专利名称：作为心脏疾病标志物的嗜苯胺蓝颗粒蛋白酶的制作方法
作为心脏疾病标志物的嗜苯胺蓝颗粒蛋白酶本发明涉及用于检测和/或测定来自多形核嗜中性粒细胞的嗜苯胺蓝颗粒的蛋白酶或其与内源抑制剂的复合物的分析方法，用于患有心脏疾病或病症的患者的风险分层和/或预后和/或治疗控制和/或监测。动脉粥样硬化与血管壁的炎性变化有关(Libby等，Circulation 2005,111, 3481-3488)，包括巨噬细胞和淋巴细胞浸润。在嗜中性粒细胞计数与急性冠脉综合征的未来风险之间存在关联(Friedman等，N. Engl. J. Med. 1974 ；290,1275-8) 最近的证据证实了急性冠脉综合征中嗜中性粒细胞活性的升高(Naruko等，Circulation 2002，106， 2894-900 ；Buffon 等，N. Engl. J. Med. 2002，347，5-12)。髓过氧化物酶(MPO)是存在于嗜中性粒细胞的嗜苯胺蓝颗粒中的一种酶，其可以通过金属蛋白酶的活化刺激斑块的去稳定作用(Fu等，J Biol Chem 2001，276，41279-87)。 在冠状动脉疾病中MPO的血浆水平升高Oiang等，JAMA 2001，286，2136-42)，并预测患者出现胸痛(Brennan 等，N Engl J Med 2003，349，1595-604)和急性冠脉综合征(Baldus 等，Circulation 2003，108，1440-5)的结果。蛋白酶3(冊3)与其他丝氨酸蛋白酶例如弹性蛋白酶和组织蛋白酶G—起，是嗜中性粒细胞嗜苯胺蓝颗粒的另一种主要组分(Wmm 等，Nat Rev Immunol 2006,6,541-50) 嗜中性粒细胞对强烈刺激做出响应释放出嗜苯胺蓝颗粒，而刺激较弱时释放出分泌颗粒(其也含有PR3 (Witko-Sarsat等，Blood 1999， 94,2487-96))。PR3 也可以表达在内皮细胞上(Mayet 等，Blood 1993，82，1221-9)。嗜中性粒细胞丝氨酸蛋白酶可以降解细胞外基质；此外PR3具有其他有害效应，其可能与在韦格纳(Wegener’ s)肉芽肿中脉管炎的发病中的作用相关。这些包括通过内皮细胞上的胱天蛋白酶(caspase)样活性诱导凋亡(Pendergraft 等，Kidney Int. 2004，Jan,65(1), 75-84)，从TNF- α的初生膜结合前体形式释放活化的TNF- α (Robache-Gallea等，J Biol Chem. 1995，270，23688-92 ；Coeshott 等，PNAS 1999，96，6261-6)，活化前炎性介导物白介素-1β (Coeshott 等，PNAS 1999,96,6261-6)和白介素-18 (Sugawara 等，J Immunol. 2001 Dec 1,167(11) ,6568-75)，以及从血管紧张肽原产生血管紧张肽I和II (Ramaha等，Arch Biochem Biophys. 2002，397，77—83)。PR3通过与α-1-抗胰蛋白酶(丝氨酸蛋白酶抑制剂Al)的不可逆结合而快速失活(Baslund 等，J Immunol Methods 1994，175，215-25 ;Duranton 等，Am J Respir Cell Mol Biol. 2003，29，57-61)，其中丝氨酸蛋白酶与丝氨酸蛋白酶抑制剂(serpin)的反应性中心环反应，产生共价结合的中间体，导致蛋白酶的扭曲和失活(Stratikos等，PNAS, 1997，94，453-8)。