谱柱Waters XBridgeC18色谱柱(150 x 3.0 mm, 5 pm);
流动相异丙醇/乙酸铵-三氟乙酸缓冲液(100 mmol/L, pH=5.5) =(90:10，
v/v);
紫外检测波长280 nm; 流速1.0mL/min;
进样量10|JL。 实验步骤
取杀鼠酮和异杀鼠酮各约5 mg，置于250 mL量瓶中，加流动相溶解并稀 释至刻度，摇匀，作为供试品溶液。分别取试剂空白溶液和供试品溶液，按上 述条件进行高效液相色谱分析，记录色谱图，结果见图4。 图4中1号峰为杀鼠酮的色谱峰，2号峰为异杀鼠酮的色谱峰。在上述条件下 杀鼠酮和异杀鼠酮的位置异构体的色谱峰分离度良好，可以满足生产的质量控 制和毒物残留分析的要求。
上述实施例用来解释说明本发明，而不是对本发明进行限制，在本发明的 精神和权利要求的保护范围内，对本发明作出的任何修改和改变，都落入本发 明的保护范围。
权利要求
1. 一种用液相色谱分离测定杀鼠酮及其位置异构体的方法，其特征在于，包含以下步骤(1)取杀鼠酮或异杀鼠酮的产品适量，用低级醇或含低级醇的溶剂溶解样品，并配制成每1mL含杀鼠酮或异杀鼠酮0.01～10mg的样品溶液。(2)以普通C18色谱柱为固定相，缓冲液-低级醇溶液为流动相，对样品溶液进行杀鼠酮或异杀鼠酮位置异构体的分离测定；设置流动相的流速为0.5～1.5mL/min，检测波长为250～300nm，色谱柱柱温为20～50℃。
2. 根据权利要求1所述用液相色谱分离测定杀鼠酮及其位置异构体的方法，其 特征在于，所述普通C18色谱柱是牌号为XDBC18或XBridgeC18的色谱柱。
3. 根据权利要求1所述用液相色谱分离测定杀鼠酮及其位置异构体的方法，其 特征在于，所述缓冲液-低级醇溶液的体积比为2:98 50:50。
4. 根据权利要求1所述用液相色谱分离测定杀鼠酮及其位置异构体的方法，其 特征在于，所述低级醇为甲醇、乙醇或异丙醇，优选为甲醇。
5. 根据权利要求1所述用液相色谱分离测定杀鼠酮及其位置异构体的方法，其 特征在于，所述缓冲液包括一种弱酸盐和一种有机酸，弱酸盐为乙酸铵、甲酸 铵或碳酸氢铵，其浓度为1.0~200mmol/L。有机酸为甲酸、乙酸或三氟乙酸， 其体积比浓度为0.01 2%。
6. 根据权利要求1所述用液相色谱分离测定杀鼠酮及其位置异构体的方法，其 特征在于，所述流动相的流速优选为1.0mL/min,色谱柱柱温优选为30 °C，最 佳检测波长优选为280 nm。
全文摘要
本发明公开了一种用液相色谱分离测定杀鼠酮及其位置异构体的方法，首先取杀鼠酮或异杀鼠酮的产品适量，用低级醇或含低级醇的溶剂溶解样品，并配制成每1mL含杀鼠酮或异杀鼠酮0.01～10mg的样品溶液，然后以普通C18色谱柱为固定相，缓冲液-低级醇溶液为流动相，对样品溶液进行杀鼠酮或异杀鼠酮位置异构体的分离测定，本发明采用普通C18色谱柱，以一种可挥发性的弱酸盐缓冲液对流动相进行改性快速准确地实现了杀鼠酮和异杀鼠酮位置异构体的分离与测定，从而实现了杀鼠酮中微量位置异构体和异杀鼠酮中微量位置异构体的控制和分离，保证了杀鼠酮和异杀鼠酮产品的质量可控和临床中毒病人的毒物鉴定需求。
文档编号G01N30/02GK101435802SQ20081016344
公开日2009年5月20日 申请日期2008年12月22日 优先权日2008年12月22日
发明者金米聪, 陈晓红 申请人:宁波市疾病预防控制中心