专利名称：藏药黑果枸杞质量控制方法
技术领域：
本发明涉及一种藏药质量控制方法，尤其涉及藏药黑果枸杞质量控制方法。
背景技术：
藏药黑果枸杞为茄科枸杞属植物黑果枸杞(Lycium ruthenicum Murr.)的成熟果
实，有较强的抗氧化性，无毒，应用于医药、食品。藏药黑果枸杞中主要含有花色苷类物质、原花青素和总多酚。其中花色苷类物质 是水溶性植物色素之一，广泛存在于植物的花和果实中，属酚类化合物中的类黄酮，具有清 除体内自由基、抗氧化、抗突变抗癌、抗高血糖活性、降血脂及防治动脉粥 样硬化等作用；原 花青素(Proanthocyanidins或Procyanidins，简称PC，又译原花色素、前花色素等)是植 物中广泛存在的一大类天然多酚化合物的总称，具有清除人体自由基、抗氧化、抗紫外线损 伤、抗致突变、酶抑制等活性；总多酚具有清除自由基、抗动脉硬化、降血脂、抗氧化的功能。但是，藏药黑果枸杞目前还没有完整的质量控制方法，不利于保证藏药黑果枸杞 应用的有效性。
发明内容
本发明所要解决的技术问题是提供一种简单、快速、准确的藏药黑果枸杞质量控 制方法。为解决上述问题，本发明所述的一种藏药黑果枸杞质量控制方法，其特征在于该 方法以总花色苷含量、原花青素含量和总多酚含量的测定作为质量控制指标；其中——总花色苷含量的测定方法是(1)制备样品溶液将0. 03 3g藏药黑果枸杞 置于瓶中，加入10 IOOml盐酸-乙醇溶液，在15 80°C温度下保温1 36小时后稀释 5 25倍即得；(2)测定样品溶液吸光度值用紫外_可见光分光光度计在波长为450 600nm处测定样品溶液吸光度值；(3)计算样品溶液中总花色苷含量；——原花青素含量的测定方法是①制备对照品溶液将甲醇加入到儿茶素对照 品中，制成每Iml含儿茶素0. Img的溶液后即得；②制备标准曲线分别将0. 0,0. 5、1、1. 5、 2、2. 5ml的对照品溶液用甲醇定容至25ml，即得浓度为0. 01 0. 5mg/ml的标准使用液；③ 制备样品溶液在0.01 2g藏药黑果枸杞中加入甲醇，经超声处理10 40分钟后，冷却至 室温，并用甲醇定容至5 250ml，摇勻，即得；④测定样品溶液中原花青素含量在0. 1 2ml样品溶液中，依次加入1 5ml香草醛甲醇溶液、0. 5 2ml浓盐酸，混合均勻，室温下 显色10 20mim后，在波长为400 600nm处比色即得；—总多酚含量的测定方法是(a)制备对照品溶液在1 IOmg没食子酸对照 品中加入水，经超声溶解后定容至2 25ml，即得每Iml含没食子酸0. 25g的溶液；(b)制 备标准曲线分别将0. 0,0. 5,1. 0,1. 5,2. 0,2. 5ml的对照品溶液用水定容至50ml，摇勻，即 得；(c)制备样品溶液将0. 01 2g藏药黑果枸杞加入5 50ml乙醇超声30分钟，并用水 逐级稀释1 50倍，即得样品溶液；(d)测定样品溶液吸光度值在样品溶液中加福林_酚显色剂，摇勻后加入碳酸钠溶液，定容至IOml ；以加入福林-酚显色剂和碳酸钠的溶液为空 白，用紫外-可见光分光光度计在波长为300 SOOnm处测定样品溶液吸光度值；(e)计算 样品溶液中总多酚含量。所述总花色苷含量的测定方法中的步骤(1)中盐酸的质量浓度为0. 01 1%，乙 醇的质量浓度为50 90%。所述原花青素含量的测定方法中的步骤③中超声处理条件是功率为250 400W， 频率35 60KHz。 所述原花青素含量的测定方法中的步骤④中香草醛甲醇溶液的质量浓度为4%。所述总多酚含量的测定方法中的步骤(d)中碳酸钠溶液的质量浓度为20%。本发明与现有技术相比具有以下优点1、由于本发明采用分光光度法测定藏药黑果枸杞中总花色苷、原花青素及总多 酚，而该法具有所用试剂量少、操作简单方便、灵敏度高、精密度高、稳定性好等优点，因此， 适宜测定藏药黑果枸杞的花色苷、原花青素及总多酚，从而实现对藏药黑果枸杞进行保健 功能的有效评价。2、经对本发明进行精密度实验、稳定性实验、回收率实验后，可以看出本发明具有 较高的精密度、在8小时内稳定性良好、准确可靠，可以实现对藏药黑果枸杞有效地质量控制(参见表1、表2、表3)。表1 精密度实验(次数η = 5) 表2 稳定性实验(t = 8h) 表3:回收率实验 3、本发明简单、快速，易于推广。