因此，血浆中基本上不存在游离冊3，它主要作为冊3_丝氨酸蛋白酶抑制剂 Al 复合物存在(Baslund 等，J Immunol Methods 1994，175，215-25)。循环中PR3的来源可能部分来自于脱颗粒的活化的嗜中性粒细胞，其存在于嗜苯胺蓝颗粒和分泌颗粒两者中。已知在梗塞形成后，嗜中性粒细胞浸润心肌。可选地或此外， PR3可以从内皮细胞(Mayet等，Blood 1993，82，1221-9)或肺实质细胞(Brockmann等， Arthritis Res. 2002，4，220-5)分泌。已经证实，正常肺中的肺细胞表达PR3 (Brockmann 等，Arthritis Res. 2002，4，220-5)，尽管在韦格纳肉芽肿中表达被极大上调。活性PR3在
4血浆中被丝氨酸蛋白酶抑制剂Al和α 2-巨球蛋白快速失活(Pham等，Nat Rev Immunol 2006，6，541-50)。在AMI后的情况中，通过释放活性形式的TNF- α、白介素-1 β、白介素-18 (Robache-Gallea 等，J Biol Chem.1995，270，23688-92 ;Coeshott 等，PNAS 1999， 96，6261-6 ；Sugawara 等，J Immunol. 2001 Dec 1，167 (11)，6568-75)和血管紧张肽 (Ramaha 等，Arch Biochem Biophys. 2002,397,77-83)，已经显示出 PR3 对细胞的破坏性作用，例如其前凋亡活性(Pendergraft等，2004 Jan, 65 (1), 75-84)及其前炎性效应。这些细胞因子可能与尽管使用了肾素_血管紧张肽系统的抑制剂的疗法但仍然发生的AMI后心力衰竭的发生特别相关。这种丝氨酸蛋白酶在心力衰竭的发生中的牵连正在讨论之中。例如，初步证据显示，一种丝氨酸蛋白酶抑制剂elafin能够在心脏移植的实验模型中减少血管和心肌损伤(Cowan 等，J Clin Invest. 1996，97，2452-68)。根据本发明，令人吃惊地发现来自多形核嗜中性粒细胞的嗜苯胺蓝颗粒的蛋白酶或其与内源抑制剂的复合物，可以在心脏疾病或病症中用作生物标志物。因此，本发明涉及检测和/或测定作为心脏疾病中的标志物 的来自多形核嗜中性粒细胞的嗜苯胺蓝颗粒的蛋白酶或其与内源抑制剂的复合物的水平的分析方法。通过该分析方法测量的被分析物水平，可以独立于已建立的常规风险因子以及其他生物标志物进行评估。但是，这样的常规风险因子和/或其他生物标志物可以与本发明的分析法或方法或应用组合使用。标志物提供了互补的、独立的预测，并且这种高风险患者的鉴定可以改进他们的后续管理。这种分析方法为预测不利后果例如死亡和心力衰竭提供信息，这些信息可以独立地或与已建立的常规风险因子例如肾功能和临床人口统计信息组合应用。这种来自多形核嗜中性粒细胞的嗜苯胺蓝颗粒的蛋白酶或其与内源抑制剂的复合物的测量，单独地或与已承认的预后标志物例如B型利尿钠肽或其前体(N-末端B型利尿钠肽原或NTproBNP)、氨基末端ANP原、肾上腺髓质素原或其片段、内皮素原或其片段、血管加压素原或其片段一起使用，提供了关于AMI后心力衰竭和死亡的预后信息。本发明的一个实施方案是对患有心脏疾病或病症的患者进行风险分层和/或预后和/或治疗控制和/或监测的方法，所述方法包含a)提供来自所述患有心脏疾病或病症的患者的样品，b)测定所述样品中来自多形核嗜中性粒细胞的嗜苯胺蓝颗粒的蛋白酶或其与内源抑制剂的复合物的水平，c)将所述来自多形核嗜中性粒细胞的嗜苯胺蓝颗粒的蛋白酶或其与内源抑制剂的复合物的水平，归因于所述患者的疾病或病症的预后或严重程度或不利后果的风险。