专利名称：：中草药降压产品中掺杂卡托普利的快筛方法
技术领域：
：'本发明涉及利用化学指示剂对非生物材料的检测，尤其涉及血管紧张素转换酶抑制剂降压化合物的检测方法。
背景技术：
：降压药物根据其药理不同大致可分为五大类，利尿剂、e受体阻滞剂、转拮抗剂(CCB)、血管紧张素转换酶抑制剂(ACEI)和血管紧张素II受体拮抗剂(ARB)。长期过量服用降压药会带来严重的副作用，如口唇麻木、头痛、消化道出血、肝功能下降甚至丧失、诱发或使糖尿病恶化。一些不法厂商在巨大的经济利益引诱下，利用消费者急于治疗的心理和中药无毒副作用的认识误区，在中草药降压产品(包括由中草药制成的中成药、保健品和食品)中大量掺杂国家法律法规明令禁止的化学降压药以增强其降压效果。患者在不知情的情况下大量服用，严重危害了广大消费者的健康。血管紧张素转换酶抑制剂类化学降压成分中，以掺杂卡托普利最为常见。卡托普利，其起效剂量12.5mg，化学名称为1-[(2S)-2-甲基-3-巯基-1-氧代丙基]-L-脯氨酸，该化合物为白色或类白色结晶性粉末，有类似蒜的特臭，味咸，在甲醇、乙醇或三氯甲烷中易溶，在水中溶解。2005年版的《中国药典》中记载的该化合物的化学鉴别方法为取本品约25mg，加乙醇2ml溶解后，加亚硝酸钠结晶少许与稀硫酸10滴，振摇，溶液显红色。由于上述鉴别卡托普利的化学鉴别方法中使用的硫酸试剂属于危险化学品，不适宜带到现场中使用，各药业公司相继推出了一种新的鉴别卡托普利的化学方法(可参照复方卡托普利的说明书)取本品1片，研细，加水5ml，摇匀，加碱性亚硝基铁氰化钠试液适量，即显紫红色。与药典中的鉴别方法相比，该方法具有安全、快速、效果明显等特点。但是，这种方法不适用于检测中草药降压产品中是否掺杂卡托普利，一是由于中草药降压产品中掺杂的卡托普利比较少(10%以下)，在水溶液中与碱性亚硝基铁氰化钠试液反应的灵敏度较低，反应所显示的颜色比较浅，难以判断检测结果；二是由于中草药降压产品的水提液一般带有较深的背景色(棕黄色)，这种背景色可将卡托普利与碱性亚硝基铁氰化钠试液反应所显示的颜色覆盖，容易造成检测人员对结果作出错误的判断。
发明内容本发明所要解决的技术问题是降低中草药降压产品提取液背景色对检测卡托普利的干扰，使反应现象明显。本发明的技术方案是这样的一种中草药降压产品中掺杂卡托普利的快筛方法，该快筛方法由以下步骤组成(1)取样品，破碎，加入相当于样品质量510倍的体积比为5:1的乙醇-二氯甲烷，振摇使其溶解，过滤，保留滤液；(2)取lml步骤(1)所得的滤液，滴入35滴质量浓度为1%2%的碱性亚硝基铁氰化钠溶液，摇匀，若溶液变成酒红色，则表明样品中掺杂有卡托普利。本发明上述技术方案中，滴入碱性亚硝基铁氰化钠后溶液颜色的深浅与样品中所掺杂的卡托普利的量有关，所掺杂的卡托普利越多，溶液颜色越深。本发明上述技术方案中，所述的体积比为5:1的乙醇-二氯甲垸由5体积份的乙醇和1体积份的二氯甲垸混合得到；所述的碱性亚硝基铁氰化钠溶液由亚硝基铁氰化钠和等量的碳酸钠加水溶解得到。为了便于广大基层药监人员实施上述方法，本发明还提供一种体积小、携带方便的专用试剂盒，该试剂盒包括试剂A:体积比为5:1的乙醇-二氯甲烷；试剂B:质量浓度为1%2%的碱性亚硝基铁氰化钠溶液；本发明所述的试剂盒还包括至少一个带塞的样品瓶、至少一个滤头和至少一支带刻度的注射器。由于中草药降压产品中的化学成分多为极性物质，而乙醇又是一种极性溶剂，因此按常规的检测方法必然使其它杂质(相对于卡托普利的其它成分)也大量溶出，产生很深的背景色，严重干扰下一步骤的显色反应。本发明在乙醇中加入适量非极性溶剂二氯甲烷后，降低了溶剂的极性，使溶液背景色明显变浅，使得显色反应前后溶液的颜色变化更加明显。与现有的检测方法相比，本发明具有以下优点1、成本低廉。与高效液相色谱、薄层层析等方法相比，本发明方法具有成本低廉的特点，适合大批量药物的筛查和检验，具有较高的推广和应用价值。