具体实施例方式下面结合实施例对本发明做进一步说明，下述实施例仅用于说明本发明，而并非 对本发明的限制。实施例1 一种藏药黑果枸杞质量控制方法，该方法以总花色苷含量、原花青素含 量和总多酚含量的测定作为质量控制指标。其中——总花色苷含量的测定方法是(1)制备样品溶液取0.03g藏药黑果枸杞，加入IOmlO. 1 %盐酸-80%乙醇溶液， 在25°C温度下保温24小时后稀释5倍即得。(2)测定样品溶液吸光度值用紫外_可见光分光光度计在波长为540nm处测定 样品溶液吸光度值为1.79。(3)计算样品溶液中总花色苷含量。总花色苷含量(mg/g) = (AX丽XDF)/b，式中A为吸光度；丽为相对分子量(取 449. 2) ；DF为稀释倍数；b为摩尔吸光度(取26900)，得到藏药黑果枸杞的总花色苷的含量 为 10mg/go——原花青素含量的测定原理原花青素是含有儿茶素和表儿茶素单元的聚合 物。原花青素本身无色，在酸性介质中与香草醛反应，可以生产深红色的花青素离子。测定方法是①制备对照品溶液将甲醇加入到儿茶素对照品中，制成每Iml含儿茶素0. Img的 溶液后即得。@制备标准曲线分别将0.0、0.5、1、1.5、2、2.51111的对照品溶液置25ml量 瓶中，甲醇定容至25ml，摇勻，即得浓度为0.01 0.5mg/ml的标准使用液。以甲醇为 空白，在500nm波长测定吸光度A，以浓度C对吸光度A进行回归，得回归方程为A = 5. 4012C+0. 0014，Γ = 0.9997。③制备样品溶液取藏药黑果枸杞0. lg，精密称定，置具塞锥形瓶中，精密加入甲 醇25ml，密塞，称定重量，超声处理(功率250W，频率35KHz) 10分钟后，冷却至室温，再称定 重量，用甲醇补足减失的重量，定容至25ml，摇勻，即得。④测定样品溶液中原花青素含量用锡箔纸将试管包裹严，仅留管口用于加样。取 样品Iml加入试管中，再加3ml的4%香草甲醛溶液混合，然后加入1. 5ml的浓盐酸，彻底混 勻，室温显色10分钟，最后在波长为500nm处比色。含量测定结果经计算，藏药黑果枸杞原花青素含量为1. 6g/100g。
—总多酚含量的测定方法是(a)制备对照品溶液在1 IOmg没食子酸对照品中加入水，经超声(功率400W， 频率57KHz)溶解后定容至2 25ml，即得每Iml含没食子酸0. 25g的溶液。(b)制备标准曲线分别将0. 0,0. 5,1. 0,1. 5,2. 0,2. 5ml的对照品溶液置于50ml 量瓶中，用水定容至50ml，摇勻，即得。在760nm波长测定吸光度A，以浓度C对吸光度A进 行回归，得回归方程为A = 3. 0940C+0. 0178，Γ = 0.9994。(c)制备样品溶液将0. Ig藏药黑果枸杞加入25ml乙醇超声30分钟，并用水逐 级稀释25倍，即得样品溶液；(d)测定样品溶液吸光度值取样品溶液1ml，置IOml量瓶中，加水6ml，加福 林_酚显色剂0. 5ml，摇勻，10分钟内加入20%碳酸钠溶液1. 5ml，定容至刻度10ml，摇勻。 以加入福林_酚显色剂和碳酸钠的溶液为空白，用紫外_可见光分光光度计在波长为760nm 处测定样品溶液吸光度值。
