专利名称：一种肿瘤发病风险评估试剂盒的制作方法
技术领域：
本实用新型涉及生物技术领域，具体地，本实用新型涉及一种肿瘤发病风险评估 试齐U盒。
背景技术：
与癌症发生密切相关的三大因素中，遗传因素占10% 15%。人的出生不能选 择，个体的基因一般不会改变，体内携带的家族或种族聚性癌症易感基因也不会随岁月而 脱离。现在医学已经发展到了基因时代，检测人体细胞基因信息成为现实。因此开展易感 人群基因多态性分析，可为这类人群的个体进行个性化预防，大大减少癌症发生。随着物质生活的快速改善，人们生活方式也随着发生了变化，由此引起致癌因素 升至60% 67%。如由不良生活行为引起的肥胖是多种癌症的诱发因素，可使结肠癌、乳 腺癌等癌症发生几率大大增加。癌症特别“偏爱”那些生活方式不良的富人。因此倡导适 量脂肪饮食、戒烟、适量饮酒、戒除不良个人卫生习惯、适量运动量，远离癌症。环境、水、食品污染因素占癌症发生的4% _6%。因此，预防性基因检测，改变不良 生活方式和饮食习惯，食用绿色食品保持均衡营养摄入，选择舒适卫生的居住环境，保持健 康心态，这样可将癌症拒之千里，保持健康。个人基因信息服务是一个崭新的行业，随着人类基因组计划的完成和人类基因组 密码的逐渐破译，开始在美国兴起，因此，可以通过个人基因服务，提供成熟的评估肿瘤发 病风险的试剂盒。
发明内容本实用新型的发明人为了使基因组学、基因技术更方便、快捷地应用于日常生活 提出并完成了本实用新型。本实用新型的目的是提供一种肿瘤发病风险评估试剂盒。根据本实用新型的肿瘤发病风险评估试剂盒包括1)DNA 提取卡；2)基因型分析试剂盒；3)肿瘤发病风险评估卡。根据本实用新型的试剂盒，其中，所述基因型试剂盒为白血病相关基因分析试剂 盒、膀胱癌相关基因分析试剂盒、大肠癌相关基因分析试剂盒、肺癌相关基因分析试剂盒、 肝癌相关基因分析试剂盒、甲状腺癌相关基因分析试剂盒、食管癌相关基因分析试剂盒、胃 癌相关基因分析试剂盒、胰腺癌相关基因分析试剂盒、宫颈癌相关基因分析试剂盒、卵巢癌 相关基因分析试剂盒、乳腺癌相关基因分析试剂盒、子宫内膜癌相关基因分析试剂盒、肾癌 相关基因分析试剂盒以及鼻咽癌相关基因分析试剂盒。根据本实用新型的试剂盒，其中，所述肿瘤发病风险评估卡为白血病发病风险评 估卡、膀胱癌发病风险评估卡、大肠癌发病风险评估卡、肺癌发病风险评估卡、肝癌发病风险评估卡、甲状腺癌发病风险评估卡、食管癌发病风险评估卡、胃癌发病风险评估卡、胰腺 癌发病风险评估卡、宫颈癌发病风险评估卡、卵巢癌发病风险评估卡、乳腺癌发病风险评估 卡、子宫内膜癌发病风险评估卡、肾癌发病风险评估卡以及鼻咽癌发病风险评估卡。本实用新型的试剂盒能够快速评估个体肿瘤发病风险，本实用新型的试剂盒使用 方便、快捷，成本低，且环保。
图1为据本实用新型的试剂盒的结构图，1 盒体；2 基因分析试剂盒；3 :DNA提取 卡；4 肿瘤发病风险评估卡；5 拭子。
具体实施方式
实施例1以肺癌为例1.采集检测标本如图1所示，按说明用DNA提取卡3采集标本，采集完毕，放入标本采集袋中密封， 保证样本不会污染。采用试剂提取标本基因组DNA。 按比例混合PCR预混液、Taq酶、引物\探针和标本DNA模板，进行检测。1)组装标本DNA提取卡，每个DNA提取卡包括，检测袋(盒)、条形码(3个)、标本 采集说明书\知情同意书、标本采集袋、拭子。2)按标本采集说明书的指示，采集标本。3)应用商用试剂盒提取标本基因组DNA。2.确定候选基因rsl042522, rsl7576, rs2032582, rs2250889, rs664143.3.设计特异性的探针和引物从数据库获取上述5个基因的序列，应用生物信息软件分析技术，针对每个SNP 位点分别设计上游引物、下游引物以及特异性的野生型Taqman-MGB、突变型Taqman-MGB探 针，见表1。表1. SNP位点检测的特异性探针和引物序列。
