专利名称：：一种2-氯烟酸含量的分析方法
技术领域：
：本发明属于分析
技术领域：
，涉及含量分析方法，特别涉及一种2-氯烟酸含量分析技术。
背景技术：
：近年来随着农药和医药科学的发展，烟酸系列化学品越来越受到广泛地关注和应用。其中2-氯烟酸作为农用和医用中间体被用于制备新型高效除草剂、非兹体抗炎症药物高效消炎镇痛尼氟灭酸、普拉洛芬等，这些产品在国内外供不应求。2-氯烟酸的中文名称2-氯烟酸、2-氯-3-吡啶甲酸，英文名称2-chloronicotinicacid、2-chloro-3-pyridinecarboxylicacid，分子式为C6H4C1N02，分子量为157.56,2-氯烟酸为白色或原白色结晶性粉末，熔点为176-178°C。2-氯烟酸作为一种重要的医药和农药中间体，它在生产过程中会产生副产物6-氯烟酸。6-氯烟酸若含量过高，将严重影响后续产品的品质，因此对2-氯烟酸含量测定非常重要。经査阅国内外有关文献，未见有关2-氯烟酸含量的分析报道，而为了保证2-氯烟酸生产过程中的实时控制，特别需要一种2-氯烟酸含量的检测方法。
发明内容针对现有技术中没有对于2-氯烟酸含量的分析方法，本发明提供了一种采用高效液相色谱分析的方法，对2-氯烟酸含量进行分析，该方法专属性强，精密度好，回收率高的高效液相色谱法，特别适用于农药原药中间产品的质量控制，从而满足后续产品的生产要求。本发明所釆用的分析方法具体如下釆用高效液相色谱外标方法分析，具体采用ZORBAXSB-Phenyl不锈钢填充柱，柱长150亳米，柱内径4.6亳米，所用填料粒径为3.5微米，柱室温度为30°C;经过长期试验，发现采用这种色谱柱进行检测时，对于2-氯烟酸而言是最佳的，因此优选釆用了这种色谱柱，本色谱柱所釆用的与已有技术中釆用的Z0RBAXSB-Phenyl不锈钢填充柱相同，可在巿场上直接购得。具体检测方法如下以下的流动相比例全是体积分数为了得到良好的分离效果，采用以PH=2-3的磷酸盐缓冲溶液与甲醇的混合体系为流动相，甲醇在流动相中的体积分数为20%至30%;由于磷酸盐本身是弱酸盐，因此为了保证检测过程中的酸性环境，需要调节整个缓冲液的PH=2-3，发明人最终发现当整个缓冲液的PH=2.4时，分离效果最为理想，且稳定性好，因此优选缓冲液的PH=2.4。用纯甲醇作溶剂分别溶解标准物质和待测样品，得到标样和试样；将高效液相色谱的检测波长设定为230nm至254nm，仪器基线稳定后，按标样、试样、试样、标样的顺序依次进样，得到四条扫描曲线，分别对标样和试样的2-氯烟酸峰面积进行平均，得其峰面积平均值；按照下式对2-氯烟酸的质量分数进行计算^_4，rA」1.附3式中A一一标样中，2-氯烟酸峰面积的平均值；A2——试样中，2-氯烟酸峰面积的平均值；m丄--氺示样的质量，g;m2--试样的质量，g;P,—一标样中2-氯烟酸的质量分数，％。针对于2-氯烟酸，现有的技术中没有相应的采用高效液相色谱的检测方法，而其检测波长也是未知的，而通过对其自身性质的研究，发明人将其检测波长确定在了230nm至254nm，在该波长内，可以釆用高效液相色谱对其进行含量的检测，提高了检测的精度，同时也填补了现有技术中的空白。为了达到更好的检测效果和准确度，开启机器自检通过后，在规定的操作条件下，仪器基线稳定后连续注入数针标样，计算各针相对响应值,达到相邻两针相对响应值变化小于1.5%时再进行依次进样，这样可以有效的降低由于仪器开机后的不稳定而造成的误差，提高最终检测结果的准确度。一般控制流动相中甲醇的体积分数为23%,每次进样的样品体积为20微升；同时控制流动相的流速为lml/min，检测器的检测波长在235nm，对2-氯烟酸来说，这是最稳定的紫外吸收波长。所采用的磷酸盐缓冲溶液主要釆用磷酸二氢盐，如可以釆用磷酸二氢钠的缓冲液或磷酸二氢钾的缓冲溶液，优选釆用磷酸二氢钠的缓冲溶液，其制备方法是称取3.45克磷酸二氢钠加1000亳升的水，用85。/。磷酸调至PH值为2-3待用。综上所述，本发明提供了一种全新的检测2-氯烟酸质量分数的方法，填补了现有技术中相应领域的技术空白，采用上述方法检测2-氯烟酸的质量分数，可以实现杂质与主峰分离完全，色谱峰形好，积分计算结果准确、重复性好，所得的结果可信度高，特别适用于农药原药中间产品的质量控制，对保证最终产品的质量具有重要作用和现实意义。图1是实施例1中2-氯烟酸在色谱条件下的色谱图；图中1处的色谱峰为2-氯烟酸的峰，其保留时间为6.950分钟。