福林-酚显色剂称取IOg钨酸钠和2. 5g钼酸钠，用70ml蒸馏水溶于250ml回流 瓶中，加入5ml磷酸和IOml浓盐酸，混勻，微沸回流2小时，加入1. 5g硫酸锂、5ml蒸馏水 和3滴溴水，开口沸腾15分钟(至溴水挥尽为止)，冷却至室温，定容至100ml，滤过，置棕 色瓶中保存备用。使用时加入1倍蒸馏水稀释即可。20%碳酸钠溶液的配制称取20g无水碳酸钠，置IOOml容量瓶中，加80ml水超声 (功率400W，频率57KHz)溶解，冷却至室温后定容至100ml，摇勻、滤过，即得。(e)计算样品溶液中总多酚含量。总多酚含量(g/g)=稀释后的含量X稀释倍数X样品质量―1，得到藏药黑果枸 杞总多酚含量为4g/100g。实施例2 —种藏药黑果枸杞质量控制方法，该方法以总花色苷含量、原花青素含 量和总多酚含量的测定作为质量控制指标。其中——总花色苷含量的测定方法是(1)制备样品溶液取0.3g藏药黑果枸杞置于瓶中，加入50ml0. 01%盐酸-50% 乙醇溶液，在15°C温度下保温36小时后稀释10倍即得(2)测定样品溶液吸光度值用紫 外_可见光分光光度计在波长为450nm处测定样品溶液吸光度值为0. 33。(3)计算样品溶液中总花色苷含量。总花色苷含量(mg/g) = (AX丽XDF)/b，式中A为吸光度；丽为相对分子量(取 449. 2) ；DF为稀释倍数；b为摩尔吸光度(取26900)，得到藏药黑果枸杞的总花色苷的含量 为 9. 6mg/g0——原花青素含量的测定方法是①制备对照品溶液、②制备标准曲线同实施例1。③制备样品溶液取藏药黑果枸杞O.Olg，精密称定，置具塞锥形瓶中，精密加入 甲醇5ml，密塞，称定重量，超声处理(功率300W，频率50KHz)25分钟后，冷却至室温，再称 定重量，用甲醇补足减失的重量，定容至5ml，摇勻，即得。④测定样品溶液中原花青素含量用锡箔纸将试管包裹严，仅留管口用于加样。取 样品0. Iml加入试管中，再加Iml的4%香草甲醛溶液混合，然后加入0. 5ml的浓盐酸，彻底 混勻，室温显色15分钟，最后在波长为400nm处比色。
含量测定结果经计算，藏药黑果枸杞原花青素含量为1. 54g/100g。——总多酚含量的测定方法是(a)制备对照品溶液、(b)制备标准曲线同实施例
Io(c)制备样品溶液将0. Olg藏药黑果枸杞加入5ml乙醇超声30分钟，并用水逐 级稀释1倍，即得样品溶液；(d)测定样品溶液吸光度值取样品溶液1ml，置IOml量瓶中，加水6ml，加福 林_酚显色剂0. 5ml，摇勻，10分钟内加入20%碳酸钠溶液1. 5ml，定容至刻度10ml，摇勻。 以加入福林_酚显色剂和碳酸钠的溶液为空白，用紫外_可见光分光光度计在波长为300nm 处测定样品溶液吸光度值。福林-酚显色剂和20%碳酸钠溶液的制备同实施例1。
(e)计算样品溶液中总多酚含量。总多酚含量(g/g)=稀释后的含量X稀释倍数X样品质量―1，得到藏药黑果枸 杞总多酚含量为3. 8g/100g。实施例3 —种藏药黑果枸杞质量控制方法，该方法以总花色苷含量、原花青素含 量和总多酚含量的测定作为质量控制指标。其中——总花色苷含量的测定方法是(1)制备样品溶液取将3g藏药黑果枸杞置于瓶中，加入IOOml 盐酸-90%乙 醇溶液，在80°C温度下保温1小时后稀释25即得⑵测定样品溶液吸光度值用紫外-可 见光分光光度计在波长为600nm处测定样品溶液吸光度值为0. 67。(3)计算样品溶液中总花色苷含量。总花色苷含量(mg/g) = (AX丽XDF)/b，式中A为吸光度；丽为相对分子量(取 449. 2) ；DF为稀释倍数；b为摩尔吸光度(取26900)，得到藏药黑果枸杞的总花色苷的含量 为 9. 7mg/g0——原花青素含量的测定方法是①制备对照品溶液、②制备标准曲线同实施例1。③制备样品溶液取藏药黑果枸杞2g，精密称定，置具塞锥形瓶中，精密加入甲醇 250ml，密塞，称定重量，超声处理(功率400W，频率60KHz) 40分钟后，冷却至室温，再称定重 量，用甲醇补足减失的重量，定容至250ml，摇勻，即得。④测定样品溶液中原花青素含量用锡箔纸将试管包裹严，仅留管口用于加样。取 样品2ml加入试管中，再加5ml的4%香草甲醛溶液混合，然后加入2ml的浓盐酸，彻底混 勻，室温显色20分钟，最后在波长为600nm处比色。含量测定结果经计算，藏药黑果枸杞原花青素含量为1. 56g/100g。——总多酚含量的测定方法是(a)制备对照品溶液、(b)制备标准曲线同实施例1。