4.合成探针和引物按表1中列出的序列合成探针和引物，其中野生型探针的5'端带有VIC标记，3' 端带有NFQ标记，并加MGB修饰；突变型探针的5'端带有FAM标记，3'端带有NFQ标记， 并加MGB修饰。5. Real-time PCR 扩增使用基因分析试剂盒2 (Real-time PCR试剂盒)分析基因型，每人份PCR反应体 系(50ul)包括，正、反向引物(10pmol/ul)各l.Oul ；野生型和突变型探针(15pmol/ul)各 1. 5ul ；dNTPS(lOmM) 1. Oul ； 10XPCR 反应缓冲液 5ul ；MgCL2(10mM) 10ul ；ddH2021. 5ul ；DNA 模板 5ul ；Taq 酶(lU/ul)2ul ；UNG 酶(lU/ul)0. 5ul。每份样本反应两管中加入5ul样本DNA模板，混勻、离心，然后在ABI7300型荧光 PCR仪进行检测，反应参数如下PCR反应参数设置预变性95 °C，10分钟；变性92 °C，15秒；延伸/退火59 °C，90秒。6.基因型判读应用基因分型分析软件，根据设定的荧光阈值判断基因型当样本检测图谱显示l)rsl7576有效的扩增曲线的荧光信号为A，则样本为纯合野生型AA ；有效的扩增曲线的荧光信号为G，则样本为纯合突变型GG;有效的扩增曲线的荧光信号为A、G，则样本为杂合型AG ；[0044]2)rs2032582有效的扩增曲线的荧光信号为G，则样本为纯合野生型GG;有效的扩增曲线的荧光信号为T，则样本为纯合突变型TT ；有效的扩增曲线的荧光信号为G、T，则样本为杂合型GT ；3)rs2250889有效的扩增曲线的荧光信号为C，则样本为纯合野生型CC ；有效的扩增曲线的荧光信号为G，则样本为纯合突变型GG;有效的扩增曲线的荧光信号为C、G，则样本为杂合型CG;4)rs664143有效的扩增曲线的荧光信号为C，则样本为纯合野生型CC ；有效的扩增曲线的荧光信号为T，则样本为纯合突变型TT ；有效的扩增曲线的荧光信号为T、C，则样本为杂合型CT ；7.结果分析使用肿瘤发病风险评估卡分析。样本的基因分析结果如下rsl7576基因型AG，患肺癌风险0. 88。rs2032582基因型GT，患肺癌风险2. 6rs2250889基因型CG，患肺癌风险0. 971rs6641基因型CT，患肺癌风险0. 843。综合基因型结果，比普通人患肺癌的风险高2. 05倍。根据人群的肺癌平均风险， 一生中患肺癌的风险14. 94%。实施例2以胰腺癌为例1.采集检测标本同实施例1。2.确定候选基因rsl03803.设计特异性的探针和引物从数据库获取上述2个基因的序列，应用生物信息软件分析技术，针对每个SNP 位点分别设计上游引物、下游引物以及特异性的野生型Taqman-MGB、突变型Taqman-MGB探 针，见表1。表1. SNP位点检测的特异性探针和引物序列。
6 4.合成探针和引物同实例1。5. Real-time PCR 扩增同实例1。6.基因型判读应用基因分型分析软件，根据设定的荧光阈值判断基因型。当样本检测图谱显示l)rsl0380有效的扩增曲线的荧光信号为C，则样本为纯合野生型CC ；有效的扩增曲线的荧光信号为T，则样本为纯合突变型TT ；有效的扩增曲线的荧光信号为C、T，则样本为杂合型CT ；7.结果分析使用肿瘤发病风险评估卡分析。样本的基因分析结果如下rsl0380基因型CC，患肺癌风险0. 84。综合基因型结果，比普通人患肺癌的风险高0. 84倍。