专利名称：葡萄糖胺聚糖减少免疫测定中非特异性结合的应用的制作方法
葡萄糖胺聚糖减少免疫测定中非特异性结合的应用 相关申请的交叉引用非特异性结合指在应用固相的异相测定中结合伙伴的非特 异性相互作用。非特异性结合通常减小所述异相测定的灵敏度，因此 希望减少这种非特异性结合。临床研究已经表明心肌肌钙蛋白I ( cTnl)在急性心肌梗塞 (AMI)后的4-6小时的血流中是可测定的且此后的数天内是保持提 高的(Mair等，Clin Chem 41(9): 1266-1272, 1995; Larue等，Clin Chem 39(6):972画979， 1993 )。因此，cTnl的提高掩盖了肌酸激酶-MB( CK-MB ) 和乳酸脱氬酶的诊断的窗口 (Bodor, J Clin Immunoassay 17(l):40-44， 1994)。进一步的研究已经表明cTnl对于心肌损伤比CK-MB具有更 好的临床专属性(Adams等，Circulation 88(1):101画106, 1993; Apple等， Clin Chim Acta 237:59-66, 1995 )。在一个优选的实施方案中，所述样品是血清或EDTA血浆， 所述分析物是肌钙蛋白，所述分析物结合剂是抗肌钙蛋白I单克隆抗 体，以及所述葡萄糖胺聚糖是硫酸软骨素。本实验的目的是测定向Tropl BJ和/或CJ试剂加入肝素是否 减弱Tropl假阳性结果。得到血清样品中肌钙蛋白I的重复的不真实 提高的多个报告。也得到了在EDTA血浆中不真实提高的Tropl结果 的若干报告。在一些情况中，从同样的患者得到的相配的肝素血浆试 样没有显示不真实提高的Tropl结果。实验包括向BJ和CJ试剂掺加肝素，随后使用这些试剂的测 定用先前已经表现阳性Trop结果的Tropl样品进行。先前已经表现假阳性Tropl结果的去杂血清试样嵌板的应 用，用每mL包含IO个单位的CJ溶液进行测定。这些去杂试样表现 了 cTnl (心肌肌钙蛋白I)浓度的显著的降低。未处理的试样的回收 率为8-35%，其被发现具有0.7-7.0%的表观浓度。然而，这些试样中 没有完全校正到低于血清参考上限(URL)。所述测定和捕获试剂(BJ)包含下列组分
组分 量g/L 水
K2HP04 13
KH2P04 17
异p塞唑啉酮 20
30%牛血清白蛋白 100
EDTA (等摩尔的二钠和三钠) 15mM
碌u酸4欠骨素C 1 生物素酰化的单克隆抗体24-40aa特异克隆5.5mg/L
生物素酰化的单克隆抗体19C7克隆 3mg/L
pH 6.6反应的顺丁 烯二酰亚胺基团活化；2)所述HRP用与NHS-SATA[s-乙酰基硫代乙 酸N-羟基琥珀酰亚胺]反应的硫醇基活化；3)纯化两个活化试剂而后 相互作用一起产生16A11-HRP,其随后^皮纯化。虽然已陈述本发明的实施方案，但是可以理解的是，因为本 领域技术人员可做修改，尤其是借助上述叙述，因此本发明不限于所 述实施方案。在不偏离本发明主旨的情况下，在本发明上述公开的范 围内可做合理的变化和修改。
权利要求
1. 一种免疫测定试剂，包含:稀释剂中的分析物结合剂；以及葡萄糖胺聚糖，其量足以减少对分析物进行的样品测定中的非特异性结合。
2. 如权利要求1所述的免疫测定试剂，其中所述葡萄糖胺聚糖是 碌^酸软骨素。
3. 如权利要求2所述的免疫测定试剂，其中所述硫酸软骨素存在 的量为乂人约0.25 mg/mL到约4 mg/mL。
4. 如权利要求2所述的免疫测定试剂，其中所述硫酸软骨素存在 的量为约1 mg/mL。
5. 如权利要求1所述的免疫测定试剂，其中所述分析物结合剂是 抗体。
6. 如权利要求1所述的免疫测定试剂，其中所述分析物是肌钙蛋白I。
7. —种样品组合物，包含样品，其待测定其中分析物的存在； 分析物结合剂；以及肝素以外的葡萄糖胺聚糖，其量足以减少对分析物进行的样品观'J 定中的非特异性结合。
8. 如权利要求7所述的样品组合物，其中所述样品是血清样品。
9. 如权利要求7所述的样品组合物，其中所述样品是包含乙二胺 四乙酸的血浆样品。
10. 如权利要求7所述的样品组合物，其中所述葡萄糖胺聚糖是 硫酸软骨素。
11. 如权利要求7所述的样品组合物，其中所述分析物结合剂是 抗体。
12. 如权利要求7所述的样品组合物，其中所述分析物是肌4丐蛋白I。
13. —种测定样品中分析物的方法，所述方法包含将待测定其中分析物的存在的样品与葡萄糖胺聚糖和分析物结 合剂结合，以便形成在所述样品中存在的任何分析物和所述分析物结 合剂的络合物，其中所述葡萄糖胺聚糖减少所述方法中的非特异性结合；以及测定所形成的络合物以便测定所述分析物。
14. 如权利要求13所述的方法，其中所述样品与所述葡萄糖胺聚 糖结合以及所形成的样品随后与所述分析物结合剂结合。
15. 如权利要求13所述的方法，其中所述样品与所述分析物结合 剂结合以及所形成的样品随后与所述葡萄糖胺聚糖结合。
16. 如权利要求13所述的方法，其中所述分析物结合剂被作为包 含稀释剂中的分析物结合剂和所述葡萄糖胺聚糖的免疫测定试剂提 供，以及其中所述免疫测定试剂与所述样品结合。
17. 如权利要求13所述的方法，其中所述分析物是肌钙蛋白I。
18. 如权利要求17所述的方法，其中所述葡萄糖胺聚糖是硫酸软 骨素。
全文摘要
本发明涉及葡萄糖胺聚糖减少免疫测定中非特异性结合的应用。提供一种免疫测定试剂，其包含稀释剂中的分析物结合剂，以及其量足以减少对分析物进行的样品测定中的非特异性结合的葡萄糖胺聚糖。在所提供的这种免疫测定试剂中，所述分析物是肌钙蛋白I，所述分析物结合剂是生物素酰化的抗肌钙蛋白I抗体，以及所述葡萄糖胺聚糖是硫酸软骨素。还提供一种样品组合物，其包含待测定其中分析物的存在的样品、分析物结合剂和肝素以外的葡萄糖胺聚糖。进一步提供测定样品中分析物的方法，其中使用葡萄糖胺聚糖减少非特异性结合。
文档编号G01N33/53GK101377488SQ20081021369
公开日2009年3月4日 申请日期2008年8月28日 优先权日2007年8月28日
发明者B·桑卡兰, D·C·海恩斯, G·伊尔伍德, P·C·霍西默, S·S·萨利文 申请人:奥索临床诊断有限公司