2,2-二(3-氨基-4-羟基)苯基丙烷及其杂质含量的高效液相色谱分析方法

专利名称：：2,2-二(3-氨基-4-羟基)苯基丙烷及其杂质含量的高效液相色谱分析方法
技术领域：
：本发明涉及一种2,2-二(3-氨基-4-羟基)苯基丙垸及其杂质含量的高效液相色谱分析方法。
背景技术：
：2,2-二(3-氨基-4-羟基)苯基丙垸是一种新型膨胀型N-P型阻燃剂的中间体，在化学建材、电子电器、日用家具、室内装饰等领域有着广泛的应用。将双酚A硝化，得到中间产物2,2-二(3-硝基-4-羟基)苯基丙烷，然后通过氯化亚锡、锡、浓盐酸和乙醇为还原体系，即可以制备得到2，2-二(3-氨基-4-羟基)苯基丙烷。反应方程式为从以上方程式可知2,2-二(3-氨基-4-羟基)苯基丙烷产品中可能存在中间产物2，2-二(3-硝基-4-羟基)苯基丙烷杂质，其含量的高低直接影响最终产品2,2-二(3-氨基-4-羟基)苯基丙垸的质量。因此分析2,2-二(3-氨基-4-羟基)苯基丙烷含量时对中间产物2,2-二(3-硝基-4-羟基)苯基丙烷杂质含量的监控十分重要。目前尚未见测定2,2-二(3-氨基-4-羟基)苯基丙烷及其杂质含量方法的报道。
发明内容本发明的目的在于提供一种测定2,2-二(3-氨基-4-羟基)苯基丙烷及其杂质含量的高效液相色谱分析方法，以填补现有技术中对2,2-二(3-氨基-4-羟基)苯基丙垸含量检测的空白。本发明的技术方案如下一种2,2-二(3-氨基-4-羟基)苯基丙烷及其杂质含量的高效液相色谱分析方法，其特征在于采用反相高效液相色谱法，高效液相色谱条件为色谱柱C18，5Pm，150X4.6mm(I.D.)，流动相组成的体积比乙腈磷酸-磷酸盐缓冲水溶液(PH7.0^70:30，ml/ml;流速0.8ml/min;柱温28°C;检测波长285nm;进样量15U1。按照本发明的高效液相色谱分析方法，将测定含量的进样样品浓度用流动相稀释100倍，测定2,2-二(3-氨基-4-羟基)苯基丙烷主体及其杂质的含量，本发明的流动相中添加磷酸盐20mmol/lNa2HP04，用磷酸调节PH值为7.0。有益效果采用本发明的2,2-二(3-氨基-4-羟基)苯基丙烷及其杂质的高效液相色谱分析方法，快速准确测定2,2-二(3-氨基-4-羟基)苯基丙烷主体含量的同时，可测定杂质2，2-二(3-硝基-4-羟基)苯基丙垸的含量，为2,2-二(3_氨基_4-羟基)苯基丙垸的质量控制分析提供了简易可靠的分析方法。图1为不同比例的流动相组成的色谱图，其中图l-a为70%乙腈和30%含有pH7.0的磷酸缓冲液作流动相时的分离效果图；图l-b为50°/。乙腈和50%含有pH7.0的磷酸缓冲液作流动相时的分离效果图。图2为紫外吸收光谱图，其中图2-a为2,2-二(3-硝基-4-羟基)苯基丙垸的紫外吸收光谱图，图2-b为2,2-二(3-氮基-4-羟基)苯基丙烷的紫外吸收光谱图。图3为2，2-二(3-硝基-4-羟基)苯基丙烷的标准曲线图。图4为2,2-二(3-氨基-4-羟基)苯基丙烷的标准曲线图。图5为样品的色谱图，1.9684分钟的峰为2，2-二(3-氨基-4-羟基)苯基丙烷，5.363分钟的峰为2,2-二(4-羟基-3-硝基)苯基丙烷。具体实施例方式下面通过实施例对本发明作进一步说明，但实施例并不限制本发明的保护范围。主要实验仪器及色谱条件Waters1525型高效液相色谱仪，Waters717plus自动进样器，配Waters2996型二极管阵列(PDA)检测器，色谱分离系统的控制和记录由WatersBreeze色谱管理系统完成。