2、操作简单。本发明方法的操作极其简单，都是本领域最简单最基本的操作，无需专业的技术人员进行专门的操作。3、检测时间短。本发明方法的检测时间非常短，完成检测的全过程只需5分钟。为了更好地理解本发明，下面将通过实验进一步阐述本发明方法所具有的技术效果。实验一不同溶剂对结果的影响1、试剂U)水;(2)乙醇；(3)二氯甲烷；(4)体积比为5:1的乙醇-二氯甲烷；(5)配制质量浓度为P/。的碱性亚硝基铁氰化钠溶液取亚硝基铁氰化钠与碳酸钠各lg，加水溶解成100ml。2、实验仪器样品瓶、试管、滴管、滤头和注射器。3、样品样品l:取卡托普利4份，每份20mg;样品2:取清脑降压片4份，每份20mg，破碎；样品3:取复方丹参片4份，每份20mg，破碎，每份加入5mg的卡托普利；样品4:取正天丸4份，每份20mg，破碎，每份加入3mg的卡托普利；样品5:取脑立清胶囊4份，每份20mg，破碎，每份加入2mg的卡托普利。4、实验方法(1)取各样品l份，分别加入2ml的水，振摇使其溶解，过滤，保留滤液；(2)取各样品1份，分别加入2ml的乙醇，振摇使其溶解，过滤，保留滤液；(3)取各样品1份，分别加入2ml的二氯甲烷，振摇使其溶解，过滤，保留滤液；(4)取各样品1份，分别加入体积比为5:1的乙醇-二氯甲垸，振摇使其溶解，过滤，保留滤液；(5)分别取步骤(1)(4)所得的滤液lml，滴入3滴质量浓度为1%的碱性亚硝基铁氰化钠溶液，摇匀，观察颜色变化。5、实验结果实验结果如表1所示。由表1中可见，1、分别在水、乙醇、二氯甲垸和体积比为5:1的乙醇-二氯甲烷中滴入碱性亚硝基铁氰化钠后溶液均显无色。2、卡托普利溶于水、乙醇和体积比为5:1的乙醇-二氯甲烷，溶液均无背景色；滴入碱性亚硝基铁氰化钠后，含卡托普利的水、乙醇和体积比为5:1的乙醇-二氯甲垸虽然均为红色基调，但含卡托普利的体积比为5:1的乙醇-二氯甲垸为酒红色，且十分明亮。3、含降压药物的水、乙醇、和体积比为5:l的乙醇-二氯甲烷均虽为棕黄色基调，但含降压药物的体积比为5:1的乙醇-二氯甲烷的颜色明显要淡；滴入碱性亚硝基铁氰化钠后，三种溶液的颜色均无变化，仍保持滴入碱性亚硝基铁氰化钠前的棕黄色基调。4、含降压药物和卡托普利的水、乙醇、二氯甲烷和体积比为5:1的乙醇-二氯甲烷虽也均为棕黄色基调，但含降压药物和卡托普利的体积比为5:1的乙醇-二氯甲烷的颜色也明显要淡；滴入碱性亚硝基铁氰化钠后，含降压药物和卡托普利的水溶液和乙醇溶液的都无变化，而含降压药物和卡托普利的体积比5:1的乙醇-二氯甲烷则由棕黄色变为酒红色，唯有颜色的深浅稍有不同。由上面的归纳和总结我们可得出如下结论1、显色反应前溶液的背景色与溶剂的选择无关，仅取决于溶质的化学特性；2、降压药物掺杂卡托普利的混合物溶解后，溶液的棕黄色基调主要源于降压药物中的可溶成份；3、乙醇中加入适量非极性溶剂二氯甲垸后其极性明显要弱，溶出降压药物中的极性物质的能力明显降低，使得后续显色反应的背景色明显变浅(淡)，滴入碱性亚硝基铁氰化钠后溶液颜色变化显著。<table>tableseeoriginaldocumentpage6</column></row><table>注表中"+"表示颜色的深度，"+"越多表示颜色越深，"/"表示实验空白。实验二灵敏度研究1、实验试剂和仪器实施例l中的检测试剂盒2、样品样品l:称取12.5mg(起效剂量)的卡托普利，加入lml体积比为5:l的乙醇-二氯甲烷，振摇使其溶解；样品2:称取3.lmg(起效剂量的4分之一)的卡托普利，加入lml体积比为5:l的乙醇-二氯甲垸，振摇使其溶解；样品3:称取1.5mg(起效剂量的8分之一)的卡托普利，加入lml体积比为5:1的乙醇-二氯甲垸，振摇使其溶解；样品4:称取lmg(约为起效剂量的10分之一)的卡托普利，加入lml体积比为5:1的乙醇-二氯甲烷，振摇使其溶解；样品5:称取0.5mg(约为起效剂量的20分之一)的卡托普利，加入lml体积比为5:1的乙醇-二氯甲烷，振摇使其溶解。