专利名称：参与昆虫电压-门控钾通道活性的调节害虫的生理状况的试剂的制作方法
技术领域：
本发明涉及调节害虫的生理状况、参与昆虫电压-门控钾通道活性的试剂等。
背景技术：
电压-门控钾通道是对膜电位应答从而选择性渗透钾离子并普遍存在于动物、植物、和微生物中的膜蛋白，并包括多种分子种类。根据结构和生理学功能特征，将电压-门控钾通道分类为许多家族，即Shaker型，EAG(ether-a-go-go)型，KvLQT等等(Gutman等， Pharmacol. Reviews (药理学综述)，55 (4) :583-586, 2003)。Seizure是人ERG(hERG)的昆虫同源物并是电压-门控钾通道EAG家族的成员。 EAG家族由三个亚家族EAG (ether-a-go-go)，ERG (EAG相关基因)和ELK (EAG样基因)组成。根据国际基础和临床药理学协会(IUPHAR)的命名法EAG是KvlO. X，ERG是Kvl 1.x且 ELK是Κν12. χ。人EAG家族也称为KCNH家族。seizure基因产物是来自电压-门控离子通道的6-跨膜结构域超家族的电压-门控钾通道亚基(VGKC)。概括地，钾通道功能的降低导致细胞的兴奋性过高且钾通道功能的激活导致细胞的兴奋性过低。黑腹果蝇(Drosophila melanogaster) seizure无效突变体表现出活动过度表型。 由Wang等(J. Neurosci.(神经系统科学杂志)，17 (3) =882-890,1997)所述的全部无效突变体在高温条件下显示另外的表型，即瘫痪。秀丽隐杆线虫(Caenorhabditis elegans)的 seizure 直向同源 unc-103 的失功能突变体不表现出明显的缺陷，但是获功能(通道激活)突变导致严重的运动和产卵缺陷 (WormBase, www. wormbase. org/)。这些数据说明seizure-样钾通道的过度激活也导致严重的神经肌肉缺陷。农业化学品的发现传统上是基于随机筛选过程，经常直接测试特定化学品对整个生物体(害虫)，诸如昆虫、真菌和植物的影响并测定生物学活性。一旦发现具有合适生物学活性的化合物，则需要进行更深入的研究，以具体确定这些化合物在分子水平上的作用模式或作用位点，从而预测这些化合物的安全性和环境负担。
发明内容
本发明描述一种更加基于目标的筛选农业化学品的方法，其中针对特定的目标筛选化合物，所述目标已经鉴定为在生物学和/或生理学上，与化学干扰目标位点以控制昆虫或其他害虫生物体的目的相关。具体地，本发明描述了使用一种调节害虫的生理状况并具有调节昆虫电压-门控钾通道的活性的能力的试剂有效用于控制害虫。SP，本发明提供1. 一种调节害虫的生理状况的试剂，其中所述试剂具有调节昆虫电压-门控钾通道的活性的能力。2.根据第1项所述的试剂，其中所述电压-门控钾通道是来自EAG家族的昆虫电压-门控钾通道；3.根据第2项所述的试剂，其中所述电压-门控钾通道是昆虫ERG-型电压-门控钾通道；4.根据第3项所述的试剂，其中所述电压-门控钾通道是棉蚜ERG-型电压-门控钾通道；5.根据第1项所述的试剂，其中所述试剂是杀虫剂；6.根据第1项所述的试剂，其中所述调节昆虫电压-门控钾通道的活性的能力是调节以起离子通道作用的形式表达昆虫电压-门控钾通道的线虫的摄食行为活动的能力， 或调节在以起离子通道作用的形式表达电压-门控钾通道的细胞中的昆虫电压-门控钾通道的电生理学活性的能力；7. 一种杀虫剂，包括具有调节昆虫电压-门控钾通道的活性的能力的物质或所述物质的农业上可接受的盐作为活性成分；8.根据第7项所述的杀虫剂，其中所述物质具有调节以起离子通道作用的形式表达昆虫电压-门控钾通道的线虫的摄食行为活动的能力；9.根据第8项所述的杀虫剂，其中所述物质具有抑制以起离子通道作用的形式表达昆虫电压-门控钾通道的线虫的摄食行为活动的能力，其中在存在30μΜ以上的所述物质的条件下，所述摄食行为活动少于在不存在所述物质的条件下的摄食行为活动；10.根据第8项所述的杀虫剂，其中所述物质具有抑制以起离子通道作用的形式表达昆虫电压-门控钾通道的线虫的摄食行为活动的能力，其中摄食行为活动降低50%时所述物质的有效浓度是100 μ M以下；11.根据第8项所述的杀虫剂，其中所述物质具有激活以起离子通道作用的形式表达昆虫电压-门控钾通道的线虫的摄食行为活动的能力，其中在存在30 μ M以上的所述物质的条件下，所述摄食行为活动多于不存在所述物质条件下的摄食行为活动；12.根据第8项所述的杀虫剂，其中所述物质具有激活以起离子通道作用的形式表达昆虫电压-门控钾通道的线虫的摄食行为活动的能力，其中摄食行为活动增加50%时所述物质的有效浓度是100 μ M以下；13.根据第7项所述的杀虫剂，其中所述物质具有调节在以起离子通道作用的形式表达电压-门控钾通道的细胞中的昆虫电压-门控钾通道的电生理学活性的能力；14. 一种测定测试物质的杀虫活性的方法，包括(1)在系统中测量线虫的摄食行为活动的第一步骤，所述线虫以起离子通道作用的形式表达选自下面A组的电压-门控钾通道，在所述系统中所述线虫与测试物质接触；以及(2)基于通过比较在所述第一步骤中测量的摄食行为活动和在不含测试物质的系统中所述线虫的摄食行为活动而获得的差别，评价所述测试物质的杀虫活性的第二步骤；<Α 组 >(a)包括SEQ ID NO :1，3，5或7的氨基酸序列或其一部分序列的起离子通道作用的蛋白，
(b)具有电压-门控钾通道活性并包括SEQ ID NO :1，3，5或7的氨基酸序列或其一部分序列中缺失、添加或置换一个或多个氨基酸的氨基酸序列的起离子通道作用的蛋白，(c)具有电压-门控钾通道活性并包括这样的氨基酸序列的蛋白，所述氨基酸序列与SEQ ID NO :1，3，5或7的氨基酸序列具有60%以上的序列同一性，(d)包括由SEQ ID NO :2，4，6或8的核苷酸序列编码的氨基酸序列的蛋白，(e)具有电压-门控钾通道活性并包括由这样的核苷酸序列编码的氨基酸序列的蛋白，所述核苷酸序列与SEQ ID NO :2，4，6或8的核苷酸序列具有75%以上的序列同一性，(f)具有电压-门控钾通道活性并包括由这样的多核苷酸编码的氨基酸序列的蛋白，所述多核苷酸在严谨的条件下和与包括SEQ ID N0:2，4，6或8的核苷酸序列的多核苷酸互补的多核苷酸杂交，(g)包括昆虫ERG-型电压-门控钾通道的氨基酸序列的蛋白，(h)包括棉蚜ERG-型电压-门控钾通道的氨基酸序列的蛋白，和(i)具有电压-门控钾通道活性并包括由这样的多核苷酸编码的氨基酸序列的蛋白，所述多核苷酸可使用棉蚜的cDNA作为模板并利用包括SEQ ID NO :11，13或15的核苷酸序列的多核苷酸和包括SEQ ID NO :12或14的核苷酸序列的多核苷酸作为引物通过PCR 来扩增；其中SEQ ID NO :1，3，5或7是棉蚜ERG-型电压-门控钾通道的氨基酸序列，SEQ ID NO :2，4，6或8是编码棉蚜ERG-型电压-门控钾通道的核苷酸序列，SEQ ID NO 11,13或15是PCR 5，引物的核苷酸序列，和SEQ ID NO 12或14是PCR 3，引物的核苷酸序列；15. 