在本发明的方法的优选实施方案中，在步骤b)中测定选自弹性蛋白酶、组织蛋白酶G、蛋白酶3(Pr3)的蛋白酶或其与内源抑制剂的复合物的水平，并在步骤c)中将其归因于所述患者的疾病或病症的预后或严重程度或不利后果的风险。在本发明的更优选实施方案中，在步骤b)中测定蛋白酶3或蛋白酶3/丝氨酸蛋白酶抑制剂Al复合物的水平，并在步骤c)中将其归因于所述患者的疾病或病症的预后或严重程度或不利后果的风险。在本发明的方法中，更优选情况下，在步骤b)中测定蛋白酶3/丝氨酸蛋白酶抑制剂Al复合物的水平，并在步骤c)中将其归因于所述患者的疾病或病症的预后或严重程度或不利后果的风险。 在本发明的方法的另一个优选实施方案中，心脏疾病或病症选自急性冠脉综合征，包括不稳定心绞痛(UA)、非ST段升高心肌梗塞(NSTEMI)或ST段升高心肌梗塞 (STEMI)。在本发明中，心脏疾病或病症优选为急性冠脉综合征。更优选情况下，心脏疾病或病症是急性心肌梗塞。在本发明的上下文中使用的诊断分析方法可以是在诊断学领域中应用的任何类型的分析方法，包括但不限于基于酶反应、发光，特别是荧光或放射化学试剂的分析方法。 优选的检测方法包括床旁检查(point-of-care-test)、放射免疫分析法、化学发光和荧光免疫分析法、免疫印迹分析法、酶联免疫分析法(ELISA)、基于luminex珠子的阵列和蛋白质微阵列分析法。分析方法的类型还可以是基于微量滴定板的、基于芯片的、基于珠子的， 其中生物标志物蛋白可以附着于表面上或在溶液中。分析法可以是均相或非均相分析法、 夹心分析法、竞争和非竞争分析法(《免疫分析法手册》(The Immunoassay Handbook) ,David Wild 主编，Elsevier LTD, Oxford ；第三版(2005 年 5 月)，ISBN-13 978-0080445267 ； Hultschig C 等，Curr Opin Chem Biol 2006 Feb ； 10(1) :4_10· PMID 16376134)。在本发明的方法的另一个优选实施方案中，在步骤b)中使用诊断分析法测定所述样品中所述蛋白酶或其与内源抑制剂的复合物的水平。在本发明的方法的另一个优选实施方案中，通过使用两种捕获分子检测来自多形核嗜中性粒细胞的嗜苯胺蓝颗粒的蛋白酶或其与内源抑制剂的复合物，其中两种捕获分子可以顺序或同时添加到样品中。本发明的方法的非限制性的实例在步骤b)中，还包含步骤bl)，将所述样品加入到包含一种或多种针对所述蛋白酶或所述内源抑制剂或所述蛋白酶与内源抑制剂的复合物的第一捕获分子的分析中，以及b2)向所述分析中加入一种或多种针对所述蛋白酶或所述内源抑制剂或所述蛋白酶与内源抑制剂的复合物的第二捕获分子，其中第一捕获分子和第二捕获分子可以不都针对抑制剂，其中步骤bl)和b2)可以顺序或同时进行。在特别优选实施方案中，分析包含作为分散相存在于液体反应混合物中的两种捕获分子，在更优选为抗体，其中第一标记组分附着于第一捕获分子上，其中所述第一标记组分是基于荧光或化学发光_淬灭或扩增的标记系统的一部分，并且所述标记系统的第二标记组分附着于第二捕获分子上，使得当两种捕获分子与所述蛋白酶或所述内源抑制剂或所述蛋白酶与内源抑制剂的复合物结合后，产生可测量的信号，允许检测在包含样品的溶液中形成的夹心复合物。更优选情况下，所述标记系统包含稀土穴状化合物或稀土螯合物与荧光染料或化学发光染料、特别是花青素类型的染料的组合。最优选情况下，所述标记系统是在BRAHMS AG的Kryptor 技术中应用的系统。