3、实验方法往各样品中滴入5滴质量浓度为1%的碱性亚硝基铁氰化钠溶液，摇匀，观察颜色变化。4、实验结果如表2所示，在当样品中的卡托普利含量^lmg(约为起效剂量的IO分之一)时，本发明的方法即可将其检测出来。本实验结果表明本发明方法适用于检测中草药降压产品中是否掺杂卡托普利。表2样品1样品2样品3样品4样品5滴入碱性亚硝基铁氰化钠前无色澄清无色澄清无色澄清无色澄清无色澄清滴入碱性亚峭基铁氰化钠后酒红色酒红色酒红色酒红色无明显变化具体实施方式实施例1检测试剂盒包括试剂A:体积比为5:1的乙醇-二氯甲垸；试剂B:质量浓度为1%的碱性亚硝基铁氰化钠溶液；该试剂盒还包括10个5ml的带塞样品瓶、10个滤头和10支带刻度的注射器。取清脑降压片1片，破碎，加入相当于清脑降压片质量5倍的试剂A，振摇使其溶解，过滤，滤液呈浅棕黄色，取lml滤液，滴入5滴试剂B，摇匀，溶液无明显变化，该结果与实际相符。实施例2检测试剂盒包括试剂A:体积比为5:1的乙醇-二氯甲烷；试剂B:质量浓度为2%的碱性亚硝基铁氰化钠溶液；该试剂盒还包括15个5ml的带塞样品瓶、15个滤头和15支带刻度的注射器。取复方丹参片1片，破碎，加入相当于复方丹参片质量7倍的试剂A，振摇使其溶解，过滤，滤液呈浅棕黄色，取lml滤液，滴入4滴试剂B，摇匀，溶液无明显变化，该结果与实际相符。实施例3检测试剂盒包括试剂A:体积比为5:l的乙醇-二氯甲烷；试剂B:质量浓度为1%的碱性亚硝基铁氰化钠溶液；该试剂盒还包括1个5ml的带塞样品瓶、1个滤头和1支带刻度的注射器。取脑立清胶囊l粒，其内容物掺入lmg的卡托普利，加入相当于脑立清胶囊和卡托普利总质量9倍的试剂A，振摇使其溶解，过滤；取lml滤液，滴入4滴试剂B，摇匀，溶液由浅黄色变成酒红色，该结果与实际相符。实施例4检测试剂盒包括试剂A:体积比为5:1的乙醇-二氯甲烷；试剂B:质量浓度为2%的碱性亚硝基铁氰化钠溶液；该试剂盒还包括5个5ml的带塞样品瓶、5个滤头和5支带刻度的注射器。取正天丸3粒，破碎，掺入5mg的卡托普利，加入相当于正天丸和卡托普利总质量8倍的试剂A，振摇使其溶解，过滤；取lml滤液，滴入3滴试剂B，摇匀，溶液由浅棕黄色变成酒红色，该结果与实际相符。权利要求1、一种中草药降压产品中掺杂卡托普利的快筛方法，该快筛方法由以下步骤组成(1)取样品，破碎，加入相当于样品质量5～10倍的体积比为5∶1的乙醇-二氯甲烷，振摇使其溶解，过滤，保留滤液；(2)取1ml步骤(1)所得的滤液，滴入3～5滴质量浓度为1％～2％的碱性亚硝基铁氰化钠溶液，摇匀，若溶液变成酒红色，则表明样品中掺杂有卡托普利。2、一种实施权利要求l所述快筛方法的专用试剂盒，该试剂盒包括试剂A:体积比为5:1的乙醇-二氯甲垸；试剂B:质量浓度为1%2%的碱性亚硝基铁氰化钠溶液。3、根据权利要求2所述的专用试剂盒，其特征在于所述的试剂盒还包括至少一个带塞的样品瓶、至少一个滤头和至少一支带刻度的注射器。全文摘要本发明涉及中草药降压产品中掺杂卡托普利的快筛方法，该快筛方法由以下步骤组成(1)取样品，破碎，加入相当于样品质量5～10倍的体积比为5∶1的乙醇-二氯甲烷，振摇使其溶解，过滤，保留滤液；(2)取1ml步骤(1)所得的滤液，滴入3～5滴质量浓度为1％～2％的碱性亚硝基铁氰化钠溶液，摇匀，若溶液变成酒红色，则表明样品中掺杂有卡托普利。本发明还公开了实施上述方法的专用试剂盒，该试剂盒包括体积比为5∶1的乙醇-二氯甲烷和质量浓度为1％～2％的碱性亚硝基铁氰化钠溶液。本发明的快筛方法具有快速、成本低廉、操作简单等特点，适合用于现场大批量的筛查。文档编号G01N21/77GK101672796SQ20091019277公开日2010年3月17日申请日期2009年9月28日优先权日2009年9月28日发明者李泳雪,肖树雄,莫结丽,贾宜军申请人:广东省药品检验所