一种测定测试物质的杀虫活性的方法，包括(1)在系统中测量细胞的电压-门控钾通道的电生理学活性的第一步骤，所述细胞以起离子通道作用的形式表达选自下面A组中的电压-门控钾通道，在所述系统中所述细胞与测试物质接触；以及(2)基于通过比较在所述第一步骤中测量的电压-门控钾通道的电生理学活性和在不含测试物质的系统中所述细胞的电压-门控钾通道的电生理学活性而获得的差别，评价所述测试物质的杀虫活性的第二步骤；<A 组 >(a)包括SEQ ID NO :1，3，5或7的氨基酸序列或其一部分序列的起离子通道作用的蛋白，(b)具有电压-门控钾通道活性并包括SEQ ID NO :1，3，5或7的氨基酸序列或其一部分序列中缺失、添加或置换一个或多个氨基酸的氨基酸序列的起离子通道作用的蛋白，(c)具有电压-门控钾通道活性并包括这样的氨基酸序列的蛋白，所述氨基酸序列与SEQ ID NO :1，3，5或7的氨基酸序列具有60%以上的序列同一性，(d)包括由SEQ ID NO :2，4，6或8的核苷酸序列编码的氨基酸序列的蛋白，(e)具有电压-门控钾通道活性并包括由这样的核苷酸序列编码的氨基酸序列的蛋白，所述核苷酸序列与SEQ ID NO :2，4，6或8的核苷酸序列具有75%以上的序列同一性，(f)具有电压-门控钾通道活性并包括由这样的多核苷酸编码的氨基酸序列的蛋白，所述多核苷酸在严谨的条件下和与包括SEQ ID N0:2，4，6或8的核苷酸序列的多核苷酸互补的多核苷酸杂交，(g)包括昆虫ERG-型电压-门控钾通道的氨基酸序列的蛋白，(h)包括棉蚜ERG-型电压-门控钾通道的氨基酸序列的蛋白，和(i)具有电压-门控钾通道活性并包括由这样的多核苷酸编码的氨基酸序列的蛋白，所述多核苷酸可使用棉蚜的cDNA作为模板并利用包括SEQ ID NO :11，13或15的核苷酸序列的多核苷酸和包括SEQ ID NO :12或14的核苷酸序列的多核苷酸作为引物通过PCR 来扩增；其中SEQ ID NO :1，3，5或7是棉蚜ERG-型电压-门控钾通道的氨基酸序列，SEQ ID NO :2，4，6或8是编码棉蚜ERG-型电压-门控钾通道的核苷酸序列，SEQ ID NO :11,13或15是PCR 5，引物的核苷酸序列，和SEQ ID NO :12或14是PCR 3，引物的核苷酸序列；16. 一种筛选杀虫物质的方法，包括选择具有由第14或15项所述的方法评价的杀虫活性的物质；17. 一种杀虫剂，包括通过第16项所述的方法选择的物质或其农业上可接受的盐作为活性成分；18. 一种控制害虫的方法，包括向所述害虫、所述害虫的栖息地或要保护免受所述害虫伤害的植物施用有效量的第7-13或17项中任一项所述的杀虫剂；19. 一种控制害虫的方法，包括鉴定具有由第14或15项所述的方法评价的杀虫活性的物质，以及将所鉴定的杀虫物质与所述害虫接触；20. 一种电压-门控钾通道，其包括选自下面B组中的氨基酸序列〈B 组 >(a) SEQ ID NO 1，3，5 或 7 的氨基酸序列，(b)具有电压-门控钾通道活性并具有SEQ ID NO :1，3，5或7的氨基酸序列中一个或多个氨基酸缺失、添加或置换的氨基酸序列，(c)具有电压-门控钾通道活性并与SEQ ID NO :1，3，5或7的氨基酸序列具有 60 %以上序列同一性的氨基酸序列，(d)由SEQ ID NO :2，4，6或8的核苷酸序列编码的氨基酸序列，(e)具有电压-门控钾通道活性并由与SEQ ID NO :2，4，6或8的核苷酸序列具有 75 %以上序列同一性的核苷酸序列编码的氨基酸序列，(f)具有电压-门控钾通道活性并由多核苷酸编码的氨基酸序列，其中所述多核苷酸在严谨的条件下和包括与SEQ ID NO :2，4，6或8的核苷酸序列互补的核苷酸序列的多核苷酸杂交，(g)昆虫ERG-型电压-门控钾通道的氨基酸序列，(h)棉蚜ERG-型电压-门控钾通道的氨基酸序列，和
(i)具有电压-门控钾通道活性并由这样的多核苷酸编码的氨基酸序列，所述多核苷酸可使用棉蚜的cDNA作为模板并利用包括SEQ ID NO :11，13或15的核苷酸序列的多核苷酸和包括SEQ ID NO 12或14的核苷酸序列的多核苷酸作为引物通过PCR来扩增；其中SEQ ID NO :1，3，5或7是棉蚜ERG-型电压-门控钾通道的氨基酸序列，SEQ ID NO :2，4，6或8是编码棉蚜ERG-型电压-门控钾通道的核苷酸序列，SEQ ID NO 11,13或15是PCR 5，引物的核苷酸序列，和SEQ ID NO 12或14是PCR 3，引物的核苷酸序列；21.以起离子通道作用的形式表达昆虫电压-门控钾通道的线虫作为提供评价杀虫活性的指示物的研究工具的应用；22.以起离子通道作用的形式表达第20项所述的电压-门控钾通道的线虫作为提供评价杀虫活性的指示物的研究工具的应用；23.以起离子通道作用的形式表达第20项所述的电压-门控钾通道的细胞作为提供评价杀虫活性的指示物的研究工具的应用；24. 一种多核苷酸，包括编码第20项所述的电压-门控钾通道的氨基酸序列的核苷酸序列；25.根据第M项所述的多核苷酸，其中所述多核苷酸包括SEQ ID N0:2，4，6或8 的核苷酸序列；26. 一种多核苷酸，包括与第对或25项所述的多核苷酸的核苷酸序列互补的核苷酸序列；27. 一种多核苷酸，包括第M或25项所述的多核苷酸的部分核苷酸序列；或与所述部分核苷酸序列互补的核苷酸序列；28.根据第27项所述的多核苷酸，其中所述多核苷酸包括SEQ ID N0:ll_15中的任一核苷酸序列；29. 一种获得包括编码电压-门控钾通道的氨基酸序列的核苷酸序列的多核苷酸的方法，包括使用第27或观项所述的多核苷酸作为引物，通过聚合酶链式反应扩增所需多核苷酸的步骤；鉴定扩增的所需多核苷酸的步骤；以及回收所鉴定的多核苷酸的步骤；30. 一种获得包括编码电压-门控钾通道的氨基酸序列的核苷酸序列的多核苷酸的方法，包括使用第沈，27或观项所述的多核苷酸作为探针，通过杂交检测所需多核苷酸的步骤；鉴定检测到的所需多核苷酸的步骤；以及回收所鉴定的多核苷酸的步骤；31. 一种环状多核苷酸，其包括第M或25项所述的多核苷酸，所述第M或25项所述的多核苷酸可操作地连接于在宿主生物体或宿主细胞中可表达的启动子；32. 一种环状多核苷酸，其包括第M或25项所述的多核苷酸，所述第M或25项所述的多核苷酸可操作地连接于来自线虫的启动子；33.根据第32项所述的环状多核苷酸，其中所述来自线虫的启动子是myo-2基因的启动子；34.根据第31，32或33项所述的环状多核苷酸，其中所述环状多核苷酸具有用于在宿主细胞中自主复制的复制起点；
