专利名称：双肿瘤标志物金标检测试纸的制作方法
技术领域：
本实用新型涉及一种双肿瘤标志物金标检测试纸，属于临床检验科学领域。
背景技术：
癌症是全世界各种疾病中最历害与严峻的杀手之一，肿瘤也是我国发病率、死 亡率最高的疾病之一。2000年，中国四分之一的死亡人数来自癌症。同时，肝炎病 毒感染是目前在全世界各地(主要为第三世界国家)幅盖面积巨大和人口众多的疾 病，有数以十亿人被感染，因此这成为全球影响最大的疾病之一。中国有十三亿人 口，也是肝炎病毒感染与肝癌的高发区，超过百分之十的中国人口是被肝炎病毒感 染过的，加上酗酒和其他环境与遗传因素，肝炎又会发展成为肝硬化以至肝癌，因 此肝癌发病率在中国是非常高。但肿瘤的早期发现、早期诊断、早期治疗是患者获 得长期生存的最主要途径。以肝癌为例，肿瘤直径〈2cm， 5年生存率几乎100%; 直径每增加lcm， 5年生存率下降20%。
肿瘤的早期发现、早期诊断、早期治疗是患者获得长期生存的最主要途径。肿 瘤标志物在肿瘤诊断，检测肿瘤复发与转移，判断疗效和预后以及人群普查等方面 都有很大的实用价值。肿瘤诊断三大支柱是图像诊断(包括B超、CT、核磁共振)、 化学诊断(血清学和免疫学)及细胞学和组织学诊断，而后两者均以肿瘤标志为主 要或辅助观察指标。肿瘤标志物是指肿瘤细胞在生长、增殖、转移或在肿瘤复发过 程中产生或分泌的物质。人们可通过化学、免疫、分子生物学或蛋白组学方法，在 血液、尿液、脑脊髓液等体液中捕捉到这些物质。
肿瘤标志(Tumor Markers)是指由肿瘤细胞分泌或脱落到血液或其他体液或组 织中，或是宿主对体内新生物反应而产生并进入到血液或体液或组织中而含量明显 高于正常参考值的一类生物活性物质。肿瘤标志物在肿瘤诊断，检测肿瘤复发与转 移，判断疗效和预后以及人群普查等方面都有较大的实用价值，而且在肿瘤发生和 发展机理研究中也具有重要作用。肿瘤标志物除用于肿瘤诊断外，可为临床肿瘤治 疗提供依据及以其为耙，进行肿瘤的靶向治疗及免疫治疗。肿瘤标志学已成为肿瘤 学中一个重要的新学科和新领域。
中国专利ZL 01239923.X公开了 一种乙肝表面抗原和甲胎蛋白双联胶体金免疫 层析试纸条其结构是在载体上部的纤维素膜两端分别有胶体金结合物垫和吸收 垫，两垫中间膜上依此有质控线、AFP禾卩HBsAg检测线，样品垫装在HBsAg+AFP 胶体金结合物垫上部。该试剂盒一次检测可同时获AFP和HBsAg两项指标。该专 利可用于诊断乙型肝炎和原发性肝癌，但是无法对肝癌的发展进程进行诊断和追踪。
发明内容
本实用新型要解决的技术问题是提供一种敏感、特异、能够分辩不同肝癌的双 肿瘤标志物金标检测试纸。
为实现上述目的，本实用新型采用以下设计方案
双肿瘤标志物金标检测试纸，在由PVC制成的载体(PVC底板)上部的硝酸 纤维素膜(即NC膜)上分别设有质控线、甲胎蛋白(AFP)检测线和癌胚抗原(CEA) 检测线，膜的一端设有胶体金结合物垫和样品垫(玻璃纤维)，另一端设有吸收垫 (棉浆板)。
所述胶体金结合物垫为由干燥的红色胶体金标记单克隆抗体的胶体金结合物垫。
本实用新型选用甲胎蛋白和癌胚抗原作为检测的标志物，甲胎蛋白是原发性肝 癌、肝炎、肝硬化的标志物，癌胚抗原是结、直肠癌及其他癌和其肝转移的肿瘤标 志物。
甲胎蛋白(AFP):我国是肝癌死亡率最高的国家，肝癌死亡人数约占全世界 的45% 50%。医疗工作人员已经达成共识提高生存率的最佳途径就是早诊断、 早发现、早治疗。其中最关键的是早期诊断，目前肝癌早期诊断生物学指标主要依 靠甲胎蛋白AFP，在相当部分良性肝病患者中甲胎蛋白也容易升高，不仅具有早期 诊断原发性肝癌的价值，而且有助于肝炎、肝硬化癌变的预警。对甲胎蛋白含量异 常的肝病患者密切随访，可早期诊治，以提高患者的生存率。
