专利名称：一种非浓缩尿蛋白电泳琼脂糖凝胶板的制作方法
技术领域：
本发明涉及一种尿蛋白诊断试剂，具体是涉及一种非浓縮尿蛋白电泳琼脂糖凝胶
板，它是做非浓縮尿蛋白电泳分离时所使用的载体，属医疗分析试剂。
背景技术：
传统的尿蛋白电泳是用聚丙烯酰胺凝胶作载体，它的缺点是①必需先将尿液标 本中的蛋白浓縮，浓縮过程导致部分尿蛋白丢失，电泳往往不能反应尿蛋白全貌。②聚丙烯 酰胺凝胶制备过程复杂，影响因素多，必需现做现用，重复性差，难以普及。③从尿标本浓縮 到发出报告需要2 3天时间，难以满足临床需要。
发明内容
本发明的目的在于克服上述现有技术的不足之处，提供一种非浓縮尿蛋白电泳琼 脂糖凝胶板，所述的凝胶板包括有两层结构，底层为亲水性塑料板，上层为琼脂糖凝胶。该 凝胶板用于尿蛋白电泳分型时作载体，使用方便，节省时间，分离区带清晰准确，分辨率高， 重复性好，易保存。
本发明是以如下技术方案实现的一种非浓縮尿蛋白电泳琼脂糖凝胶板，其特征 在于所述的凝胶板包括有两层结构，底层为亲水性塑料板，上层为琼脂糖凝胶。
所述的凝胶板厚度在0.8 2.0毫米。
所述的琼脂糖胶的配方如下 咪唑0. 15 0. 25mol/L、2-氨基2_甲基1， 3_丙二醇0. 15 0. 25mol/L、硼酸 0. 8 1. 500mol/L、乙二胺四乙酸二钠0. 10 0. 15mol/L、十二烷基硫酸钠2. 5 3. 5,1/ L、琼脂糖40 60g/L。 4、一种根据权利要求1所述的非浓縮尿蛋白电泳琼脂糖凝胶板的制备方法，其特 征在于按如下步骤进行 (1)先将咪唑、2-氨基2_甲基1，3-丙二醇、硼酸、乙二胺四乙酸二钠按上述配比 溶入蒸馏水中，充分溶解，再加入十二烷基硫酸钠，配制成凝胶缓冲液；再按上述相应的配 比放入琼脂糖搅拌，将盛放上述混合溶液的溶器放在水浴锅内加热，保湿保温，待琼脂糖全 部溶解后保持在70°C 8(TC恒温； (2)把模具下玻璃平板、亲水塑料板和硬塑料模板筐对齐叠放在恒温加热器上，温 度保持在40°C 50°C ; (3)用移液管定量吸取琼脂糖胶注入模板筐内，再覆盖预制加样槽模板和上玻璃 平板。 (4)把已注入琼脂糖的模具从恒温加热器上水平移出，慢慢冷却凝成半干状态后， 打开模具，取出铺好的凝胶板放在铝塑内密封保存备用。 (5)所述的非浓縮尿蛋白电泳琼脂糖凝胶板，一般为长方形，厚度在0. 8 2. 0毫 米，在上样位置设有5个预制加样槽，每个加样槽可上样5 iU 。
发明原理 十二烷基硫酸钠是一种阴离子型表面流活性剂，当其浓度达蛋白质的5 10倍
时，与还原剂共同作用，能使蛋白质分子内的氢键和二硫键断裂，解离成单独的亚基，与SDS
充分结合形成带负电荷的亚基-SDS胶束，所带电荷量远远超过蛋白质分子原有的电荷量，
从而消除了不同分子间原有的电荷差异。根据流体力学的研究证明，这种复合物是椭圆形，
短轴约为1.8A，但长轴的长度与亚基相对分子质量大小呈正比，加之琼脂糖凝胶的分子筛
作用，使电泳的迁移率与摩擦系数的反比关系只表现在蛋白质相对分子质量大小上，因此