在本发明的方法的另一个更优选实施方案中，步骤C)包含cl)测量对应于结合的蛋白酶或结合的其与内源抑制剂的复合物的量的信号，c2)将步骤Cl)的所述信号强度与预先记录的数据进行比较，其中所述预先记录的数据将蛋白酶或其与内源抑制剂的复合物的水平与疾病或病症的预后或严重程度或不利后果的风险相关联。在本发明的方法的另一个更优选实施方案中，通过选自下列的方法将蛋白酶或其与内源抑制剂的复合物的水平与疾病或病症的预后或严重程度或不利后果的风险相关联 根据整套预定样品中蛋白酶或其与内源抑制剂的复合物的水平的中值进行关联；根据整套预定样品中蛋白酶或其与内源抑制剂的复合物的水平的分位数(例如四分位数或百分位数)进行关联；或使用包含蛋白酶或其与内源抑制剂的复合物的水平的数学模型、优选为 Cox回归进行关联。在本发明的方法的另一个优选实施方案中，所述样品是血浆样品、血清样品、血液样品或其级份、淋巴液样品、尿液样品或任何上面提到的样品的提取物。在本发明的一个具体实施方案中，所述信号由与所述第二捕获分子结合的标记物产生。在本发明的另一个具体实施方案中，所述信号由与第三捕获分子结合的标记物产生，其中所述第三捕获分子特异性针对所述第二捕获分子，并且其中所述第三捕获分子在步骤Cl)之前添加到所述分析中。在本发明的方法中，第三捕获分子可以在第二捕获分子之后或与第二捕获分子同时添加。在本发明的方法的另一个优选实施方案中，还附加地测定与患有心脏疾病或病症的患者的风险分层和/或预后和/或治疗控制和/或监测相关或有用的一种或多种其他标志物或临床参数的水平。在本发明的方法的另一个更优选实施方案中，临床参数是选自下列的参数年龄， 性别，既往病史，特别是心肌梗塞、心绞痛、高血压、糖尿病、高胆固醇血症、ST上升AMI，体重指数，遗传易感性/家族史，种族背景，影响所述倾向的习惯，例如吸烟、饮酒、饮食，或住院治疗后的参数，例如Killip分级高于1或住院后的溶血栓药物治疗。在本发明的方法的另一个更优选实施方案中，其他标志物选自proBNP或其包括 BNP和NT-proBNP的至少12个氨基酸的片段、proANP或其包括NT-proANP和MR-proANP 的至少12个氨基酸的片段、肾上腺髓质素原或其包括肾上腺髓质素、PAMP和MR-proADM 的至少12个氨基酸的片段、内皮素原或其包括内皮素-1、大内皮素-l、CT-proET-l和 NT-proET-Ι的至少12个氨基酸的片段、血管加压素原或其包括血管加压素、和肽素和神经垂体素2的至少8个氨基酸的片段、髓过氧化物酶、肌钙蛋白、FABP、C反应蛋白、降钙素原、 白介素-6、ST-2、⑶F-15、缺血修饰性白蛋白，或其片段。在本发明的方法的另一个更优选实施方案中，其他标志物是NT-proBNP或其至少 12个氨基酸的片段。本发明的另一个实施方案是使用包含至少一种针对来自多形核嗜中性粒细胞的嗜苯胺蓝颗粒的蛋白酶和/或其与内源抑制剂的复合物的捕获分子的试剂盒，检测和/或测定所述样品中所述来自多形核嗜中性粒细胞的嗜苯胺蓝颗粒的蛋白酶和/或其与内源抑制剂的复合物的水平，用于患有心脏疾病或病症的患者的风险分层和/或治疗控制和/ 或监测和/或预后。优选情况下，本发明的试剂盒包含一种或多种针对来自多形核嗜中性粒细胞的嗜苯胺蓝颗粒的蛋白酶或针对所述蛋白酶的内源抑制剂或针对所述蛋白酶与所述内源抑制剂的复合物的第一捕获分子，并包含一种或多种针对来自多形核嗜中性粒细胞的嗜苯胺蓝