癌胚抗原(CEA):癌胚抗原是一种酸性糖蛋白，胚胎期合成于小肠、肝脏和胰 腺。成人血清含量极低。主要用于对结肠直肠癌、胃癌、胰腺癌、肝癌、肺癌、乳 腺癌及甲状腺髓质癌等患者的临床辅助诊断。其中结肠直肠癌CEA的敏感性高于 其他肿瘤标志物。CEA对肺腺癌较为敏感并且其阳性率随病程发展而增高，CEA
对鼻咽腺癌也较为敏感。CEA可显著提高诊断结直肠癌的敏感性和准确性，也可用 于结、直肠癌术后疗效评价、病情分期和复发监测。血清CEA水平变化与结肠癌 Duke分期密切相关。结直肠癌病人常常发生肝转移，而其间CEA升高更为明显。 在结直肠癌术前CEA检测有助于分期和制定治疗计划，但推荐术后2年或2年以 上每2 3个月检査1次血清CEA，若CEA升高，有必要进一步检查转移灶(主要 为转移性肝癌)。
甲胎蛋白(AFP)及癌胚抗原(CEA)为长期大量使用的肿瘤标志物，其临床反应结 果准确可靠。此多重次癌蛋白试剂盒产品的特点是以二种免疫法以达到检验多种 肿瘤标志物的目的。经检测，本实用新型比市场上的单次癌蛋白标志物的试剂为优， 蛋白芯片检测与其他抗体无交叉反应，可降低假阴，假阳性发生，试剂稳定性可达 1年，在检测、疾病诊断及药物研发中，均显示出快速、高效、高通量信息处理等 优势和良好的应用前景。
本实用新型采用金标免疫渗滤原理(GIFA);液体的移动是通过渗滤作用的横 流，应用的标记物为一般均采用简便的红色胶体金-来标记甲胎蛋白(AFP)及癌胚抗 原(CEA)抗体。标本中的抗原与试剂中的金标抗体反应后，形成结合的抗原-金标抗 体复合物和剩余的游离抗体；以固相膜免疫法的硝酸纤维素膜为载体，膜上有固定 于不同位置上的抗体甲胎蛋白(AFP)抗体、癌胚抗原(CEA)抗体，用于将抗原-金 抗体复合物结合定位及分离；同时，膜上另有一固定指控抗体(control),为羊或 兔抗人IgG抗体。
技术背景中的HBsAg+AFP专利与本发明的区别乃在于本发明用双重肿瘤标志， 不但可分辨原发性肝癌和转移性肝癌，也能应用在肝癌和其他非肝脏性的肿瘤包括 结肠直肠癌、胃癌、胰腺癌、肺癌、乳腺癌，甲状腺髓质癌与鼻咽腺癌的鉴别诊断， 并且本发明还可以用于对原发性肝癌的疗效判断；而背景技术中的专利只用了一种 肿瘤标志只能检测原发性肝癌这类肿瘤，不能诊断转移性肝癌和其他非肝脏性的肿 瘤，其加上乙型肝炎抗原的诊断，只能说明这肿瘤的形成过程是否与感染乙型肝炎 病毒有关，目前无法用于对肿瘤的疗效判断上。
本实用新型的优点是本实用新型可同时检测甲胎蛋白(AFP)及癌胚抗原 (CEA);结构简单、使用方便、敏感性好、特异性强、能够分辨原发性肝癌、肝炎、 肝硬化、和结、直肠癌及其肝转移和其他非肝脏性的肿瘤；检测瘤谱广，适用于常 见瘤种，尤其适于大规模健康体检(肿瘤筛查)，市场空间广阔，便于推广应用。
下面结合具体实施方式
对本发明作进一步说明，并非对发明的限定，依照本领 域公知的现有技术，本发明的实施方式并不限于此，因此凡依照本文公开内容所作 出的本领域的等同替换，均属于本发明的保护范围。
图1为本实用新型的双重次肝癌蛋白诊断试纸的立体结构示意图。
具体实施方式实施例1:
参阅图1所示，双肿瘤标志物金标检测试纸，在由PVC制成的载体(PVC底
板)l上部的硝酸纤维素膜(即NC膜)2上分别固定有质控线23 (羊或兔抗人IgG 抗体)、甲胎蛋白(AFP)检测线21和癌胚抗原(CEA)检测线22，膜的一端设 有由干燥的红色胶体金标记单克隆抗体的胶体金结合物垫3和样品吸收垫4 (玻璃 纤维)，另一端设有吸收垫5 (棉浆板)。
本实用新型的使用方法为