色谱柱选用的是C,8,5Pm,150X4.6mm(I.D)，流动相为乙腈磷酸-磷酸氢二钠缓冲水溶液(pH7.0)=70:30ml/ml，流速为0.8ml/min,柱温为28°C，检测波长250nm。试剂与药品2,2-二(3-硝基-4-羟基)苯基丙烷对照品(>99.0%)2,2-二(3-氨基-4-羟基)苯基丙垸对照品(>99.0%)乙腈HPLC级磷酸分析纯磷酸氢二钠分析纯实验中配制流动相和样品溶液用水均为二次石英蒸馏水。实施例l:高效液相色谱条件的选择1.1流动相的选择将二次石英蒸馏水(含有pH7.0的磷酸-磷酸氢二钠缓冲溶液)与乙腈按比例混合作为流动相，分析样品与标样溶液。结果表明当乙腈比例小于55%时，2,2-二(3-硝基-4-羟基)苯基丙烷和2，2-二(3-氨基-4-羟基)苯基丙烷两种物质不能实现完全分离。为了同时兼顾分离度和测定时间，选择5乙腈-水(含有pH7.0的磷酸-小磷酸氢二氨缓冲溶液)比例为70:30ml/ml(体积比)，此时，各组分均能够实现基线分离，而且分析时间和合理，见图l-b。1.2检测波长的选择用二极管阵列检测器在200-400nm进行连续扫描，得到紫外吸收光谱图，2,2-二(4-羟基-3-硝基)苯基丙垸的特征吸收是277nm(图2-a)，2，2-二(3-氨基-4-羟基)苯基丙垸的特征吸收在293nm(图2-b)。兼顾各组分灵敏度，选择检测波长为285nm。1.3样品浓度的选择为了同时兼顾主体成分含量与杂质含量的测定，在测定杂质的含量时，样品的浓度必须足够大，以使杂质能够出峰；测定主体成分的含量时，溶液浓度过大会导致色谱峰超出检测范围而不能定量，故将样品稀释100倍后再测定，试验准确度见表l。实施例2:标准溶液及样品溶液的配制准确称取25.00mg2,2-二(4-羟基-3-硝基)苯基丙垸对照品，置于50ml容量瓶中，用流动相溶解并稀释至刻度，摇匀，得浓度为0.5mg/ml的2,2-二(4-羟基-3-硝基)苯基丙烷标准储备液，使用时逐级稀释到所需浓度。准确称取25.00mg2,2-二(3-氨基-4-羟基)苯基丙烷对照品，置于50ml容量瓶中，用流动相溶解并稀释至刻度，摇匀，得浓度为0.5mg/ml的2,2-二(3-氨基-4-羟基)苯基丙垸标准储备液，使用时逐级稀释到所需浓度。实施例3:标准曲线的制作选择最佳高效液相色谱条件，即色谱柱为C18,5Pm,150X4.6mm(I.D);流动相组成为的体积比为乙腈:磷酸-磷酸氢二钠缓冲溶液(pH7.0^70:30，ml/ml;流速为0.8ml/min;柱《显为28t:;检测波长为285nm。取2，2-二(3-硝基-4-羟基)苯基丙垸标准溶液15ul进样，以峰面积对浓度作图(图3)，2，2-二(3-硝基-4-羟基)苯基丙垸溶液在浓度2.2X10—3l.Omg/ml范围内时，样品浓度与峰面积成线性关系，线性回归方程为A2,2-二(3-硝基-4-羟基)苯基丙烷=3.6307X102+3.6843X104C，r=0.99807取2,2-二(3-氨基-4-羟基)苯基丙烷标准溶液15ul进样，以峰面积对浓度作图(图4)，2,2-二(4-羟基-3-硝基)苯基丙烷溶液在浓度1.5X1(T34.5mg/ml的范围内时，样品浓度与峰面积成线性关系，线性回归方程为A2,2-二(3-氨基-4-羟基)苯基丙烷=-1.4368X102+6.6453X104C，r=0.99984当信噪比S/N—时，测得2,2-二(3-硝基-4-羟基)苯基丙垸与2,2-二(3-氨基-4-羟基)苯基丙烷的最低检测限分别为l.lX10—3mg/ml和7.5X10-4mg/ml。