7颗粒的蛋白酶或针对所述蛋白酶的内源抑制剂或针对所述蛋白酶与所述内源抑制剂的复合物的第二捕获分子。更优选情况下，所述第一捕获分子和所述第二捕获分子可以不都针对所述内源抑制剂。更优选情况下，本发明的试剂盒包含分别针对选自弹性蛋白酶、组织蛋白酶G、蛋白酶3( 的蛋白酶和针对所述蛋白酶的内源抑制剂第一和第二捕获分子。 更优选情况下，本发明的试剂盒包含分别针对蛋白酶3和丝氨酸蛋白酶抑制剂Al 的捕获分子。更优选情况下，本发明的试剂盒包含针对蛋白酶3与丝氨酸蛋白酶抑制剂Al的复合物的捕获分子。在本发明的试剂盒的应用的另一个具体的优选实施方案中，确定疾病或病症的预后或严重程度或不利后果的风险。在本发明的方法或试剂盒的应用的具体优选实施方案中，所述不利后果是死亡或心力衰竭。优选情况下，本发明的试剂盒的应用按照上面本发明方法的实施方案中所述进行。在本发明的上下文中，捕获分子可以选自核酸分子、糖类分子、PNA分子、蛋白、抗体、肽或糖蛋白。优选情况下，捕获分子是抗体，包括其对靶具有足够特异性的片段，并包括重组抗体以及所述抗体的化学和/或生物化学修饰的衍生物或其源自于变体链的具有至少12个氨基酸长度的片段。在本发明的情况中，花青素类型的染料、也称为花青染料，可以是通用化学结构为Ii2N+ = CH(CH = CH)n-NR2的也称为开链花青素的链花青素(str印tocyanine)、通用化学结构为芳基=N+ = CH(CH = CH)n-NR2的半花青素(hemicyanine)或通用化学结构为芳基=N+ = CH (CH = CH)n-N =芳基的闭链花青素，其中R独立地表示可以被一个或多个取代基取代的烷基，并且其中芳基独立地表示可以被一个或多个取代基取代的芳基或杂芳基。因为这样的花青染料是公知的，并且许多衍生物可以商购，因此本领域技术人员了解对于给定目的选择何种公知的染料。因此，在本说明书中将不给出这些染料的详细描述； 更详细的描述，包括花青染料的实例，可以在http //en. wikipedia. orR/wiki/Cyanine和 Kirk-Othmer 的《化学技术百禾斗全书》(Encyclopedia of chemical technology)第四版， J. I. Kroschwitz 执行主编，Μ. Howe-Grant 主编，John Wiley & Sons, 1993，vol. 7，782-809 页中发现。在本发明中使用的花青染料的具体实例是Cy 3和Cy 5。在本发明的上下文中，信号是位于用来检测响应的装置的灵敏度范围内的可检测响应的存在或不存在，其具体来说可归因于被分析物与捕获探针或探针之间的复合物的存在。所述信号可归因于在被分析物检测方法中常用的各种类型的效应，例如电磁辐射的吸收、发射或淬灭，其中电磁辐射可以是荧光、发光、可见光、UV和IR，或归因于放射活性、磁性或核或电子自旋。在本发明中，上面提到的被分析物是来自多形核嗜中性粒细胞的嗜苯胺蓝颗粒的蛋白酶或其与内源抑制剂的复合物。在本发明中，术语风险分层是指为个体经历某些不利事件的概率赋值。在本发明中，术语预后是指预测对象(例如患者)的医学状况将如何发展。这可以包括为所述对象估计恢复的机会或不利后果的机会。
在本发明中，术语监测是指通过在各个不同时间点测量对象的医学状况的某个诊断标志物或多种标志物的水平，来观察所述对象的医学状况的状态或发展。在本发明中，术语治疗控制是指通过在各个不同时间点、优选为治疗之前和之后测量对象的医学状况的某个诊断标志物或多种标志物的水平，将某种形式的治疗例如药物给药归因于所述对象医学状况的状态或发展。通过这种方式，可以确定所述治疗是否足以治疗所述医学状况，或者疗法是否需要做出调整，例如改变药物的剂量，或是否需要用另一种形式的治疗，例如另一种药物或另一种类型的治疗作用来代替。