(c)制备样品溶液将2g藏药黑果枸杞加入50ml乙醇超声30分钟，并用水逐级 稀释50倍，即得样品溶液；(d)测定样品溶液吸光度值取样品溶液1ml，置IOml量瓶中，加水6ml，加福 林_酚显色剂0. 5ml，摇勻，10分钟内加入20%碳酸钠溶液1. 5ml，定容至刻度10ml，摇勻。 以加入福林_酚显色剂和碳酸钠的溶液为空白，用紫外_可见光分光光度计在波长为SOOnm处测定样品溶液吸光度值。福林-酚显色剂和20%碳酸钠溶液的制备同实施例1。(e)计算样品溶液中总多酚含量。总多酚含量(g/g)=稀释后的含 量X稀释倍数X样品质量―1，得到藏药黑果枸 杞总多酚含量为3. 89g/100g。
权利要求
一种藏药黑果枸杞质量控制方法，其特征在于该方法以总花色苷含量、原花青素含量和总多酚含量的测定作为质量控制指标；其中——总花色苷含量的测定方法是(1)制备样品溶液将0.03～3g藏药黑果枸杞置于瓶中，加入10～100ml盐酸-乙醇溶液，在15～80℃温度下保温1～36小时后稀释5～25倍即得；(2)测定样品溶液吸光度值用紫外-可见光分光光度计在波长为450～600nm处测定样品溶液吸光度值；(3)计算样品溶液中总花色苷含量；——原花青素含量的测定方法是①制备对照品溶液将甲醇加入到儿茶素对照品中，制成每1ml含儿茶素0.1mg的溶液后即得；②制备标准曲线分别将0.0、0.5、1、1.5、2、2.5ml的对照品溶液用甲醇定容至25ml，即得浓度为0.01～0.5mg/ml的标准使用液；③制备样品溶液在0.01～2g藏药黑果枸杞中加入甲醇，经超声处理10～40分钟后，冷却至室温，并用甲醇定容至5～250ml，摇匀，即得；④测定样品溶液中原花青素含量在0.1～2ml样品溶液中，依次加入1～5ml香草醛甲醇溶液、0.5～2ml浓盐酸，混合均匀，室温下显色10～20mim后，在波长为400～600nm处比色即得；——总多酚含量的测定方法是(a)制备对照品溶液在1～10mg没食子酸对照品中加入水，经超声溶解后定容至2～25ml，即得每1ml含没食子酸0.25g的溶液；(b)制备标准曲线分别将0.0、0.5、1.0、1.5、2.0、2.5ml的对照品溶液用水定容至50ml，摇匀，即得；(c)制备样品溶液将0.01～2g藏药黑果枸杞加入5～50ml乙醇超声30分钟，并用水逐级稀释1～50倍，即得样品溶液；(d)测定样品溶液吸光度值在样品溶液中加福林-酚显色剂，摇匀后加入碳酸钠溶液，定容至10ml；以加入福林-酚显色剂和碳酸钠的溶液为空白，用紫外-可见光分光光度计在波长为300～800nm处测定样品溶液吸光度值；(e)计算样品溶液中总多酚含量。
2.如权利要求1所述的藏药黑果枸杞质量控制方法，其特征在于所述总花色苷含量 的测定方法中的步骤(1)中盐酸的质量浓度为0. 01 1%，乙醇的质量浓度为50 90%。
3.如权利要求1所述的藏药黑果枸杞质量控制方法，其特征在于所述原花青素含量 的测定方法中的步骤③中超声处理条件是功率为250 400W，频率35 60KHz。
4.如权利要求1所述的藏药黑果枸杞质量控制方法，其特征在于所述原花青素含量 的测定方法中的步骤④中香草醛甲醇溶液的质量浓度为4%。
5.如权利要求1所述的藏药黑果枸杞质量控制方法，其特征在于所述总多酚含量的 测定方法中的步骤(d)中碳酸钠溶液的质量浓度为20%。
全文摘要
本发明涉及一种藏药黑果枸杞质量控制方法，该方法以总花色苷含量、原花青素含量和总多酚含量的测定作为质量控制指标，具有所用试剂量少、操作简单方便、灵敏度高、精密度高、稳定性好等优点，可以实现对藏药黑果枸杞进行保健功能的有效评价。
文档编号G01N21/33GK101865836SQ201010200389
公开日2010年10月20日 申请日期2010年6月10日 优先权日2010年6月10日
发明者张兴旺, 文怀秀, 梅丽娟, 赵晓辉, 邵赟, 陈晨, 陶燕铎 申请人:中国科学院西北高原生物研究所