专利名称：幽门螺杆菌硝酸银检测试剂盒的制作方法
技术领域：
本发明涉及一种用于检测生物组织、粘液中幽门螺杆菌的试剂盒，特别是一种幽
门螺杆菌硝酸银检测试剂盒
背景技术：
幽门螺杆菌(HP)与慢性胃炎和消化性溃疡的发生有密切关系，它的检测对 胃病患者的诊断和治疗有一定的辅助作用。目前，采用最多的检测HP的银染方法是 Warthin-Starry法，文献记载幽门螺旋菌组织学技术显示各种方法中，银染法比较复杂，方 法稳定性较差，组织切片染色不易控制，但切片图像保存性稳定，细菌显示最清晰。即该方 法不足的地方是银染时间甚长，显影甚快，要掌握这一步骤染出HP显示较好的切片是不 容易的，要选显影最好的切片应用，造成上述缺陷的原因是对苯二酚液很容易与氧结合而 被氧化为对苯二醌，而作为分散剂和稳定剂的明胶液为单独现用现配，稍有不慎将影响效 果，因而该方法不能用于大批量染片，为适应目前的需要，有必要提供一种新型的幽门螺杆 菌硝酸银检测试剂盒。
发明内容
本发明的目的是提供一种幽门螺杆菌硝酸银检测试剂盒，采用本发明，可使幽门 螺杆菌的检测具有方法稳定性、可重复性和易推广性，且被检测的生物组织或粘液中幽门 螺杆菌存在形态清晰，易于被检测。 为达到上述目的，本发明采用以下技术方案 这种幽门螺杆菌硝酸银检测试剂盒，它包括硝酸银粉末，对苯二酚明胶粉末，去 离子水。 所述的硝酸银粉末与对苯二酚明胶粉末之重量比为1 : 10 20;所述的对苯二 酚明胶粉末中，对苯二酚粉末与明胶粉末的重量比为1 : 50 200，明胶的用量太显影缓慢。 所述的对苯二酚明胶粉末为经过预处理的粉末，其处理的方法是将对苯二酚粉 末及明胶粉末分别干燥；混匀；粉碎；过筛。干燥的温度范围为40_6(TC .粉末的粒度为 《50目，但粒度大于O。 生物组织准备生物组织经石蜡包埋切片置于玻璃载物片上烤干贴附牢固备用， 或刮取粘膜表面粘液和组织碎屑置于玻璃载物片上冷风干燥，95%乙醇15分钟固定备用。
本发明的原理是利用生物组织成分对银离子的还原性质的不同，借助含银离子 显影液中对苯二酚的还原显影辅助作用，使不同组织部位银离子密度不同，从而显示从浅 黄色到黑色不同的色彩。也显示出不同组织部位中相同微生物的相同的形态，其中HP呈深 棕色至黑色。 本试剂盒的使用方法 加定量的试剂溶媒于分别盛有硝酸银粉末、对苯二酚明胶粉末的容器中，充分溶解备用；取部分硝酸银液加入摆放有生物组织切片、粘液涂片的清洁染色缸中，置温箱数十 分钟；去离子水涮洗，备用；将剩余硝酸银液倒入对苯二酚明胶液，快速充分混合，将混合 液加入摆放有生物组织切片、粘液涂片的清洁染色缸中，观察；在生物组织切片、粘液涂片 呈咖啡色时，倾去显影液，自来水涮洗；脱水透明封固。 结果组织、粘液中幽门螺杆菌呈深棕至黑色，组织图像清晰，结构分明。
本试剂保存方法干粉状态，干燥避光处长期保存法。
由于本试剂盒的特点是采用预混合、粉末状，其优点是
1、这种制剂方便生产及运输储存，且使用方法简便。 2、提高了溶液中银离子的有效利用率，可控制组织色彩对比度，有利于观察，其稳 定性、可重复性好，还可降低试剂的用量。
图1为人类胃组织幽门螺杆菌的银染法显示
图2为人类胃组织幽门螺杆菌的银染法显示
图3为人类牙齿刮片表面粘液内幽门螺杆菌的银染法显示 图1、2中，Hp呈大小相近的短棒状、弯曲状、螺旋状深综或黑色显像，聚居或散在 出现，其中1为腺上皮，2为HP。图3为人类牙齿刮片表面粘液内幽门螺杆菌的银染法显示 Hp呈大小相近的短棒状、弯曲状深综或黑色显像，散在出现，其中，2为HP，3为脱落细胞。