图1 显示了在通过丝氨酸蛋白酶抑制剂Al分层的患者中时间对不利事件 (死亡或心力衰竭)的Kaplan-Meier分析。图2 显示了在根据是否冊3_丝氨酸蛋白酶抑制剂Al和NTproBNP两者都低于它们相应的中值、任一标志物高于中值或两种标志物都高于中值进行分层的患者中，时间对不利事件(死亡或心力衰竭)的Kaplan-Meier分析。图3到7显示了患者数据的逻辑回归分析的结果图3a 第4天时NTproBNP和PR3作为死亡的预测因子图3b 第4天时NTproBNP和PR3作为死亡和心力衰竭的预测因子图4a =MRproANP与PR3预测死亡终点图4b =MRproANP与PR3预测死亡和心力衰竭终点图5a =MRproADM与PR3预测死亡终点图5b =MRproADM与PR3预测死亡和心力衰竭终点图6a =C-末端proET与PR3预测死亡终点图6b =C-末端proET与PR3预测死亡和心力衰竭终点图7a 和肽素与PR3预测死亡终点图7b 和肽素与PR3预测死亡和心力衰竭终点图8到12显示了患者数据的Cox比例风险分析的结果图8a 第4天时NTproBNP和PR3作为死亡的预测因子图8b 第4天时NTproBNP和PR3作为死亡和心力衰竭的预测因子图9a =MRproANP与PR3预测死亡终点图9b =MRproANP与PR3预测死亡和心力衰竭终点
图IOa =MRproADM与PR3预测死亡终点图IOb =MRproADM与PR3预测死亡和心力衰竭终点图1 la :C-末端proET与PR3预测死亡终点图lib =C-末端proET与PR3预测死亡和心力衰竭终点图12a 和肽素与PR3预测死亡终点图12b 和肽素与PR3预测死亡和心力衰竭终点
实施例
募集了 900位患有急性心肌梗塞的连续患者。从患者获得了书面正式知情同意书，研究遵照《赫尔辛基宣言》(Declaration of Helsinki)并得到当地伦理委员会的批准。 AMI被定义为出现三个标准判据中的至少两个，即适当的症状、梗塞的急性ECG变化(ST上升或下降，新的左束分支阻塞)以及肌钙蛋白T升高到超过我们人群的99百分位数。排除标准判据包括恶性肿瘤或最近的外科手术(在一个月内)。表1 研究中患者的特征。值是平均值(SD)或数量(％ )
权利要求
1.一种对患有心脏疾病或病症的患者进行风险分层和/或预后和/或治疗控制和/或监测的方法，所述方法包含a)提供来自所述患有心脏疾病或病症的患者的样品，b)测定所述样品中来自多形核嗜中性粒细胞的嗜苯胺蓝颗粒的蛋白酶或所述蛋白酶与内源抑制剂的复合物的水平，c)将所述来自多形核嗜中性粒细胞的嗜苯胺蓝颗粒的蛋白酶或所述蛋白酶与内源抑制剂的复合物的水平，归因于所述患者的疾病或病症的预后或严重程度或不利后果的风险。
2.权利要求1的方法，其中在步骤b)中测定选自弹性蛋白酶、组织蛋白酶G、蛋白酶 3(Pr3)的蛋白酶或所述蛋白酶与内源抑制剂的复合物的水平，并在步骤c)中将其归因于所述患者的疾病或病症的预后或严重程度或不利后果的风险。
3.权利要求1的方法，其中在步骤b)中测定蛋白酶3或蛋白酶3/丝氨酸蛋白酶抑制剂Al复合物的水平，并在步骤c)中将其归因于所述患者的疾病或病症的预后或严重程度或不利后果的风险。
4.前述权利要求任一项的方法，其中心脏疾病或病症选自急性冠脉综合征，所述急性冠脉综合征包括不稳定心绞痛(UA)、非ST段升高心肌梗塞(NSTEMI)或ST段升高心肌梗塞 (STEMI)。
5.前述权利要求任一项的方法，其中在步骤b)中使用诊断分析法测定所述样品中所述蛋白酶或所述蛋白酶与内源抑制剂的复合物的水平。
6.前述权利要求任一项的方法，其中通过使用两种捕获分子检测来自多形核嗜中性粒细胞的嗜苯胺蓝颗粒的蛋白酶或所述蛋白酶与内源抑制剂的复合物，其中两种捕获分子可以顺序或同时添加到样品中。
