专利名称：同时检测痕量多种环境内分泌干扰物的试剂盒及其应用的制作方法
技术领域：
本发明涉及环境内分泌干扰物检测技术领域，更具体地说是一种能够同时检测痕 量多种环境内分泌干扰物的试剂盒，本发明还涉及所述的试剂盒在检测样品中多种环境内 分泌干扰物中的应用。
背景技术：
环境内分泌干扰物(Environmental endocrinedisrupting chemicals, EDCs)是 指可干扰生物体内保持自身平衡、调节发育过程的内源激素的合成、分泌、运输、结合和代 谢等过程的外源性化学物质。环境内分泌干扰物分为以下几类多氯联苯类、二恶英类、烷 基酚类、邻苯二甲酸二丁酯类、金属类、有机氯化合物环境激素类、植物雌激素类、真菌雌激 素类，广泛存在于除草剂、杀虫剂、杀菌剂、防腐剂、增塑剂和洗涤剂等化工用品中。目前EDCs已成为迫切需要治理的新一代环境污染物，微量的EDCs即可对正常激 素作用产生影响，干扰内分泌机能，引起哺乳动物及人类的生殖障碍、发育异常及某些病理 性损伤。这类物质不仅存在于工业废水、废气和生活污水中，在农产品中也可能存在。如果 EDCs残留不能得到及时、准确地检测，它们就可能进入机体，并在体内直接或间接影响正常 的激素代谢，给人类健康带来严重的危害。建立一种快速的多组分EDCs残留物同时筛检的方法，便成为当前该研究领域亟 需解决的问题之一。目前已有的EDCs检测或筛检方法主要包括体内试验、体外试验、生物 标志物检测及仪器监测方法等。但是这些检测或筛检方法存在不足1.体内试验常采用子宫增重试验和子宫钙结合蛋白CaBP_9k mRNA表达检测和 蛋白分析，该方法反应敏感具有专一性，但是其成本高，灵敏度低，不适于大规模的快速筛 检；2.体外试验主要有E-Screen法、受体竞争试验等，试验本身的特异性较差，容易 出现假阳性结果；3.借助于HPLC或LC-MS联用技术等大型精密仪器建立起来的EDCs仪器检测方 法，对EDCs的检测虽说具有很高的灵敏度，但是该方法不能一次就鉴定出分析物的结构， 往往还需要用GC-MS确认结构，技术成本较高，传统方法所需的时间一般都较长，有的甚至 长达几个小时，操作复杂，不能用于现场的快速检测。4.以上几种方法对于EDCs的检测和分析，一般都存在检测灵敏度低、成本高、结 果假阳性、检测过程复杂、不适于现场快速检测等缺点，因此不能满足实际检测的需要。
发明内容
本发明为了解决以上技术问题，提供了一种检测速度快、选择性高、能同时检测多 种环境内分泌干扰物的试剂盒。本发明还提供了 一种该试剂盒在检测痕量环境内分泌干扰物中的应用。本发明是通过以下方式实现的。
同时检测痕量多种环境内分泌干扰物的试剂盒，其特征在于采用以下步骤制成 的(1)选择化学发光试剂，分别配制每种发光试剂的溶液，所述发光试剂为高锰酸 钾、盐酸和聚山梨酯-80 ；(2)选择功能单体，所述功能单体能与环境内分泌干扰物合成分子印迹溶胶凝 胶；(3)选用环境内分泌干扰物分子为模板分子，将模板分子、功能单体、交联剂、致 孔剂、引发剂和有机溶剂按一定摩尔比混合均勻制成环境内分泌干扰物的分子印迹溶胶凝 胶；(4)利用层层修饰技术，将分子印迹溶胶凝胶修饰到微孔板内表面上，用保鲜膜封 存数小时；(5)将步骤(4)中晾干的修饰微孔板浸泡于洗脱剂中洗脱，清洗，吹干；(6)将步骤(5)中吹干的修饰微孔板的进样器端口分别插入步骤(1)中制得的发 光试剂溶液中，得到所述同时检测痕量多种环境内分泌干扰物的试剂盒。所述的同时检测痕量多种环境内分泌干扰物的试剂盒，其特征还在于所述功能 单体为丙烯酸、甲基丙烯酸或4-乙烯基吡啶；所述交联剂为三羟甲基丙烷三甲基丙烯酸 酯、N、N-亚甲基二丙烯酰胺、3，5_ 二(丙烯酰胺)苯甲酸、乙二醇二甲基丙烯酸酯、二乙烯 基苯或季戊四醇三丙烯酸酯；所述引发剂为偶氮二异丁腈；所述致孔剂为二氯甲烷、氯仿、 乙腈、甲醇、异丙醇、四氯化碳、N，N-二甲基酰胺或二甲基亚砜；所述有机溶剂为二氯甲烷 或四氯化碳。