35. 一种产生环状多核苷酸的方法，包括将第M或25项所述的多核苷酸连接于载体；36. 一种转化体，其中已经导入了第M或25项所述的多核苷酸；37.瞬间表达昆虫电压-门控钾通道的细胞，其中已经在所述细胞中导入了第M 或25项所述的多核苷酸的转录产物；38.根据第36项所述的转化体，其中所述转化体是转化的大肠杆菌；39.根据第36项所述的转化体，其中所述转化体是转化的线虫；40.根据第39项所述的转化体，其中所述线虫是秀丽隐杆线虫；41. 一种产生转化体的方法，包括将第对或25项所述的多核苷酸导入至宿主细胞中；42. 一种产生电压-门控钾通道的方法，包括培养第36，38，39或40项所述的转化体以及回收产生的电压-门控钾通道的步骤；43.如第20项定义的电压-门控钾通道或第M-观项中任意一项所述的多核苷酸作为研究工具的应用；44.根据第43项所述的应用，其中所述研究工具是用于筛选杀虫剂的研究工具；45. 一种测量测试物质调节昆虫电压-门控钾通道的活性的能力的方法，包括(1)在系统中测量细胞的电压-门控钾通道的电生理学活性的第一步骤，所述细胞以起离子通道作用的形式表达选自下面A组中的电压-门控钾通道，在所述系统中所述细胞与测试物质接触；以及(2)基于通过比较在所述第一步骤中测量的电压-门控钾通道的电生理学活性和在不含测试物质的系统中所述细胞的电压-门控钾通道的电生理学活性而获得的差别，评价所述测试物质调节昆虫电压-门控钾通道的活性的能力的第二步骤；<A 组〉(a)包括SEQ ID NO :1，3，5或7的氨基酸序列或其一部分序列的起离子通道作用的蛋白；(b)具有电压-门控钾通道活性并包括SEQ ID NO :1，3，5或7的氨基酸序列或其一部分序列中缺失、添加或置换一个或多个氨基酸的氨基酸序列的起离子通道作用的蛋白；(c)具有电压-门控钾通道活性并包括这样的氨基酸序列的蛋白，所述氨基酸序列与SEQ ID NO :1，3，5或7的氨基酸序列具有60%以上的序列同一性；(d)包括由SEQ ID NO :2，4，6或8的核苷酸序列编码的氨基酸序列的蛋白，(e)具有电压-门控钾通道活性并包括由这样的核苷酸序列编码的氨基酸序列的蛋白，所述核苷酸序列与SEQ ID N0:2，4，6或8的核苷酸序列具有75%以上的序列同一性；(f)具有电压-门控钾通道活性并包括由这样的多核苷酸编码的氨基酸序列的蛋白，所述多核苷酸在严谨的条件下和与包括SEQ ID N0:2，4，6或8的核苷酸序列的多核苷酸互补的多核苷酸杂交，(g)包括昆虫ERG-型电压-门控钾通道的氨基酸序列的蛋白，(h)包括棉蚜ERG-型电压-门控钾通道的氨基酸序列的蛋白，和
(i)具有电压-门控钾通道活性并包括由这样的多核苷酸编码的氨基酸序列的蛋白，所述多核苷酸可使用棉蚜的cDNA作为模板并利用包括SEQ ID NO :11，13或15的核苷酸序列的多核苷酸和包括SEQ ID NO :12或14的核苷酸序列的多核苷酸作为引物通过PCR 来扩增；其中SEQ ID NO :1，3，5或7是棉蚜ERG-型电压-门控钾通道的氨基酸序列，SEQ ID NO :2，4，6或8是编码棉蚜ERG-型电压-门控钾通道的核苷酸序列，SEQ ID NO :11，13或15是PCR 5，引物的核苷酸序列，和SEQ ID NO 12或14是PCR 3，引物的核苷酸序列；46.根据第45项的方法，其中所述细胞是来自非洲爪蟾(Xenopus laevis)的卵母细胞；47. 一种测量测试物质调节昆虫电压-门控钾通道的活性的能力的方法，包括(1)在系统中测量线虫的电压-门控钾通道的电生理学活性的第一步骤，所述线虫以起离子通道作用的形式表达选自下面A组中的电压-门控钾通道，在所述系统中所述线虫与测试物质接触；以及(2)基于通过比较在所述第一步骤中测量的电压-门控钾通道的电生理学活性和在不含测试物质的系统中的线虫的电压-门控钾通道的电生理学活性而获得的差别，评价所述测试物质的调节昆虫电压-门控钾通道的活性的能力的第二步骤；<A 组〉(a)包括SEQ ID NO :1，3，5或7的氨基酸序列或其一部分序列的起离子通道作用的蛋白；(b)具有电压-门控钾通道活性并包括SEQ ID NO :1，3，5或7的氨基酸序列或其一部分序列中缺失、添加或置换一个或多个氨基酸的氨基酸序列的起离子通道作用的蛋白；(c)具有电压-门控钾通道活性并包括这样的氨基酸序列的蛋白，所述氨基酸序列与SEQ ID NO :1，3，5或7的氨基酸序列具有60%以上的序列同一性；(d)包括由SEQ ID NO :2，4，6或8的核苷酸序列编码的氨基酸序列的蛋白，(e)具有电压-门控钾通道活性并包括由这样的核苷酸序列编码的氨基酸序列的蛋白，所述核苷酸序列与SEQ ID N0:2，4，6或8的核苷酸序列具有75%以上的序列同一性；(f)具有电压-门控钾通道活性并包括由这样的多核苷酸编码的氨基酸序列的蛋白，所述多核苷酸在严谨的条件下和与包括SEQ ID N0:2，4，6或8的核苷酸序列的多核苷酸互补的多核苷酸杂交，(g)包括昆虫ERG-型电压-门控钾通道的氨基酸序列的蛋白，(h)包括棉蚜ERG-型电压-门控钾通道的氨基酸序列的蛋白，和(i)具有电压-门控钾通道活性并包括由这样的多核苷酸编码的氨基酸序列的蛋白，所述多核苷酸可使用棉蚜的cDNA作为模板并利用包括SEQ ID NO :11，13或15的核苷酸序列的多核苷酸和包括SEQ ID NO :12或14的核苷酸序列的多核苷酸作为引物通过PCR 来扩增；