双肿瘤标志物金标检测试剂盒使用前，试剂盒与样品恢复至室温，平放桌面
(1) 加一滴样本血液、血清、或血浆 (25-50ul)到加样孔；
(2) 加入一滴稀释液(40-50ul)，开始计时；
(3) 待紫红色带出现，测试结果应在IO分钟时读出，20分钟后判定无效。
本发明检测结果参考
(1) 阳性(+ )两条紫红色带出现， 一条位于测试区(Tl)，另一条位于质控区 (C)，检测结果表明样本中含有AFP，水平高于正常值，如果C带强于T带，
样本中AFP含量低于400mg/ml,如果C，T带一致，样本中含有AFP水平在 400mg/ml左右，如果T带强于C带，样本中AFP含量高于400mg/ml 。
(2) 阳性(+ )两条紫红色带出现， 一条位于测试区(T2)，另一条位于质控区 (C)，检测结果表明样本中含有CEA，水平高于正常值，如果C带强于T带，
样本中CEA含量低于400mg/ml,如果C与T带一致，样本中含有CEA水平在 400mg/ml左右，如果T带强于C带，样本中CEA含量高于400mg/ml 。
(3) 阳性(+ )三条紫红色带出现，第一条位于测试区(Tl)，第二条位于测试 区(T2)第三条位于质控区(C)，检测结果表明样本中含有AFP与CEA，水平 高于正常值，如果C带强于T1,T2带，样本中AFP和CEA含量低于400mg/ml，如 果C, Tl， T2带一致，样本中含有AFP和CEA水平在400mg/ml左右，如果T1， T2带强于C带，样本中AFP和CEA含量高于400mg/ml 。
(4) 阴性(-)仅质控区(C)出现一条紫红色带，在测试区1 (Tl)无紫红 色带出现。阴性结果表明样本中含有AFP水平量低于20ng/ml。
(5) 阴性(-)仅质控区(C)出现一条紫红色带，在测试区2 (T2)无紫红 色带出现。阴性结果表明样本中含有CEA水平量低于20ng/ml。
(6) 无效质控区(C)，没出现紫红色带，表明不正确的操作过程，样本不 适当保存或制备，或试剂盒无效，应用新的试剂盒和样本再测试。
权利要求1.双肿瘤标志物金标检测试纸，其特征在于在由PVC制成的载体上部的硝酸纤维素膜上分别设有质控线、甲胎蛋白检测线和癌胚抗原检测线，膜的一端设有胶体金结合物垫和样品垫，另一端设有吸收垫。
2. 根据权利要求1所述的双肿瘤标志物金标检测试纸，其特征在于所述胶 体金结合物垫为由干燥的红色胶体金标记单克隆抗体的胶体金结合物垫。
3. 根据权利要求1所述的双肿瘤标志物金标检测试纸，其特征在于所述样 品垫为玻璃纤维材质。
4. 根据权利要求1所述的双肿瘤标志物金标检测试纸，其特征在于所述吸 收垫为棉浆板。
5. 根据权利要求1所述的双肿瘤标志物金标检测试纸，其特征在于所述质 控线为羊或兔抗人IgG抗体。
专利摘要本实用新型公开了一种双肿瘤标志物金标检测试纸，属于临床检验领域。双肿瘤标志物金标检测试纸，在由PVC制成的载体上部的硝酸纤维素膜上分别设有质控线、甲胎蛋白检测线和癌胚抗原检测线，膜的一端设有胶体金结合物垫和样品垫，另一端设有吸收垫。本实用新型的优点是本实用新型可同时检测甲胎蛋白(AFP)及癌胚抗原(CEA)；结构简单、使用方便、敏感性好、特异性强、能够分辨原发性肝癌、肝炎、肝硬化、和结、直肠癌及其肝转移；检测瘤谱广，适用于常见瘤种，尤其适于大规模健康体检(肿瘤筛查)，市场空间广阔，便于推广应用。
文档编号G01N33/574GK201196651SQ20082010801
公开日2009年2月18日 申请日期2008年5月22日 优先权日2008年5月22日
发明者吴小意, 李仲兴, 智 王, 陈若瀚, 齐山峰 申请人:北京德易和康技术有限公司