所述的同时检测痕量多种环境内分泌干扰物的试剂盒，其特征还在于所述模 板分子、功能单体、交联剂、致孔剂、引发剂和有机溶剂的摩尔比为0.2 1 2 0.5 5 40 65 0.1 0.15 2. 0 30。所述的同时检测痕量多种环境内分泌干扰物的试剂盒，其特征还在于将所述分 子印迹溶胶凝胶修饰到微孔板内表面上包括以下步骤(a)将微孔板用NaOH超声波清洗，然后用水清洗，吹干；(b)将多种环境内分泌干扰物的分子印迹溶胶凝胶按照一定的顺序修饰于微孔板 内表面上。所述的同时检测痕量多种环境内分泌干扰物的试剂盒，其特征还在于所述洗脱 剂为甲醇。所述的同时检测痕量多种环境内分泌干扰物的试剂盒，其特征还在于步骤(5) 中制得的分子印迹溶胶凝胶修饰的微孔板可室温保存。所述的同时检测痕量多种环境内分泌干扰物的试剂盒，其特征还在于步骤(4) 中用分子印迹溶胶凝胶修饰的微孔板，用保鲜膜封存12小时。权利要求1-7中任一项所述的同时检测痕量多种环境内分泌干扰物的试剂盒在 检测环境内分泌干扰物中的应用，其特征是包括以下步骤将按上述任意一种方法制得的 同时检测痕量多种环境内分泌干扰物的试剂盒连接到微孔板多功能分析仪，对环境样品提 取液中的环境内分泌干扰物进行检测。本发明的有益效果是
4
1、将分子印迹溶胶凝胶修饰于微孔板内表面的方法操作简单，不需要其他物质就 可直接固定于微孔板内表面，避免了其他物质对发光检测的干扰。2、将分子印迹溶胶凝胶修饰于微孔板内表面，试剂使用量少(仅需要几十微升)， 能够实现在十分钟内进行最多96个样品的同时测定。3、本发明所提供的同时检测多种环境内分泌干扰物的试剂盒，经济实用，化学发 光试剂廉价易得。4、本发明所提供的同时检测多种环境内分泌干扰物的试剂盒的特异性强，样品中 其它非特异性分子对检测结果无影响；灵敏度高，可以达到ng级。5.本发明所提供的同时检测多种环境内分泌干扰物的试剂盒简单易操作，不需要 专业的技术人员就可以进行操作。
具体实施例方式实施例1除草剂类2，4，5-三氯联苯氧基乙酸、2，4_ 二氯联苯氧基乙酸、杀草强、荞去津、 甲草胺、除草醚、草克净同时检测痕量7种除草剂类环境内分泌干扰物的试剂盒，其制备方法包括以下步 骤(1)选择能与除草剂类环境内分泌干扰物产生化学发光的发光试剂此1、疆1104、聚 山梨酯-80，分别配制HC1、KMnO4、聚山梨酯-80溶液，装瓶，并在瓶上标示出A、B、C瓶以利 于操作人员使用；(2)选择能与除草剂类环境内分泌干扰物合成分子印迹溶胶凝胶的功能单体甲基 丙烯酸(MAA)；(3)取2，4，5_三氯联苯氧基乙酸、2，4_ 二氯联苯氧基乙酸、杀草强、荞去津、甲 草胺、除草醚、草克净七种模板分子，分别与功能单体甲基丙烯酸(MAA)，交联剂乙二醇二 甲基丙烯酸酯(EGDMA)，致孔剂氯仿，引发剂偶氮二异丁腈，有机溶剂二氯甲烷按摩尔比为 0. 2 2 0. 5 40 0. 1 2.0混合均勻，得到2，4，5-三氯联苯氧基乙酸、2，4-二氯联 苯氧基乙酸、杀草强、荞去津、甲草胺、除草醚、草克净七种除草剂类环境内分泌干扰物的分 子印迹溶胶凝胶；(4)将所用微孔板用lmol/L NaOH超声波清洗，然后用二次蒸水彻底清洗数次，吹 干，利用层层修饰技术，将此7种分子印迹溶胶凝胶按照草克净、除草醚、2，4- 二氯联苯氧 基乙酸、2，4，5_三氯联苯氧基乙酸、甲草胺、荞去津、杀草强的顺序(名称全拼的英文字母 表顺序)从外到内修饰到微孔板内表面。