根据人群的胰腺癌平均风 险，一生中患胰腺癌的风险1.09%。实施例3以乳腺癌为例1.采集检测标本如图1所示，按说明用DNA提取卡3采集标本，采集完毕，放入标本采集袋中密封， 保证样本不会污染。采用试剂提取标本基因组DNA。按比例混合PCR预混液、Taq酶、引物\探针和标本DNA模板，进行检测。1)组装标本DNA提取卡，每个DNA提取卡包括，检测袋(盒)、条形码(3个)、标本 采集说明书\知情同意书、标本采集袋、FTA血卡。2)按标本采集说明书的指示，采集标本。3)应用商用试剂盒提取标本基因组DNA。2.确定候选基因rsl219648、rs38036623.设计特异性的探针和引物从数据库获取上述2个基因的序列，应用生物信息软件分析技术，针对每个SNP位点分别设计上游引物、下游引物以及特异性的野生型Taqman-MGB、突变型Taqman-MGB探 针，见表1。表1. SNP位点检测的特异性探针和引物序列。 4.合成探针和引物同实例1。5. Real-time PCR 扩增同实例1。6.基因型判读应用基因分型分析软件，根据设定的荧光阈值判断基因型。当样本检测图谱显示l)rsl219648有效的扩增曲线的荧光信号为A，则样本为纯合野生型AA ；有效的扩增曲线的荧光信号为G，则样本为纯合突变型GG;有效的扩增曲线的荧光信号为A、G，则样本为杂合型AG ；2)rs3803662有效的扩增曲线的荧光信号为C，则样本为纯合野生型CC ；有效的扩增曲线的荧光信号为T，则样本为纯合突变型TT;有效的扩增曲线的荧光信号为C、T，则样本为杂合型CT;7.结果分析使用肿瘤发病风险评估卡分析样本的基因分析结果如下rsl219648基因型AG，患肺癌风险1. 20。rs3803662基因型TT，患肺癌风险1. 64。综合基因型结果，比普通人患肺癌的风险高1. 97倍。根据人群的乳腺癌平均风 险，一生中患肺癌的风险11.62%。
权利要求一种肿瘤发病风险评估试剂盒，其特征在于，所述试剂盒包括1)DNA提取卡；2)基因型分析试剂盒；3)肿瘤发病风险评估卡。
2.根据权利要求1所述的试剂盒，其特征在于，所述基因型试剂盒为白血病相关基因 分析试剂盒、膀胱癌相关基因分析试剂盒、大肠癌相关基因分析试剂盒、肺癌相关基因分析 试剂盒、肝癌相关基因分析试剂盒、甲状腺癌相关基因分析试剂盒、食管癌相关基因分析试 剂盒、胃癌相关基因分析试剂盒、胰腺癌相关基因分析试剂盒、宫颈癌相关基因分析试剂 盒、卵巢癌相关基因分析试剂盒、乳腺癌相关基因分析试剂盒、子宫内膜癌相关基因分析试 剂盒、肾癌相关基因分析试剂盒以及鼻咽癌相关基因分析试剂盒。
3.根据权利要求1所述的试剂盒，其特征在于，所述肿瘤发病风险评估卡为白血病发 病风险评估卡、膀胱癌发病风险评估卡、大肠癌发病风险评估卡、肺癌发病风险评估卡、肝 癌发病风险评估卡、甲状腺癌发病风险评估卡、食管癌发病风险评估卡、胃癌发病风险评估 卡、胰腺癌发病风险评估卡、宫颈癌发病风险评估卡、卵巢癌发病风险评估卡、乳腺癌发病 风险评估卡、子宫内膜癌发病风险评估卡、肾癌发病风险评估卡以及鼻咽癌发病风险评估 卡。
专利摘要本实用新型涉及生物技术领域，具体地，本实用新型涉及一种肿瘤发病风险评估试剂盒。本实用新型的人体健康指标判断试剂盒包括1)DNA提取卡；2)基因型分析试剂盒；3)肿瘤发病风险评估卡。本实用新型的试剂盒能够快速评估个体肿瘤发病风险，本实用新型的试剂盒使用方便、快捷，成本低，且环保。
文档编号G01N33/574GK201600370SQ20092027775
公开日2010年10月6日 申请日期2009年12月8日 优先权日2009年12月8日
发明者周慧君, 苏莉 申请人:益基宏(北京)生物科技有限公司