具体实施例方式实施过程中所釆用的高效液相色谱仪为安捷伦公司生产的1120液相色谱仪。实施例1现有一批2-氯烟酸货物，数量500公斤，需检测该批货物中2-氯烟酸的有效含量。色谱柱条件采用ZORBAXSB-Phenyl3.5um，4.6x150mm不锈钢色谱柱进行分离，柱室温度为3(TC,以PH4.4的磷酸盐缓冲溶液甲醇(体积比)=77:23为流动相，流速为1.Oml/min,检测波长为235nm,进样体积为20微升；所采用的磷酸盐缓冲溶液釆用下述方法制备称取3.45克磷酸二氢钠加1000亳升的水，用85y。磷酸调至PH值为2.4。标样溶液配制准确称取2-氯烟酸标样O.0509g，置于100mL容量瓶中，加30ml甲醇，超声波振荡溶解，冷至室温后，用甲醇稀释至刻度，得到标样溶液备用。试样溶液配制准确称取含2-氯烟酸O.0518g试样，置于100mL容量瓶中，加30ml甲醇，超声波振荡溶解，冷至室温后，用甲醇稀释至刻度，得到试样溶液备用。测试与数据处理开启仪器自检通过后，在规定的操作条件下，待仪器基线稳定后，连续注入数针标样溶液，计算各针相对响应值，达到相邻两针相对响应值变化小于1.5%时，按标样、试样、试样、标样的顺序依次进样，在235mn波长下检测，得数据如下<table>tableseeoriginaldocumentpage5</column></row><table><table>tableseeoriginaldocumentpage6</column></row><table>XI将测得的2针试样溶液以及其前后2针标样溶液中2-氯烟酸峰面积分别进行平均，以质量分数表示2-氯烟酸的含量X,按下式计算A.战2式中A:—一标样中，2-氯烟酸峰面积的平均值;A2—一试样中，2-氯烟酸峰面积的平均值;iih——标样的质量，g;m2--试样的质量，g;Pi—一标样中2-氯烟酸的质量分数，％计算可得样品的质量分数为98.78%。实施例2现有一批2-氯烟酸货物，数量1000公斤，需检测该批货物中2-氯烟酸的有效含量。色谱柱条件采用Z0RBAXSB-Phenyl3.5um，4.6x150mm不锈钢色谱柱进行分离，柱室温度为30。C,以ra=2.0的磷酸缓冲溶液甲醇体积比=80:20为流动相，流速为1.Oral/min,检测波长为254nm，进样体积为20微升；所采用的磷酸盐缓冲溶液采用下述方法制备称取3.45克磷酸二氢钠加1000亳升的水，用85%磷酸调至PH值为2.0。标样溶液配制准确称取2-氯烟酸标样O.0512g,置于100mL容量瓶中，加30ml甲醇，超声波振荡溶解，冷至室温后，用甲醇稀释至刻度，得到标样溶液备用。试样溶液配制准确称取含2-氯烟酸0.0506g试样，置于lOOmL容量瓶中，加30ml甲醇，超声波振荡溶解，冷至室温后，用甲醇稀释至刻度，得到试样溶液备用。测试与数据处理开启仪器自检通过后，在规定的操作条件下，待仪器基线稳定后，连续注入数针标样溶液，计算各针相对响应值，达到相邻两针相对响应值变化小于1.5%时，按标样、试样、试样、标样的顺序依次进样，在254nm波长下检测，得数6据如下:样品称样量色谱峰面积色谱峰面积平均值含量标样Ml0.0512g2560147825605677PI99.32%25609875试样M20.Q506g2520987625205816XI25201756将测得的2针试样溶液以及其前后2针标样溶液中2-氯烟酸峰面积分别进行平均，以质量分数表示2-氯烟酸的含量Xi按下式计算式中A:—一标样中，2-氯烟酸峰面积的平均值；A2—一试样中，2-氯烟酸峰面积的平均值；mi——标样的质量，g;m2——试样的质量，g;Pi—一标样中2-氯烟酸的质量分数，％计算可得样品的质量分数为98.93%。实施例3现有一批2-氯烟酸货物，数量800公斤，需检测该批货物中2-氯烟酸的有效含量。色谱柱条件采用Z0RBAXSB-Phenyl3.5um,4.6x150mm不锈钢色谱柱进行分离，柱室温度为30。C,以ra-3.0的磷酸缓冲溶液甲醇体积比=70:30为流动相，流速为1.Oml/min，检测波长为230nm,进样体积为20微升；所采用的磷酸盐缓冲溶液采用下述方法制备称取3.45克磷酸二氢钠加1000毫升的水，用85。/。磷酸调至PH值为3.0。标样溶液配制准确称取2-氯烟酸标样O.0496g，置于100mL容量瓶中，加30ml甲醇，超声波振荡溶解，冷至室温后，用甲醇稀释至刻度，得到标样溶液备用。