尿蛋白各组分便可按相对分子质量的大小顺序排列在琼脂糖凝胶上。 本发明是放在干式平板电泳仪的电泳平板上使用，其方法是 1.样本采集及处理收集晨尿10毫升，1500转/分离心5分钟，取上清用尿试纸
条测蛋白，尿蛋白含量大于2+的尿液样本，用生理盐水稀释至l+。取上述尿液样本80iU
加入20 iU样本稀释液，旋转混匀放置10分钟备用。 2.把包装琼脂糖凝胶板的铝塑袋用剪刀剪开，取出塑料包装盒并打开，再取出琼 脂糖凝胶板轻轻放在电泳平板上，加入上述已处理的待测尿样5ia、电泳、烘干、染色、脱 色、扫描、报告结果。全过程可在3小时内完成。根据蛋白质的分子量一般可将蛋白分为肾 小球性，肾小管性，混合性，生理性及溢出性蛋白尿。 本发明的优点是非浓縮尿蛋白电泳琼脂糖凝胶板设计科学、合理，使用方便，分 离区带清晰准确，分辨率高，易保存，重复性好，成本低，易于推广使用，是干式平析电泳仪 最佳的配套试剂。非浓縮尿蛋白电泳较肾活检技术具有取材简便、无创伤性、敏感性高、不 需预先浓縮尿液、省时、电泳图谱及扫描图象易保存等特点，对于肾脏疾病的早期定位诊 断、鉴别、指导治疗和判断预后有很高的临床应用价值。
下面结合附图及实施例对本发明做进一步详细说明
图1为非浓縮尿蛋白电泳琼脂糖凝胶板的俯平面结构图
图2为图1的剖面图
图3为硬塑料模板筐
图4为预制加样槽模板
图5为模具结构示意图 图中1.亲水性塑料板，2.琼脂糖凝胶，3.硬塑料模板筐，4.预制加样槽模板， 5.下平板玻璃，6.上平板玻璃。
具体实施方式
实施例1 : 如图所示所述的琼脂糖凝胶板为两层结构，底层为亲水性塑料板l，上层为琼脂 糖凝胶2。 琼脂糖胶的配方如下 咪唑(C3H4N2) 17. 0克 2-氨基2_甲基1，3-丙二醇(C4HuN02) 15. 0克
硼酸(H萬)
乙二胺四乙酸二钠((^。1114^08化221120) 十二烷基硫酸钠(CH3- (CH2) u0S03Na)
72. 5克 0.4克 1.0克 将上述五种组分按配比加蒸馏水溶解，定溶至1000毫升。
琼脂糖 每100毫升上述溶液中含4. 0克
其制备方法包括以下步骤 (1)先将咪唑、2-氨基2_甲基1，3-丙二醇、硼酸、乙二胺四乙酸二钠按上述配比 溶入蒸馏水中，充分溶解，再加入十二烷基硫酸钠，配制成凝胶缓冲液；再按上述相应的配 比放入琼脂糖搅拌，将盛放上述混合溶液的溶器放在水浴锅内加热，保湿保温，待琼脂糖全 部溶解后保持在70°C 8(TC恒温。 (2)把模具下玻璃平板、亲水塑料板和硬塑料模板筐对齐叠放在恒温加热器上，温 度保持在40°C 50°C。 (3)用移液管定量吸取琼脂糖胶注入模板筐内，覆盖预制加样槽模板(注意不要 有气泡)和上玻璃平板。 (4)把已注入琼脂糖胶的模具从恒温加热器上水平移出，慢慢冷却凝成半干状态 后，打开模具，取出铺好的琼脂糖凝胶板放在铝塑内密封保存备用。 非浓縮尿蛋白电泳琼脂糖凝胶板，一般为长方形，厚度在0. 8 2. 0毫米，在上样 位置设有5个预制加样槽，每个加样槽可上样5iU。也可根据需要调节琼脂糖凝胶板的大