其中SEQ ID NO :1，3，5或7是棉蚜ERG-型电压-门控钾通道的氨基酸序列，SEQ ID NO :2，4，6或8是编码棉蚜ERG-型电压-门控钾通道的核苷酸序列，SEQ ID NO :11，13或15是PCR 5，引物的核苷酸序列，和SEQ ID NO 12或14是PCR 3，引物的核苷酸序列；48.根据第47项的方法，其中所述线虫是秀丽隐杆线虫；和49. 一种关于测试物质的系统，包括输入/累积/管理数据信息的装置，所述数据信息涉及改变来自具有测试物质的昆虫的电压-门控钾通道的活性的能力；基于所需条
件查询/1检索所述数据信息的装置；和显示/输出查询/检索的结果的装置
附图简述
图1显示实施例2的结果。
图2显示实施例6的结果。
图3显示实施例6的结果。
图4显示实施例6的结果。
图5显示实施例6的结果。
图6显示实施例6的结果。
图7显示实施例6的结果。
图8显示实施例6的结果。
图9显示实施例7的结果。
图10显示实施例10的结果。
图11显示实施例10的结果。
具体实施例方式下面将详细地解释本发明。在本发明中，“害虫”指通过直接伤害人和动物或通过损害庄稼使人类生活受伤害或不适的小动物。其实例包括节肢动物诸如昆虫、螨类和虱类和线虫动物门(Nematoda)诸如线虫类，并且其典型的实例如下半翅目(Hemiptera)飞風科(Delphacidae)如灰飞風(Laodelphax striatellus)、揭飞虱(Nilaparvata lugens)和白背稻飞虱(Sogatella furcifera)，角顶叶蝉科 (Deltocephalidae)如黑尾叶蝶(Nephotettix cincticeps)禾口茶绿叶蝶(Empoasca onukii)，虫牙科(Aphididae)如棉虫牙(Aphis gossypii)禾口桃虫牙(Myzus persicae)，虫春科 (Pentatomidae)，粉風禾斗(Aleyrodidae)如温室粉風(Trialeurodes vaporariorum)、甘薯粉風(Bemisia tabaci)禾口 Bemisia argentifolli，阶禾斗(Coccidae)，网虫春禾斗(Tingidae)， 木虱科(Psyllidae)，等；鳞翅目(Lepidoptera)螟蛾科(Pyralidae)如二化螟(Chilo suppressalis)、稻纵卷叶野螟 (Cnaphalocrocis medinalis) > yjfl ΞΕ f _ (Ostrinia nuhilalis)禾口 Parapediasia teterrella,夜娥科(Noctuidae)如斜岐贪夜娥(Spodoptera litura)、贪夜娥 (Spodoptera exigua) (Pseudaletia separata) ^1^ : ! (Mamestra brassicae) >小地老虎(Agrotis ipsilon)、粉夜蛾属(Trichoplusia spp.)、实夜蛾属(Heliothis spp.)、Helicoverpa spp.和山卷蛾(Earias spp.)，粉蝶科(Pieridae)如菜粉蝶日本亚禾中(Pieris rapae crucivora)，卷蛾禾斗(Tortricidae)如棉褐带卷蛾(Adoxophyes orana fasciata)、梨小食心虫(Grapholita molesta)和苹果皮小卷蛾(Cydia pomonella)，駐果娥禾斗(Carposinidae)如桃虫主果娥(Carposina niponensis), Bucculatricidae 如桃潜夜蛾(Lyonetia clerkella)，细蛾科(Gracillariidae)如金纹小潜细蛾(Phyllonorycter ringoniella)，夜潜娥科(Phyllocnistidae)如相橘夜潜娥(Phyllocnistis citrella), 巢蛾科(Yponomeutidae)如小菜蛾(Plutella xylostella)，麦蛾科(Gelechiidae)如红铃麦蛾(Pectinophora gossypiella)，灯蛾禾斗(Arctiidae)，谷蛾禾斗(Tineidae)，等；双翅目(Diptera)库蚊属(Culex)如淡色库蚊(Culexpipiens pallens)、三带喙库蚊(Cules tritaeniorhynchus)禾口致倦库岐(Culex quinquefasciatus),伊岐属(Aedes)如埃及伊岐(Aedes aegypti)禾口白纹伊岐(Aedes albopictus),按岐属(Anopheles)如中华按岐(Anophelinae sinensis),摇岐科(Chironomidae)，妮科(Muscidae)如家蠅(Musca domestica)禾口厩腐蠅(Muscina stabulans),丽蠅科(Calliphoridae),麻妮禾斗(Sarcophagidae)，夏厕妮(Fannia canicularis)，花妮禾斗(Anthomyiidae)如灰地种蝇(Delia Platura)和葱地种蝇(Delia antigua)，实蝇科CTrypetidae)，果蝇科 (Drosophilidae)，毛蠓科(Psychodidae)，蚋科(Simuliidae)，虻科(Tabanidae)，螫蝇科 (Stomoxyidae)，潜妮禾斗(Agromyzidae)，等；翘翅目(Coleoptera)谷物食虫(Diabrotica)如西方谷物食虫(Diabrotica virgifera virgifera)禾口力 I · ii (Diabrotica undecimpunctata howardi)， t 禾斗 (Scarabaeidae)如古铜异丽金龟(Anomala cuprea)禾口多色异丽金龟(Anomala rufocuprea),象虫禾斗(Curculionidae)如玉米象(Sitophilus zeamais)、禾 S /K 象 (Lissorphoptrus oryzophilus)禾口绿豆象(Calosobruchys chinensis)，拟步甲禾斗 (Tenebrionidae)如黄粉甲(Tenebrio moIitor)禾口赤拟谷盗(Tribolium castaneum)， Bf 甲科(Chrysomelidae)如 /K 稻负泥虫(Oulema oryzae)、黄守瓜(Aulacophora femoral is)、黄曲条菜跳甲(Phyllotreta striolata)和马铃薯叶甲(Leptinotarsa decemlineata)，窃蠹科(Anobiidae)，瓢虫(Epilachna spp.)