具体实施例方式实施例1 :人类胃粘膜表面幽门螺杆菌的显示方法 1、生物组织经石蜡包埋切片置于玻璃载物片上烤干贴附牢固备用， 2、检测的方法是 分别取30毫升和60毫升去离子水加于分别盛有1克硝酸银粉末、2克对苯二酚明 胶粉末的容器中，充分溶解备用； 取上述的一部分硝酸银液，即20毫升硝酸银液加以一倍体积去离子水混匀，加 入摆放有生物组织切片的清洁染色缸中，置6(TC温箱30分钟；去离子水涮洗，备用；
将剩余硝酸银液10毫升倾入对苯二酚明胶液(对苯二酚与明胶的重量比1 : 50 或l : 100)快速充分混合，并将混合液加入摆放有生物组织切片的清洁染色缸中，显影2 分钟；在生物组织切片呈咖啡色时，倾去显影液，自来水涮洗；脱水透明封固。
结果(见图1)人类胃粘膜表面组织中幽门螺杆菌呈深棕至黑色棒状，组织图像 清晰，结构分明；染色标本可长期保存。
实施例2 :人类牙齿刮片表面幽门螺杆菌的显示方法 1、刮取粘膜表面粘液和组织碎屑置于玻璃载物片上冷风干燥，95%乙醇15分钟 固定备用。
2、检测的方法是 分别取30毫升和60毫升去离子水加于分别盛有1克硝酸银粉末、2克对苯二酚明 胶粉末的容器中，充分溶解备用； 取20毫升部分硝酸银液加以一倍体积去离子水混匀，加入摆放有牙齿刮片的清洁染色缸中，置6(TC温箱30分钟；去离子水涮洗，备用；将剩余硝酸银液IO毫升倾入对 苯二酚明胶液，快速充分混合，并将混合液加入摆放有牙齿刮片的清洁染色缸中，显影2分 钟；在牙齿刮片呈咖啡色时，倾去显影液，自来水涮洗；脱水透明封固。
结果(见图3)人类牙齿刮片表面粘液中幽门螺杆菌呈深棕至黑色棒状，组织图
像清晰，结构分明；染色标本可长期保存。 实施例3 :人类胃粘膜表面幽门螺杆菌的显示方法 1、生物组织经石蜡包埋切片置于玻璃载物片上烤干贴附牢固备用， 2、检测的方法是 分别取60毫升和120毫升去离子水加于分别盛有1克硝酸银粉末、2克对苯二酚 明胶粉末的容器中，充分溶解备用； 取上述的一部分硝酸银液，即40毫升硝酸银液加以一倍体积去离子水混匀，加 入摆放有生物组织切片的清洁染色缸中，置6(TC温箱30分钟；去离子水涮洗，备用；
将剩余硝酸银液20毫升倾入对苯二酚明胶液，快速充分混合，并将混合液加入摆 放有生物组织切片的清洁染色缸中，显影3-5分钟；在生物组织切片呈咖啡色时，倾去显影 液，自来水涮洗；脱水透明封固。 结果(见图2)人类胃粘膜表面组织中幽门螺杆菌呈深棕至黑色棒状，组织图像 清晰，结构分明；染色标本可长期保存。
权利要求
一种幽门螺杆菌硝酸银检测试剂盒，其特征在于它包括硝酸银粉末，对苯二酚明胶粉末，去离子水。
2. 根据权利要求1所述的一种幽门螺杆菌硝酸银检测试剂盒，其特征在于所述的对 苯二酚明胶粉末是经过预处理的粉末，其预处理的方法是将对苯二酚粉末及明胶粉末分 别干燥；混匀；粉碎；过筛。
3. 根据权利要求2所述的一种幽门螺杆菌硝酸银检测试剂盒，其特征在于所述的干 燥的温度在4(TC 一6(TC之间；粉末的粒度为《50目。
4. 根据权利要求1或2或3所述的一种幽门螺杆菌硝酸银检测试剂盒，其特征在于硝酸银粉末与对苯二酚明胶粉末之重量比为i : io 20。
5. 根据权利要求1或2或3或4所述的一种幽门螺杆菌硝酸银检测试剂盒，其特征在 于对苯二酚明胶粉末中，对苯二酚粉末与明胶粉末的重量比为1 : 50 200。
全文摘要
一种幽门螺杆菌硝酸银检测试剂盒，它包括硝酸银粉末，对苯二酚明胶粉末，去离子水。所述的硝酸银粉末与对苯二酚明胶粉末之重量比为1∶10～20；所述的对苯二酚明胶粉末中，对苯二酚粉末与明胶粉末的重量比为1∶50～200。本发明的优点是可使幽门螺杆菌的检测具有方法稳定性、可重复性和易推广性，且被检测的生物组织或粘液中幽门螺杆菌存在形态清晰，易于被检测。
文档编号G01N33/483GK101726581SQ20081022497
公开日2010年6月9日 申请日期2008年10月28日 优先权日2008年10月28日
发明者张丹 申请人:张丹