专利名称：红细胞瞬间磁化方法
技术领域：
本发明属于生物技术领域。
背景技术：
磁性微球是1978年由Senyei A E首先研制成功的，现在在科学 研究与临床检验方面得到广泛应用。免疫磁珠分离技术操作简便，分 离纯度高，保留靶物质活性，且高效、快速、低毒，大大提高了分离 速度和富集效率，进而提高检测的灵敏性，减少其他物质的干扰；利
用免疫磁珠技术可省去离心步骤，磁场力就可以达到分离的目的，节 省费用、能源和时间；免疫磁珠技术可以与其他传统检测技术，如 ELISA、免疫荧光分析、放射免疫分析、PCR、流式细胞仪等相结合。 可使传统检测技术更加灵敏、方便，检测结果更加可靠；免疫磁珠技 术有利于实现试剂的标准化，操作的自动化，并可做到用一份标本进 行多项检测。
血型血清学检测主要涉及以下三方面血型鉴定、抗体筛检和鉴 定、交叉配血。
1、血型鉴定采用正反定型来进行血型鉴定。
正定型是用已知抗体来测定红细胞上有无相应的抗原。 反定型是用已知抗原的细胞来测定血清中有无相应的抗体。
4目前常用方法玻片法、试管法、微板法、微柱凝胶法
2、 抗体筛检和鉴定 完全抗体的检测一盐水血凝试验
不完全抗体的检测一筛检-促凝集方法包括酶法、聚凝胺法，确 定试验是抗人球蛋白试验，包括传统的试管抗人球蛋白试验和微柱凝 胶试验。
3、 交叉配血
即相容性配血试验，检测受血者血清中抗体和献血者红细胞抗原 是否相合试验为主侧交叉配血试验，检测受血者红细胞和献血者血清 中抗体是否相合试验为次侧交叉配血试验相容性，对其中是不完全抗 体的，只能应用间接抗人球蛋白试验确定其相容性。
在上述方法中，大部分均需离心这一步骤，常用的有试管离心法 及微孔板离心法。离心完毕后需将试管从离心机中取出观察结果。这 一过程为手工操作，每一次离心的试管数量有限，且需要专用离心机 及消耗电力。无法在野战、紧急救援等缺乏电力供应的情况下进行检
发明内容
本发明的目的是利用金属离子合成具有顺磁性的磁性粒子，并将 其配置成合适浓度，与木瓜酶溶液一起组成瞬间磁化红细胞的方法。 本发明的步骤是匀，最后用容量瓶定容至200ml，然后用0.22um滤器过滤；
二、 合成磁粒
a、 反应釜中加入NaOH溶液，开启搅拌装置，搅拌速度缓慢上 升至12000 rpm，持续搅拌10分钟；
b、 在持续搅拌的同时以3L/分钟的流量通入高纯氮气驱氧20分
钟；
c、 驱氧完毕后缓慢加入步骤一制备的铁液，同时以12000 rpm 搅拌，剧烈反应30分钟，至pH值大于9终止反应，既得磁性粒子；
d、 将反应釜中液体磁力吸附20分钟；
e、 吸去上清液，然后加入300ml生理盐水，混匀磁粒；重复步 骤d直至检测洗涤液为中性为止；
f、 最后将所得磁性重悬于1%牛血清白蛋白生理盐水中，并调整 浓度为0.6mg/ml ，即为红细胞磁化液；
三、 木瓜酶溶液配制
a、 称取木瓜酶溶于PH5.4的PBS中；
b、 室温搅拌15min，过滤或离心，收集上清；
c、 37°C， 1小时激活；
d、 加入1/15M PH5.4PBS及至终体积200ml并加入终浓度为0.1% 的叠氮钠；
e、 滤过除菌，分装，4X:保存；
四、 红细胞的瞬间磁化
取新鲜血标本，离心、洗涤取得压积红细胞，取压积红细胞，红细胞磁化液，木瓜酶溶液，混匀，即制得瞬间磁化红细胞，其中压积
红细胞红细胞磁化液木瓜酶溶液=4 : 21 : 75。
本发明采用化学共沉淀法制备出大小合适，粒径均一的且具有瞬 间磁化特性的磁性粒子，然后以此磁化试剂使红细胞具有瞬间磁化特 性，即在存在磁场时，红细胞具有磁性， 一旦撤去磁场，红细胞的磁 性立即消失，没有剩磁。磁化红细胞具有与新鲜红细胞相同的生物学 性质，但其具有的瞬间磁化特性可以实现快速、简便的分离，可以在 血型血清学中广泛应用，例如用于红细胞表型鉴定，不规则抗体筛查 及红细胞输血相容性检测等方面。将免疫磁珠技术与血型血清学技术 相结合，使得磁珠的优点的以发挥，使得血型血清学试验过程更简便， 自动化程度提高，结果也更加可靠。
具体实施例方式
一、 制备铁溶液
称取三氯化铁4.05 g和氯化亚铁1.94 g，分别将其溶于80ml 0.17MHCL溶液中，搅拌混匀，最后用容量瓶定容至200 ml，然后 用0.22um滤器过滤；