实施例4:样品的测定4.1主含量的测定精确称取50.0mg2,2-二(3-氨基-4-羟基)苯基丙烷试样，置于50ml容量瓶中，用流动相溶解并稀释至刻度，摇匀，得浓度为l.Omg/ml的溶液。取上述l.Omg/ml溶液l.Oml置于50ml容量瓶中，加流动相稀释至刻度，摇匀，得0.02mg/ml的溶液，备用。选择任意5个批号的样品，按上述方法配制0.02mg/ml样品溶液。在本发明的高效液相色谱条件，即色谱柱为ds，5Pm,150X4.6mm(I.D);流动相组成为的体积比为乙腈:磷酸-磷酸盐缓冲水溶液(PH7.0"70:30，ml/ml;流速为0.8ml/min;柱温为28。C;检测波长为285nm进行HPLC分析，进样量为15ul(图l-a)。4.2杂质含量的测定选择任意五个批号的样品，按上述方法配制l.Omg/ml样品溶液。根据本发明的高效液相色谱条件，即色谱柱为C18,5Pm,150X4.6mm(I.D);流动相组成为的体积比为乙腈:磷酸-磷酸盐缓冲水溶液(PH7.0^70:30，ml/ml;流速为0.8ml/min;柱温为28。C;检测波长为285nm进行HPLC分析，进样量为15"1(图5)。样品中主成分2，2-二(3-氨基-4-羟基)苯基丙烷及杂质2,2-二(3-硝基-4-羟基)苯基丙垸的检测结果列于表1。表l.检测结果<table>tableseeoriginaldocumentpage8</column></row><table>权利要求1.一种2，2-二(3-氨基-4-羟基)苯基丙烷及其杂质含量的高效液相色谱分析方法，其特征在于包括如下步骤1)采用反相高效液相色谱法，高效液相色谱的条件为色谱柱C18，5μm，150×4.6mm(I.D.)流动相组成乙腈:磷酸-磷酸盐缓冲水溶液PH7.0＝70:30ml/ml流速0.8ml/min柱温28℃检测波长250nm进样量15μl2)分别配制2，2-二(3-氨基-4-羟基)苯基丙烷的标准溶液及样品溶液；3)制作标准曲线；4)样品含量的测定。2.根据权利要求1所述的高效液相色谱分析方法，其特征在于，将测定含量的样品浓度稀释100倍，测定2,2-二(3-氨基-4-羟基)苯基丙烷主体及其杂质的含量。3.根据权利要求1所述的高效液相色谱分析方法，其特征在于，在流动相中添加磷酸盐为20mmol/l(NH4)2HP04，用磷酸调节PH值为7.0。全文摘要本发明公开了一种2，2-二(3-氨基-4-羟基)苯基丙烷及其杂质含量的高效液相色谱分析方法。本发明采用反相高效液相色谱法，高效液相色谱条件为色谱柱C₁₈，5μm，150×4.6mm(I.D.)，流动相组成的体积比乙腈∶磷酸-磷酸盐缓冲水溶液(pH7.0)＝70∶30，ml/ml，流速0.8ml/min，柱温28℃，检测波长285nm，进样量15μl；本发明将测定含量的进样样品浓度用流动相稀释100倍，流动相中添加磷酸盐20mmol/lNa₂HPO₄，用磷酸调节pH值为7.0。本发明为2，2-二(3-氨基-4-羟基)苯基丙烷的质量控制分析提供了简易可靠的分析方法。文档编号G01N30/02GK101464436SQ20081020493公开日2009年6月24日申请日期2008年12月30日优先权日2008年12月30日发明者刘慧青,廖本仁,蒋旭亮,钱柯君,莹黄申请人:上海华谊(集团)公司