如二十八斑瓢虫 (Epilachna vigintioctopunctata)，禾斗(Lyctidae)，jkM.^ (Bostrychidae)，^牛禾斗 (Cerambycidae)，毒β急@虫(Paederus fuiscipes)，等；缨翅目(Thysanoptera)蓟马科(Thripidae)，如包括棕榈蓟马(Thripspalmi)的蓟马属(Thrips spp.)， 包括西方花蓟马(Flankliniella occidentalis)的花蓟马属(Frankliniella spp.)，和包 Sciltothrips dorsalis 白勺 Sciltothrips，管 J马禾斗(Phlaeothripidae)，等；膜翅目(Hymenoptera)叶蜂科(Tenthredinidae)，蚁科(Formicidae)，胡蜂科(Vespidae)，等；网翅目(Dictyoptera)蜚蠊科(Blattidae)，姬蠊科(Blattellidae)，等；
直翅目(Orthoptera)剑角蝗科(Acrididae)，蝼蛄科(Gryllotalpidae)，等；5 g (Siphonaptera)人蚤(Pulex irritans)，等；虱目(Anoplura)体Ml (Pediculus humanus capitis)，等；等翅目(Isoptera)白蚁科(Termi t i dae)，等；蝶螨目(Acarina)叶螨科(Tetranychidae)如二 斑叶螨(Tetranychus urticae)、神泽氏叶螨 (Tetranychus kanzawai)、ttt tit H 虫菌(Panonychus citri)、# 胃H ■ (Panonychus ulmi)和小爪螨属(Oligonychus spp·)，瘿螨科(Eriophyidae)如橘刺皮瘿螨(AcuIops pelekassi)和斯氏针刺瘿螨(Aculus schlechtendali)，附线螨科(Tarsonemidae)如侧多食跗线螨(Polyphagotarsonemus latus),细须螨科(Tenuipalpidae),杜克螨科 (Tuckerellidae),硬蝶禾斗(Ixodidae)如长角血蝶(Haemaphysalis longicornis)、褐黄血蝶(Haemaphysalis flava)、台湾革蝶(Dermacentor taiwanicus)、卵形硬蝶(Ixodes ovatus)、全沟硬蝶(Ixodes persulcatus)禾口微小牛蝶(Boophilus microplus)，粉觸科 (Acaridae)如腐食酪螨(Tyrophagus putrescentiae),皮刺螨禾斗(Dermanyssidae),肉食虫茜禾斗(Cheyletidae)如粉尘虫茜(Dermatophagoides farinae)禾口屋尘虫茜(Dermatophagoides ptrenyssnus),诸如普通肉食觸(Cheyletus eruditus)、马六甲肉食觸(Cheyletus malaccensis)禾口 Cheyletus moorei、皮刺螨(Dermanyssus spp.)，等；线虫类(Nematodes)咖啡短体线虫(Pratylenchus coffeae)，伪短体线虫(Pratylenchus fallax)，大豆异皮线虫(Heterodera glycines)，马铃暮金线虫(Globodera rostochiensis)，北方牛艮结线虫(Meloidogyne hapla)，南方根结线虫(Meloidogyne incognita)，等。在本发明中，“调节害虫的生理状况”是指将诸如活体内各种现象或其机制的状况改变成不同于通常状况的状况，所述现象是用于维持害虫生存的现象，例如，诸如呼吸、消化、分泌、体液循环、新陈代谢、神经传递等。实例包括通过停止呼吸以致不提供用于害虫体内新陈代谢所必需的氧气而改变状况，和通过停止害虫的神经传递功能以致害虫的各种运动停止而改变状况。在本发明中，“调节害虫的生理状况的试剂”是当施用于害虫时可以调节害虫的生理状况的试剂。在本发明中，“来自昆虫的电压-门控钾通道”指昆虫中存在的电压-门控钾通道， 其是各种生物体中存在的电压-门控钾通道之一。作为电压-门控钾通道，优选地，来自昆虫的电压-门控钾通道是来自EAG家族的昆虫电压-门控钾通道，更优选地，来自EAG家族的昆虫电压-门控钾通道是昆虫ERG-型电压-门控钾通道(seizure)，且进一步优选地，昆虫ERG-型电压-门控钾通道是来自棉蚜的ERG-型电压-门控钾通道(seizure)。昆虫是在动物界(Animalia)，节肢动物门(Arthropod)，昆虫纲(Insecta) 下分类的动物，并且它的实例包括下列各目的节肢动物原尾目(ftOtura)，弹尾目(Collembola)，双尾目(Diplura)，缨尾目(Thysanura)，蜉蝣目(Ephemeroptera)，蜻蜓目 (Odonata)，织翼夜蛾目(Plecoptera)，蛩蠊目(Grylloblattodea)，直翅目(Orthoptera)， 竹节虫目(Phasmatodea)，革翅目(Dermaptera)，螳螂目(Mantodea)，蜚蠊目(Blattaria)， 等翅目(Isoptera)J^Mg (Embioptera)，啮虫目(Psocoptera)，食毛目(Mallophaga)，虱目(Anoplura)，缨翅目(Thysanoptera)，半翅目(Hemiptera)，脉翅目(Neuroptera)，长翅目(Mecoptera)，毛翅目 CTrichoptera)，鳞翅目(L印idoptera)，鞘翅目(Coleoptera)，双翅目(Diptera)，膜翅目(Hymenoptera)，圣目(Siphonaptera)，抢翅目(Strepsiptera)，寸。离子通道是细胞的生物膜中存在的一种跨膜蛋白，并使离子经由在其中心处形成的称为孔的亲水性路径渗透。离子通道参与维持膜电位或细胞内和细胞外各种离子的浓度，在可电兴奋的细胞诸如神经细胞中产生动作电位，和信号转导。离子通道的活性一般可以通过电生理学方法来测量。