试样溶液配制准确称取含2-氯烟酸0.0510g试样，置于100mL容量瓶中，加30ml甲醇，超声波振荡溶解，冷至室温后，用甲醇稀释至刻度，得到试样溶液备用。测试与数据处理开启仪器自检通过后，在规定的搡作条件下，待仪器基线稳定后，连续注入数针标样溶液，计算各针相对响应值，达到相邻两针相对响应值变化小于1.5%时，按标样、试样、试样、标样的顺序依次进样，在230nm波长下检测，得数据如下<table>tableseeoriginaldocumentpage8</column></row><table>将测得的2针试样溶液以及其前后2针标样溶液中2-氯烟酸峰面积分别进行平均，以质量分数表示2-氯烟酸的含量Xi按下式计算^.附2式中、一一标样中，2-氯烟酸峰面积的平均值；A2—一试样中，2-氯烟酸峰面积的平均值；m:——标样的质量，g;m2—一试样的质量，g;Pi—一标样中2-氯烟酸的质量分数，％计算可得样品的质量分数为98.51%。为验证上述发明所述方法的可行性和准确性，进行了如下验证试验试验例1色谱条件采用ZORBAXSB-Phenyl3.5um,4.6x150mm不锈钢色谱柱进行分离，柱室温度为30。C，以PH-2.4的磷酸缓冲溶液曱醇体积比=77:23为流动相，流速为1.0ml/min,检测波长为235nm,进样体积为20微升。标样配制准确称取2-氯烟酸标样0.0513g,置于100niL容量瓶中，加30ml甲醇，超声波振荡溶解，冷至室温后，用甲醇稀释至刻度，得到标样备用。试样配制准确称取含2-氯烟酸0.05g(精确至0.0002g)试样,6份分别置于100mL容量瓶中，加30ml甲醇，超声波振荡溶解，冷至室温后，用甲醇稀释至刻度，得到平行试样备用。测试与数据处理开启机器自检通过后，在规定的操作条件下，仪器基线稳定后，连续注入数针标样，计算各针相对响应值，达到相邻两针相对响应值变化小于l.5%时，按标样、试样、试样、标样的顺序依次进样，在235nm进行扫描，杂质分离完全，峰形良好，按式(1)计算试样的有效成分含量，结果列于表l表1<table>tableseeoriginaldocumentpage9</column></row><table>由表中数据可见，该方法实验结果重复性良好。试验例2色谱柱条件、标样配制、测试于计算方法同试验例1,以PH-2.O的轔酸缓冲溶液甲醇(体积比)=80:20为流动相，流速为1.Oml/min，检测波长为230进样体积为20微升。试样配制分别称取适量2-氯烟酸，加甲醇溶解并稀释成含2-氯烟酸215ug/ml、318ug/ml、432ug/ml、511ug/ml、614ug/m、705ug/ml、814ug/ml、916ug/ml的一组2-氯烟酸试样备用。测试与数据处理依法在230nm进行测定，以峰面积(A)对样品浓度，作线性回归，得到回归方程为y=1351.2x+484.32相关系数r-O.9997可见2-氯烟酸在200-900ug/ml范围内线性关系良好。9试验例3色谱条件、标样配制、测试与计算方法同试验例1,以以PH=3.0的磷酸缓冲溶液甲醇(体积比)=70:30为流动相，流速为1.Oml/min,检测波长为254nm，进样体积为20微升。试样配制不同人员在不同实验室准确称取含2-氯烟酸0.05g(精确至0.0002g)试样6份，分别置于100ml容量瓶中，加30ml甲醇，超声波振荡溶解，冷至室温后，用甲醇稀释至刻度，得到一组中间精密度试验用试样备用。测试与数据处理依法在254nm进行扫描测定，杂质分离完全，峰形良好，按式(1)计算试样的有效成分含量，结果列于表2，表2\项目试验^\称样量(g)峰面积含量平均含量相对平均偏差u)10.05062580458998.6920.05122611789398.7630.04982540012398.7098.750.0340.05132616784598.8050.04782438369898.7860.05202652314698.75由表中数据可见，该方法实验结果中间精密度良好。试验例4色谱柱条件、标样配制、测试与计算方法同试验例1，以P^2.4的磷酸缓冲溶液甲醇(体积比)=75:25为流动相，流速为1.Oml/min，检测波长为230nm，进样体积为20微升。试样配制不同人员在不同实验室准确称取含2-氯烟酸0.0511g试样，置于100ml容量瓶中，加30ml甲醇，超声波振荡溶解，冷至室温后，用甲醇稀释至刻度，得到试样备用。测试与数据处理10不同时间依法在230nm'进行扫描测定，杂质分离完全，峰形良好，按式(1)计算试样的有效成分含量，结果列于表3表3时间RSD0/。