7.前述权利要求任一项的方法，其中步骤c)包含cl)测量对应于结合的蛋白酶或结合的蛋白酶与内源抑制剂的复合物的量的信号，c2)将步骤cl)的所述信号强度与预先记录的数据进行比较，其中所述预先记录的数据将蛋白酶或所述蛋白酶与内源抑制剂的复合物的水平与疾病或病症的预后或严重程度或不利后果的风险相关联。
8.权利要求7的方法，其中通过选自下列的方法将蛋白酶或所述蛋白酶与内源抑制剂的复合物的水平与疾病或病症的预后或严重程度或不利后果的风险相关联根据整套预定样品中蛋白酶或所述蛋白酶与内源抑制剂的复合物的水平的中值进行关联；根据整套预定样品中蛋白酶或所述蛋白酶与内源抑制剂的复合物的水平的分位数(例如四分位数或百分位数)进行关联；或使用包含蛋白酶或所述蛋白酶与内源抑制剂的复合物的水平的数学模型、优选为Cox回归进行关联。
9.前述权利要求任一项的方法，其中所述样品是血浆样品、血清样品、血液样品或其级份、淋巴液样品、尿液样品或任何上面提到的样品的提取物。
10.前述权利要求任一项的方法，其中附加地测定与患有心脏疾病或病症的患者的风险分层和/或预后和/或治疗控制和/或监测相关或有用的一种或多种其他标志物或临床参数的水平。
11.权利要求10的方法，其中临床参数是选自下列的参数年龄，性别，既往病史特别是心肌梗塞、心绞痛、高血压、糖尿病、高胆固醇血症、ST上升AMI的病史，体重指数，遗传易感性/家族史，种族背景，影响所述倾向的习惯例如吸烟、饮酒、饮食，或住院治疗后的参数例如Killip分级> 1或住院后的溶血栓药物治疗。
12.权利要求10或11的方法，其中其他标志物选自proBNP或其包括BNP和NT-proBNP 的至少12个氨基酸的片段、proANP或其包括NT-proANP和MR-proANP的至少12个氨基酸的片段、肾上腺髓质素原或其包括肾上腺髓质素、PAMP和MR-proADM的至少12个氨基酸的片段、内皮素原或其包括内皮素-1、大内皮素-1、CT-proET-Ι和NT-proET-1的至少12个氨基酸的片段、血管加压素原或其包括血管加压素、和肽素和神经垂体素2的至少8个氨基酸的片段、髓过氧化物酶、肌钙蛋白、FABP、C反应蛋白、降钙素原、白介素-6、ST-2、⑶F-15、 缺血修饰性白蛋白，或其片段。
13.权利要求12的方法，其中其他标志物是NT-proBNP或其至少12个氨基酸的片段。
14.试剂盒在患有心脏疾病或病症的患者的风险分层和/或治疗控制和/或监测和/ 或预后中的应用，所述试剂盒包含至少一种针对来自多形核嗜中性粒细胞的嗜苯胺蓝颗粒的蛋白酶和/或所述蛋白酶与内源抑制剂的复合物的捕获分子，用于检测和/或测定所述样品中所述来自多形核嗜中性粒细胞的嗜苯胺蓝颗粒的蛋白酶和/或所述蛋白酶与内源抑制剂的复合物的水平。
15.权利要求14的试剂盒的应用，其中确定疾病或病症的预后或严重程度或不利后果的风险。
16.权利要求15的试剂盒的应用或权利要求1到11任一项的方法，其中所述不利后果是死亡或心力衰竭。
17.来自多形核嗜中性粒细胞的嗜苯胺蓝颗粒的蛋白酶或所述蛋白酶与内源抑制剂的复合物作为心脏疾病或病症的生物标志物的应用。
全文摘要
本发明涉及用于检测和/或测定来自多形核嗜中性粒细胞的嗜苯胺蓝颗粒的蛋白酶或其与内源抑制剂的复合物的分析方法，用于患有心脏疾病或病症的患者的风险分层和/或预后和/或治疗控制和/或监测。
文档编号G01N33/573GK102159953SQ200980137041
公开日2011年8月17日 申请日期2009年7月3日 优先权日2008年7月23日
发明者安德烈亚斯·贝格曼, 尼尔斯·莫根塔勒, 恩格·梁·洛克, 约阿希姆·斯特鲁克 申请人:B.R.A.H.M.S有限公司