小、厚度和加样槽数量。 实施例2 : 如图所示所述的琼脂糖凝胶板为两层结构，底层为亲水性塑料板l，上层为琼脂 糖凝胶2。 琼脂糖胶的配方如下 咪唑(C3H4N2) 13. 6克 2-氨基2-甲基1 ， 3-丙二醇(C4HuN02) 20 . 0克 硼酸(H3B03) 58. 0克 乙二胺四乙酸二钠(CwHmNAN^H^) 0.4克 十二烷基硫酸钠(CH3-(CH2)u0S03Na) 1. 0克 将上述五种组分按配比加蒸馏水溶解，定溶至1000毫升。 琼脂糖 每100毫升上述溶液中含5. 0克 其制备方法同实施例l。 实施例3 : 如图所示所述的琼脂糖凝胶板为两层结构，底层为亲水性塑料板l，上层为琼脂 糖凝胶2。 琼脂糖胶的配方如下 咪唑(C3H4N2) 10. 8克 2-氨基2-甲基1 ， 3-丙二醇(C4HuN02) 16. 0克 硼酸(H3B03) 46 . 5克 乙二胺四乙酸二钠((^。1114^08化221120) 0. 4克
5
十二烷基硫酸钠(CH3_ (CH2) u0S03Na) 1. 0克 将上述五种组分按配比加蒸馏水溶解，定溶至1000毫升。 琼脂糖 每100毫升上述溶液中含6. 0克 其制作方法同实施例l。
权利要求
一种非浓缩尿蛋白电泳琼脂糖凝胶板，其特征在于所述的凝胶板包括有两层结构，底层为亲水性塑料板，上层为琼脂糖凝胶。
2. 根据权利要求1所述的、一种非浓縮尿蛋白电泳琼脂糖凝胶板，其特征在于所述的凝胶板厚度在0. 8 2. 0毫米。
3. 根据权利要求1所述的、一种非浓縮尿蛋白电泳琼脂糖凝胶板，其特征在于所述的琼脂糖胶的配方如下咪唑O. 15 0. 25mol/L、2-氨基2-甲基l，3-丙二醇0. 15 0. 25mol/L、硼酸0. 8 1. 500mol/L、乙二胺四乙酸二钠0. 10 0. 15mol/L、十二烷基硫酸钠2. 5 3. 5mmol/L、琼脂糖40 60g/L。
4. 一种根据权利要求1所述的非浓縮尿蛋白电泳琼脂糖凝胶板的制备方法，其特征在于按如下步骤进行(1) 先将咪唑、2-氨基2-甲基1，3-丙二醇、硼酸、乙二胺四乙酸二钠按上述配比溶入蒸馏水中，充分溶解，再加入十二烷基硫酸钠，配制成凝胶缓冲液；再按上述相应的配比放入琼脂糖搅拌，将盛放上述混合溶液的溶器放在水浴锅内加热，保湿保温，待琼脂糖全部溶解后保持在70°C 8(TC恒温；(2) 把模具下玻璃平板、亲水塑料板和硬塑料模板筐对齐叠放在恒温加热器上，温度保持在40。C 50°C ;(3) 用移液管定量吸取琼脂糖胶注入模板筐内，再覆盖预制加样槽模板和上玻璃平板。(4) 把已注入琼脂糖的模具从恒温加热器上水平移出，慢慢冷却凝成半干状态后，打开模具，取出铺好的凝胶板放在铝塑内密封保存备用。
全文摘要
本发明涉及一种尿蛋白诊断试剂，具体是涉及一种非浓缩尿蛋白电泳琼脂糖凝胶板，它是做非浓缩尿蛋白电泳分离时所使用的载体，属医疗分析试剂。所述的凝胶板包括有两层结构，底层为亲水性塑料板，上层为琼脂糖凝胶。该凝胶板用于尿蛋白电泳分型时作载体，使用方便，节省时间，分离区带清晰准确，分辨率高，重复性好，易保存。
文档编号G01N27/447GK101701933SQ20091021317
公开日2010年5月5日 申请日期2009年10月19日 优先权日2009年10月19日
发明者王冬, 王永杰 申请人:王永杰