电压-门控钾通道的活性可以例如通过双电极电压钳方法(TEVC法)、利用表达目标离子通道的非洲爪蟾卵母细胞来测量，如 Bruggemann 等的报告所述(Nature (自然)365 (6445)，445-448，1993)，或通过膜片钳方法、利用表达目标离子通道的培养的细胞来测量，如Schonherr等的报告所述 (European Journal of Neuroscinece (欧洲神经科学杂志)11 (3)，753-760,1999)。在这些方法中，使用电极直接读取离子流，并测量离子通道活性。在已知作为模式生物体的秀丽隐杆线虫(以下在一些情形中称为线虫)中，伴随有咽部收缩运动(抽吸(pumping))的电位变化可以利用称为咽电图(electropharyngeogram)的电生理学方法来测量，如Raizena 和Avery的报告所述(Neuron (神经元)12 (3)，483-495，1994)。咽电图的波形反映在与咽部诸如咽部肌肉收缩相关的位点处表达的离子通道和转运蛋白的活性。因此，通过记录在咽部表达目标离子通道的转基因线虫的咽电图，可以间接测量目标离子通道的活性，如稍后所述。测量昆虫电压-门控钾通道的活性的方法可以通过与电生理学程序类似的方法来执行。在本发明中，“以起离子通道作用的形式表达昆虫电压-门控钾通道”意指在这样的状态下表达电压-门控钾通道，其中所述通道具有使得钾离子渗透的活性，并且所述活性可以通过前述各种电生理学方法来测量。在本发明中，"EAG家族”由 EAG (ether-a-go-go)，ERG (EAG-相关基因)，和 ELK(EAG-样基因)组成，其属于电压-门控钾通道。根据国际基础和临床药理学协会 (IUPHAR)的分类名称=EAG是KvlO. x,ERG是Kvll. χ且ELK是Κν12. χ。人EAG家族也称为 KCNH家族。在本发明中，“ERG-型电压-门控钾通道”指与作为EAG家族成员的ERG (EAG-相关基因)同源的基因的产物。作为人ERG(hERG)的昆虫同源物，seizure存在于黑腹果蝇中。线虫(秀丽隐杆线虫)的seizure直向同源物是unc-103。在来自昆虫的电压-门控钾通道中，作为ERG-型电压-门控钾通道或seizure的氨基酸序列，以下各项的氨基酸序列已经公开在公共数据库中黑腹果蝇(登记号NP_476713)，赤拟谷盗(Triboliumcastaneum)(登记号 XP_973853)，
意大利蜜蜂(Apismellifera)(登记号 XP_393977)，冈比亚按蚊(Anopheles gambiae)(登记号 XP_308166)，等等。在来自昆虫的电压-门控钾通道中，作为编码ERG-型电压-门控钾通道或 seizure的核苷酸序列，以下各项的核苷酸序列已经公开在公共数据库中 黑腹果蝇(登记号NM_057365)，赤拟谷盗(登记号XM_968760)，意大利蜜蜂(登记号XM_393977)，冈比亚按蚊(登记号XM_308166)，等等。通过稍后所述的方法，揭示尚未知的棉蚜seizure的氨基酸序列及其基因的核苷酸序列成为可能，并且通过这些方法获得的氨基酸序列和基因的核苷酸序列分别在SEQ ID N0:l，3，5，7，和 SEQ ID NO :2，4，6，8 中公开。以SEQ ID NO :3所示的棉蚜seizure的氨基酸序列与已知序列的的同一性显示在表1中。表
权利要求
1.一种测定测试物质的杀虫活性的方法，包括(1)在系统中测量线虫的摄食行为活动的第一步骤，所述线虫以起离子通道作用的形式表达选自下面A组的电压-门控钾通道，在所述系统中所述线虫与测试物质接触；以及(2)基于通过比较在所述第一步骤中测量的摄食行为活动和在不含测试物质的系统中所述线虫的摄食行为活动而获得的差别，评价所述测试物质的杀虫活性的第二步骤；<A组〉(a)包括SEQID NO :1，3，5或7的氨基酸序列或其一部分序列的起离子通道作用的蛋白，(b)具有电压-门控钾通道活性并包括SEQID N0:l，3，5或7的氨基酸序列或其一部分序列中缺失、添加或置换一个或多个氨基酸的氨基酸序列的起离子通道作用的蛋白，(c)具有电压-门控钾通道活性并包括这样的氨基酸序列的蛋白，所述氨基酸序列与 SEQ ID NO :1，3，5或7的氨基酸序列具有60%以上的序列同一性，(d)包括由SEQID NO :2，4，6或8的核苷酸序列编码的氨基酸序列的蛋白，(e)具有电压-门控钾通道活性并包括由这样的核苷酸序列编码的氨基酸序列的蛋白，所述核苷酸序列与SEQ ID NO :2，4，6或8的核苷酸序列具有75%以上的序列同一性，(f)具有电压-门控钾通道活性并包括由这样的多核苷酸编码的氨基酸序列的蛋白， 所述多核苷酸在严谨的条件下和与包括SEQ ID N0:2，4，6或8的核苷酸序列的多核苷酸互补的多核苷酸杂交，(g)包括昆虫ERG-型电压-门控钾通道的氨基酸序列的蛋白，(h)包括棉蚜ERG-型电压-门控钾通道的氨基酸序列的蛋白，和(i)具有电压-门控钾通道活性并包括由这样的多核苷酸编码的氨基酸序列的蛋白， 所述多核苷酸可使用棉蚜的cDNA作为模板并利用包括SEQ ID NO :11，13或15的核苷酸序列的多核苷酸和包括SEQ ID NO :12或14的核苷酸序列的多核苷酸作为引物通过PCR来扩增。
2.一种测定测试物质的杀虫活性的方法，包括(1)在系统中测量细胞的电压-门控钾通道的电生理学活性的第一步骤，所述细胞以起离子通道作用的形式表达选自下面A组中的电压-门控钾通道，在所述系统中所述细胞与测试物质接触；以及(2)基于通过比较在所述第一步骤中测量的电压-门控钾通道的电生理学活性和在不含测试物质的系统中所述细胞的电压-门控钾通道的电生理学活性而获得的差别，评价所述测试物质的杀虫活性的第二步骤；<Α组〉(a)包括SEQID N0:l，3，5或7的氨基酸序列或其一部分序列的起离子通道作用的蛋白，(b)具有电压-门控钾通道活性并包括SEQID N0:l，3，5或7的氨基酸序列或其一部分序列中缺失、添加或置换一个或多个氨基酸的氨基酸序列的起离子通道作用的蛋白，(c)具有电压-门控钾通道活性并包括这样的氨基酸序列的蛋白，所述氨基酸序列与 SEQ ID NO :1，3，5或7的氨基酸序列具有60%以上的序列同一性，(d)包括由SEQID NO :2，4，6或8的核苷酸序列编码的氨基酸序列的蛋白，(e)具有电压-门控钾通道活性并包括由这样的核苷酸序列编码的氨基酸序列的蛋白，所述核苷酸序列与SEQ ID NO :2，4，6或8的核苷酸序列具有75%以上的序列同一性，(f)具有电压-门控钾通道活性并包括由这样的多核苷酸编码的氨基酸序列的蛋白， 所述多核苷酸在严谨的条件下和与包括SEQ ID N0:2，4，6或8的核苷酸序列的多核苷酸互补的多核苷酸杂交，(g)包括昆虫ERG-型电压-门控钾通道的氨基酸序列的蛋白，(h)包括棉蚜ERG-型电压-门控钾通道的氨基酸序列的蛋白，和(i)具有电压-门控钾通道活性并包括由这样的多核苷酸编码的氨基酸序列的蛋白， 所述多核苷酸可使用棉蚜的cDNA作为模板并利用包括SEQ ID NO :11，13或15的核苷酸序列的多核苷酸和包括SEQ ID NO :12或14的核苷酸序列的多核苷酸作为引物通过PCR来扩增。