二、 合成磁粒
a、 反应釜中加入75mllMNaOH溶液100ml，开启搅拌装置， 搅拌速度缓慢上升至12000 rpm，持续搅拌10分钟；
b、 在持续搅拌的同时以3L/分钟的流量通入高纯氮气驱氧20分
钟；
c、 驱氧完毕后缓慢加入步骤一制备的铁液，同时以12000 rpm搅拌，剧烈反应30分钟，至pH值大于9终止反应，既得磁性粒子， 磁场状态下进行分离。
d、 将反应釜中液体转移至锥形瓶，然后将锥形瓶置于磁座上磁 力吸附20分钟；
e、 吸去上清液，然后加入300ml生理盐水，混匀磁粒；重复步 骤d直至检测洗涤液为中性为止；
f、 最后将所得磁性重悬于1%牛血清白蛋白生理盐水中，并调整
浓度为0.6mg/ml ，即为红细胞磁化液；
其中磁性粒子的合成方法，为化学共沉淀法。采用的化学反应为
Fe2+2Fe3+80H=Fe304+4H20
三、 木瓜酶溶液配制
a、 称取2g木瓜酶溶于100ml 1/15M PH5.4PBS中；
b、 室温搅拌15min，过滤或离心，收集上清；
c、 37°C， 1小时激活；
d、 加入l/15MPH5.4PBS及至终体积200ml并加入终浓度为0.1。/。
e、 滤过除菌，分装，4"C保存；
四、 红细胞的瞬间磁化
取新鲜血标本，离心、洗涤取得压积红细胞，取压积红细胞，红 细胞磁化液，木瓜酶溶液，混匀，即制得瞬间磁化红细胞，其中压积
红细胞红细胞磁化液木瓜酶溶液二4 : 21 : 75。
实施例一 红细胞正定型向标记好的反应板中分别加入正定型所用的抗血请50ul，然后加 入磁化红细胞50ul，混匀，置磁性分离器上分离1分钟，震荡反应板， 观察结果。
实施例二抗体筛检
按照本发明所述方法制备瞬间磁化筛检细胞。向标记好的反应板
中加入待检标本，然后分别加入磁化筛检细胞50ul，置磁性分离器上
分离1分钟，震荡反应板，观察结果。 实施例三交叉配血
按照本发明所述方法制备瞬间磁化供者细胞。向反应板中加入受 者血清及瞬间磁化供者细胞，混匀置磁性分离器上分离l分钟，震荡 反应板，观察结果。
权利要求
1、一种红细胞瞬间磁化方法，其特征在于一、制备铁溶液称取三氯化铁和氯化亚铁，分别将其溶于HCL溶液中，搅拌混匀，最后用容量瓶定容至200ml，然后用0.22um滤器过滤；二、合成磁粒a、反应釜中加入NaOH溶液，开启搅拌装置，搅拌速度缓慢上升至12000rpm，持续搅拌10分钟；b、在持续搅拌的同时以3L/分钟的流量通入高纯氮气驱氧20分钟；c、驱氧完毕后缓慢加入步骤一制备的铁液，同时以12000rpm搅拌，剧烈反应30分钟，至pH值大于9终止反应，既得磁性粒子；d、将反应釜中液体磁力吸附20分钟；e、吸去上清液，然后加入300ml生理盐水，混匀磁粒；重复步骤d直至检测洗涤液为中性为止；f、最后将所得磁性重悬于1％牛血清白蛋白生理盐水中，并调整浓度为0.6mg/ml，即为红细胞磁化液；三、木瓜酶溶液配制a、称取木瓜酶溶于PH5.4的PBS中；b、室温搅拌15min，过滤或离心，收集上清；c、37℃，1小时激活；d、加入1/15M PH5.4PBS及至终体积200ml并加入终浓度为0.1％的叠氮钠；e、滤过除菌，分装，4℃保存；四、红细胞的瞬间磁化取新鲜血标本，离心、洗涤取得压积红细胞，取压积红细胞，红细胞磁化液，木瓜酶溶液，混匀，即制得瞬间磁化红细胞，其中压积红细胞∶红细胞磁化液∶木瓜酶溶液＝4∶21∶75。
全文摘要
一种红细胞瞬间磁化方法，属于生物技术领域。本发明的目的是利用金属离子合成具有顺磁性的磁性粒子，并将其配置成合适浓度，与木瓜酶溶液一起组成瞬间磁化红细胞的方法。本发明的过程包括制备铁溶液、合成磁粒、木瓜酶溶液配制、红细胞的瞬间磁化四大步骤。本发明免疫磁珠技术与血型血清学技术相结合，使得磁珠的优点的以发挥，使得血型血清学试验过程更简便，自动化程度提高，结果也更加可靠。
文档编号G01N1/28GK101487774SQ20091006656
公开日2009年7月22日 申请日期2009年2月25日 优先权日2009年2月25日
发明者孔维臣, 宇 张, 东 李, 勇 李, 杨文冲, 军 童, 凯 苏, 隋宝真 申请人:勇 李