0123612(h)峰面积2457891124561246245378932457892124574563245238970.09由表中数据可见，该方法实验结果时间稳定性良好。试验例5色谱柱条件、标样配制、测试与计算方法同试验例1，以P^2.4的磷酸缓冲溶液甲醇(体积比)-77:23为流动相，流速为1.Oml/min，检测波长为235nm,进样体积为20微升。试样配制以已知质量分数的2-氯烟酸产品为底样，加入2-氯烟酸纯品，定容做加标回收试验。测试与数据处理在235nm进行扫描测定，杂质分离完全，峰形良好，按式(1)计算试样的有效成分含量，结果列于表4，表4工业2-氯烟酸加2-氯烟酸2-氯烟酸回回收率平均回收相对平均偏差(%)质量(mg)纯品质量(mg)收质量(mg)(%)率(％)i35.4515.7815.80風13226.9826.0826.0599.88330.4519.5619.57100.0599.930.107424.6925.9425.9099.85531.4921.6521.6399.91637.8912.5612.5399.76由表中数据可见，加标回收率良好。权利要求1.一种2-氯烟酸含量的分析方法，其特征在于采用高效液相色谱外标法分析，具体方法如下用纯甲醇作溶剂分别溶解标准物质和待测样品，得到标样和试样；将高效液相色谱的检测波长设定为230nm至254nm，仪器基线稳定后，按标样、试样、试样、标样的顺序依次进样，得到四条扫描曲线，分别对标样和试样的2-氯烟酸峰面积进行平均，得其峰面积平均值；按照下式对2-氯烟酸的质量分数进行计算<mathsid="math0001"num="0001"><math><![CDATA[<mrow><msub><mi>X</mi><mn>1</mn></msub><mo>=</mo><mfrac><mrow><msub><mi>A</mi><mn>2</mn></msub><mo>·</mo><msub><mi>m</mi><mn>1</mn></msub><mo>·</mo><msub><mi>P</mi><mn>1</mn></msub></mrow><mrow><msub><mi>A</mi><mn>1</mn></msub><mo>·</mo><msub><mi>m</mi><mn>2</mn></msub></mrow></mfrac></mrow>]]></math></maths>式中A1——标样中，2-氯烟酸峰面积的平均值；A2——试样中，2-氯烟酸峰面积的平均值；m1——标样的质量；m2——试样的质量；P1——标样中2-氯烟酸的质量分数；X1——试样中2-氯烟酸的质量分数。2.根据权利要求1所述的分析方法，其特征在于所用色谱柱为ZORBAXSB-Phenyl不锈钢填充柱，柱长150毫米，柱内径4.6亳米，所用填料粒径为3.5微米，柱室温度为3(TC。3.根据权利要求1所述的分析方法，其特征在于所述分析方法中的流动相釆用PH=2-3的磷酸盐缓冲溶液与甲醇的混合体系，甲醇在流动相中的体积分数为20%至30%。4.根据权利要求3所述的分析方法，其特征在于所述的流动相中甲醇的体积分数为23%。5.根据权利要求3所述的分析方法，其特征在于所述磷酸盐缓冲溶液为磷酸二氢钠的缓冲液或磷酸二氢钾的缓冲溶液。6.根据权利要求1所述的分析方法，其特征在于每次进样的样品体积20微升；流动相的流速为1.Oml/min。7.根据权利要求1所述的分析方法，其特征在于高效液相色谱的检测波长控制在235nm。全文摘要本发明涉及药物中间体的含量分析方法，特别提供了一种2-氯烟酸含量的分析方法，其为高效液相色谱外标定量分析法，采用ZORBAXSB-Phenyl3.5μm，4.6×150mm不锈钢色谱柱进行分离，柱室温度为30℃，检测波长230nm至254nm；用纯甲醇作溶剂，以pH＝2.4的磷酸盐缓冲溶液与甲醇的混合体系为流动相；在230nm至254nm范围得到理想的色谱峰形，通过测定样品的响应值与标准物质的响应值进行比较，计算被测样品中的2-氯烟酸含量。该方法准确度高、精密度好、回收率高、简便、可行，特别适合农药中间体的分析，能有效控制2-氯烟酸的质量。文档编号G01N30/00GK101650345SQ20091001823公开日2010年2月17日申请日期2009年8月31日优先权日2009年8月31日发明者刘建丽,史庆苓,张建林,郑亭路,马韵升申请人:山东京博控股发展有限公司