3.一种筛选杀虫物质的方法，包括选择具有由权利要求1或2所述的方法评价的杀虫活性的物质。
4.一种杀虫剂，包括通过权利要求3所述的方法选择的物质或其农业上可接受的盐作为活性成分。
5.一种调节害虫的生理状况的试剂，其中所述试剂具有调节昆虫电压-门控钾通道的活性的能力。
6.根据权利要求5所述的试剂，其中所述电压-门控钾通道是来自EAG家族的昆虫电压-门控钾通道。
7.根据权利要求6所述的试剂，其中所述电压-门控钾通道是昆虫ERG-型电压-门控钾通道。
8.根据权利要求7所述的试剂，其中所述电压-门控钾通道是棉蚜ERG-型电压-门控钾通道。
9.根据权利要求5所述的试剂，其中所述试剂是杀虫剂。
10.根据权利要求5所述的试剂，其中所述调节昆虫电压-门控钾通道的活性的能力是调节以起离子通道作用的形式表达昆虫电压-门控钾通道的线虫的摄食行为活动的能力， 或调节在以起离子通道作用的形式表达电压-门控钾通道的细胞中的昆虫电压-门控钾通道的电生理学活性的能力。
11.一种杀虫剂，包括一种物质或所述物质的农业上可接受的盐作为活性成分，所述物质具有调节昆虫电压-门控钾通道的活性的能力。
12.根据权利要求11所述的杀虫剂，其中所述物质具有调节以起离子通道作用的形式表达昆虫电压-门控钾通道的线虫的摄食行为活动的能力。
13.根据权利要求12所述的杀虫剂，其中所述物质具有抑制以起离子通道作用的形式表达昆虫电压-门控钾通道的线虫的摄食行为活动的能力，其中在存在30 μ M以上的所述物质的条件下，所述摄食行为活动少于在不存在所述物质的条件下的摄食行为活动。
14.根据权利要求12所述的杀虫剂，其中所述物质具有抑制以起离子通道作用的形式表达昆虫电压-门控钾通道的线虫的摄食行为活动的能力，其中摄食行为活动降低50%时的所述物质的有效浓度是100 μ M以下。
15.根据权利要求12所述的杀虫剂，其中所述物质具有激活以起离子通道作用的形式表达昆虫电压-门控钾通道的线虫的摄食行为活动的能力，其中在存在30 μ M以上的所述物质的条件下，所述摄食行为活动多于在不存在所述物质的条件下的摄食行为活动。
16.根据权利要求12所述的杀虫剂，其中所述物质具有激活以起离子通道作用的形式表达昆虫电压-门控钾通道的线虫的摄食行为活动的能力，其中摄食行为活动增加50%时的所述物质的有效浓度是100 μ M以下。
17.根据权利要求11所述的杀虫剂，其中所述物质具有调节在以起离子通道作用的形式表达电压-门控钾通道的细胞中的昆虫电压-门控钾通道的电生理学活性的能力。
18.—种控制害虫的方法，包括向所述害虫、所述害虫的栖息地或要保护免受所述害虫伤害的植物施用有效量的权利要求4或11-17中任一项所述的杀虫剂。
19.一种控制害虫的方法，包括鉴定具有由权利要求1或2所述的方法评价的杀虫活性的物质，以及将所鉴定的杀虫物质与所述害虫接触。
20.一种电压-门控钾通道，其包括选自下面B组中的氨基酸序列〈B组〉(a)SEQ ID NO :1，3，5或7的氨基酸序列，(b)具有电压-门控钾通道活性并具有SEQID N0:l，3，5或7的氨基酸序列中一个或多个氨基酸缺失、添加或置换的氨基酸序列，(c)具有电压-门控钾通道活性并与SEQID N0:l，3，5或7的氨基酸序列具有60%以上序列同一性的氨基酸序列，(d)由SEQID NO :2，4，6或8的核苷酸序列编码的氨基酸序列，(e)具有电压-门控钾通道活性并由与SEQID N0:2，4，6或8的核苷酸序列具有75% 以上序列同一性的核苷酸序列编码的氨基酸序列，(f)具有电压-门控钾通道活性并由多核苷酸编码的氨基酸序列，其中所述多核苷酸在严谨的条件下与包括与SEQ ID NO :2，4，6或8的核苷酸序列互补的核苷酸序列的多核苷酸杂交，(g)昆虫ERG-型电压-门控钾通道的氨基酸序列，(h)棉蚜ERG-型电压-门控钾通道的氨基酸序列，和(i)具有电压-门控钾通道活性并由这样的多核苷酸编码的氨基酸序列，所述多核苷酸可使用棉蚜的cDNA作为模板并利用包括SEQ ID NO :11，13或15的核苷酸序列的多核苷酸和包括SEQ ID NO 12或14的核苷酸序列的多核苷酸作为引物通过PCR来扩增。
21.以起离子通道作用的形式表达昆虫电压-门控钾通道的线虫作为提供评价杀虫活性的指示物的研究工具的应用。
22.以起离子通道作用的形式表达权利要求20所述的电压-门控钾通道的线虫作为提供评价杀虫活性的指示物的研究工具的应用。
23.以起离子通道作用的形式表达权利要求20所述的电压-门控钾通道的细胞作为提供评价杀虫活性的指示物的研究工具的应用。
24.一种多核苷酸，包括编码权利要求20所述的电压-门控钾通道的氨基酸序列的核苷酸序列。
25.根据权利要求M所述的多核苷酸，其中所述多核苷酸包括SEQID N0:2，4，6或8的核苷酸序列。
26.一种多核苷酸，包括与权利要求对或25所述的多核苷酸的核苷酸序列互补的核苷酸序列。
27.一种多核苷酸，包括权利要求M或25所述的多核苷酸的部分核苷酸序列；或与所述部分核苷酸序列互补的核苷酸序列。
28.根据权利要求27所述的多核苷酸，其中所述多核苷酸包括SEQID NO :11-15中的任一核苷酸序列。
29.一种获得包括编码电压-门控钾通道的氨基酸序列的核苷酸序列的多核苷酸的方法，所述方法包括使用权利要求27或观所述的多核苷酸作为引物，通过聚合酶链式反应扩增所需多核苷酸的步骤；鉴定扩增的所需多核苷酸的步骤；以及回收所鉴定的多核苷酸的步骤。
30.一种获得包括编码电压-门控钾通道的氨基酸序列的核苷酸序列的多核苷酸的方法，包括使用权利要求沈，27或观所述的多核苷酸作为探针，通过杂交检测所需多核苷酸的步骤；鉴定检测到的所需多核苷酸的步骤；以及回收所鉴定的多核苷酸的步骤。
31.一种环状多核苷酸，其包括可操作地连接于在宿主生物体或宿主细胞中可表达的启动子的权利要求M或25所述的多核苷酸。
32.—种环状多核苷酸，其包括可操作地连接于来自线虫的启动子的权利要求M或 25所述的多核苷酸。
33.根据权利要求32所述的环状多核苷酸，其中所述来自线虫的启动子是myo-2基因的启动子。
34.根据权利要求31，32或33所述的环状多核苷酸，其中所述环状多核苷酸具有用于在宿主细胞中自主复制的复制起点。
35.一种产生环状多核苷酸的方法，包括将权利要求M或25所述的多核苷酸连接于载体。
36.一种转化体，其中已经导入了权利要求M或25所述的多核苷酸。
37.瞬间表达昆虫电压-门控钾通道的细胞，其中已经在其中导入了权利要求M或25 所述的多核苷酸的转录产物。
38.根据权利要求36所述的转化体，其中所述转化体是转化的大肠杆菌(Escherichia coli)ο
39.根据权利要求36所述的转化体，其中所述转化体是转化的线虫。
40.根据权利要求39所述的转化体，其中所述线虫是秀丽隐杆线虫(Caenorhabdtis elegans)0
41.一种产生转化体的方法，包括将权利要求M或25所述的多核苷酸导入至宿主细胞中。
42.一种产生电压-门控钾通道的方法，包括培养权利要求36，38，39或40所述的转化体以及回收所产生的电压-门控钾通道的步骤。
43.权利要求20所述的电压-门控钾通道或权利要求对-观中任意一项所述的多核苷酸作为研究工具的应用。
44.根据权利要求43所述的应用，其中所述研究工具是用于筛选杀虫剂的研究工具。
45.一种测量测试物质调节昆虫电压-门控钾通道的活性的能力的方法，包括(1)在系统中测量细胞的电压-门控钾通道的电生理学活性的第一步骤，所述细胞以起离子通道作用的形式表达选自下面A组中的电压-门控钾通道，在所述系统中所述细胞与测试物质接触；以及(2)基于通过比较在所述第一步骤中测量的电压-门控钾通道的电生理学活性和在不含测试物质的系统中所述细胞的电压-门控钾通道的电生理学活性而获得的差别，评价所述测试物质调节昆虫电压-门控钾通道的活性的能力的第二步骤；<A组〉(a)包括SEQID N0:l，3，5或7的氨基酸序列或其一部分序列的起离子通道作用的蛋白；(b)具有电压-门控钾通道活性并包括SEQID N0:l，3，5或7的氨基酸序列或其一部分序列中缺失、添加或置换一个或多个氨基酸的氨基酸序列的起离子通道作用的蛋白；(c)具有电压-门控钾通道活性并包括这样的氨基酸序列的蛋白，所述氨基酸序列与 SEQ ID NO :1，3，5或7的氨基酸序列具有60%以上的序列同一性；(d)包括由SEQID NO :2，4，6或8的核苷酸序列编码的氨基酸序列的蛋白，(e)具有电压-门控钾通道活性并包括由这样的核苷酸序列编码的氨基酸序列的蛋白，所述核苷酸序列与SEQ ID NO :2，4，6或8的核苷酸序列具有75%以上的序列同一性；(f)具有电压-门控钾通道活性并包括由这样的多核苷酸编码的氨基酸序列的蛋白， 所述多核苷酸在严谨的条件下和与包括SEQ ID N0:2，4，6或8的核苷酸序列的多核苷酸互补的多核苷酸杂交，(g)包括昆虫ERG-型电压-门控钾通道的氨基酸序列的蛋白，(h)包括棉蚜ERG-型电压-门控钾通道的氨基酸序列的蛋白，和(i)具有电压-门控钾通道活性并包括由这样的多核苷酸编码的氨基酸序列的蛋白， 所述多核苷酸可使用棉蚜的cDNA作为模板并利用包括SEQ ID NO :11，13或15的核苷酸序列的多核苷酸和包括SEQ ID NO :12或14的核苷酸序列的多核苷酸作为引物通过PCR来扩+曰O
46.根据权利要求45的方法，其中所述细胞是来自非洲爪蟾(Xenopuslaevis)的卵母细胞。
47.一种测量测试物质调节昆虫电压-门控钾通道的活性的能力的方法，包括(1)在系统中测量线虫的电压-门控钾通道的电生理学活性的第一步骤，所述线虫以起离子通道作用的形式表达选自下面A组中的电压-门控钾通道，在所述系统中所述线虫与测试物质接触；以及(2)基于通过比较在所述第一步骤中测量的电压-门控钾通道的电生理学活性和在不含测试物质的系统中的线虫的电压-门控钾通道的电生理学活性而获得的差别，评价所述测试物质的调节昆虫电压-门控钾通道的活性的能力的第二步骤；<A组〉(a)包括SEQ ID NO :1，3，5或7的氨基酸序列或其一部分序列的起离子通道作用的蛋白；(b)具有电压-门控钾通道活性并包括SEQID N0:l，3，5或7的氨基酸序列或其一部分序列中缺失、添加或置换一个或多个氨基酸的氨基酸序列的起离子通道作用的蛋白；(c)具有电压-门控钾通道活性并包括这样的氨基酸序列的蛋白，所述氨基酸序列与 SEQ ID NO :1，3，5或7的氨基酸序列具有60%以上的序列同一性；(d)包括由SEQID NO :2，4，6或8的核苷酸序列编码的氨基酸序列的蛋白，(e)具有电压-门控钾通道活性并包括由这样的核苷酸序列编码的氨基酸序列的蛋白，所述核苷酸序列与SEQ ID NO :2，4，6或8的核苷酸序列具有75%以上的序列同一性；(f)具有电压-门控钾通道活性并包括由这样的多核苷酸编码的氨基酸序列的蛋白， 所述多核苷酸在严谨的条件下和与包括SEQ ID N0:2，4，6或8的核苷酸序列的多核苷酸互补的多核苷酸杂交，(g)包括昆虫ERG-型电压-门控钾通道的氨基酸序列的蛋白，(h)包括棉蚜ERG-型电压-门控钾通道的氨基酸序列的蛋白，和(i)具有电压-门控钾通道活性并包括由这样的多核苷酸编码的氨基酸序列的蛋白， 所述多核苷酸可使用棉蚜的cDNA作为模板并利用包括SEQ ID NO :11，13或15的核苷酸序列的多核苷酸和包括SEQ ID NO :12或14的核苷酸序列的多核苷酸作为引物通过PCR来扩
48.根据权利要求47的方法，其中所述线虫是秀丽隐杆线虫。
49.一种关于测试物质的系统，包括输入/累积/管理数据信息的装置，所述数据信息涉及改变来自具有测试物质的昆虫的电压-门控钾通道的活性的能力，基于所需条件查询/检索所述数据信息的装置，和显示/输出查询/检索的结果的装置。
全文摘要
本发明提供一种调节害虫的生理状况的试剂，其中所述试剂具有调节昆虫电压-门控钾通道的活性的能力；一种测定测试物质的杀虫活性的方法，该方法包括测量反应系统中电压-门控钾通道的活性，在该反应系统中电压-门控钾通道与测试物质接触；等等。
文档编号G01N33/94GK102224166SQ20098014655
公开日2011年10月19日 申请日期2009年9月24日 优先权日2008年9月24日
发明者大槻纯子, 泰特斯·卡莱塔, 温迪·马德雷恩, 马克·洛吉 申请人:住友化学株式会社