(5)将修饰的微孔板用保鲜膜封存12小时；(6)将步骤(5)中晾干的修饰微孔板浸泡于甲醇溶液中洗脱120分钟，彻底清除 溶胶凝胶中的模板分子，然后用二次蒸水彻底清洗数次，吹干。可以一次性制作几块这样的 微孔板，室温放置就可以，等需要用时随时拿来使用。将微孔板的进样器端口分别插入步骤 (1)中制得的发光试剂溶液A、B、C中，得到同时检测痕量7种除草剂类环境内分泌干扰物 的试剂盒。将制得的同时检测痕量7种环境内分泌干扰物的试剂盒连接到微孔板多功能分析仪，微孔板的进样器端口对A、B、C三种发光试剂自动进样，此时微孔中被测样品和A、B、C 三种试剂作用发光，分析仪测得发光值，然后转入下个微孔的检测，依次类推实现对多种环 境内分泌干扰物的同时测定，检测结果见表1。表1本发明同时检测痕量7种除草剂类环境内分泌干扰物的试剂盒检测结果 从表1中结果可以看出同时检测痕量7种除草剂类环境内分泌干扰物的试剂盒 具有较宽的线性范围、较高的灵敏度和较低的检测限。实施例2杀虫剂类六六六、对硫磷、甲萘威、氯丹、羟基氯丹、滴滴涕、三氯杀螨剂、狄氏剂、 硫丹、七氯、环氧七氯、马拉硫磷、灭多威同时检测痕量13种杀虫剂类环境内分泌干扰物的试剂盒，其制备方法包括以下 步骤(1)选择能与杀虫剂类环境内分泌干扰物产生化学发光的发光试剂此1、疆1104、聚 山梨酯-80，分别配制HC1、KMnO4、聚山梨酯-80溶液，装瓶，并在瓶上标示出A、B、C瓶以利 于操作人员使用；(2)选择能与杀虫剂类环境内分泌干扰物合成分子印迹溶胶凝胶的功能单体丙烯 酸；(3)取六六六、对硫磷、甲萘威、氯丹、羟基氯丹、滴滴涕、三氯杀螨剂、狄氏剂、硫 丹、七氯、环氧七氯、马拉硫磷、灭多威13种模板分子，分别与功能单体丙烯酸(AA)，交联剂 三羟甲基丙烷三甲基丙烯酸酯(TRIM)，致孔剂二氯甲烷，引发剂偶氮二异丁腈，有机溶剂四 氯化碳按摩尔比为0.5 2 3 45 0. 1 2. 2混合均勻，得到六六六、对硫磷、甲萘 威、氯丹、羟基氯丹、滴滴涕、三氯杀螨剂、狄氏剂、硫丹、七氯、环氧七氯、马拉硫磷、灭多威 13种杀虫剂类环境内分泌干扰物的分子印迹溶胶凝胶；(4)将所用微孔板用lmol/L NaOH超声波清洗，然后用二次蒸水彻底清洗数次，吹 干，利用层层修饰技术，将此合成的13种分子印迹溶胶凝胶按照硫丹、氯丹、七氯、滴滴涕、 狄氏剂、对硫磷、甲萘威、六六六、灭多威、环氧七氯、马拉硫磷、羟基氯丹、三氯杀螨剂的顺序(字数由少到多，字数相同的按照全拼的英文字母表顺序)从外到内修饰到微孔板内表(5)将修饰的微孔板用保鲜膜封存11小时；(6)将步骤(5)中晾干的修饰微孔板浸泡于甲醇溶液中洗脱120分钟，彻底清除 溶胶凝胶中的模板分子，然后用二次蒸水彻底清洗数次，吹干。可以一次性制作几块这样的 微孔板，室温放置就可以，等需要用时随时拿来使用。将微孔板的进样器端口分别插入步骤 (1)中制得的发光试剂溶液A、B、C中，得到同时检测痕量13种环境内分泌干扰物的试剂盒。将制得的同时检测痕量13种环境内分泌干扰物的试剂盒连接到微孔板多功能分 析仪，微孔板的进样器端口对A、B、C三种发光试剂自动进样，此时微孔中被测样品和A、B、 C三种试剂作用发光，分析仪测得发光值，然后转入下个微孔的检测，依次类推实现对13种 环境内分泌干扰物的同时测定，检测结果见表2。表2本发明同时检测痕量13种杀虫剂类环境内分泌干扰物的试剂盒检测结果 从表2中结果可以看出同时检测痕量13种杀虫剂类环境内分泌干扰物的试剂盒 具有较宽的线性范围、较高的灵敏度和较低的检测限。实施例3
杀菌剂类六氯苯、代森锰锌、代森锰、代森联、代森锌、乙烯菌核利、福美锌、苯菌 灵同时检测痕量8种杀菌剂类环境内分泌干扰物的试剂盒，其制备方法包括以下步 骤(1)选择能与杀菌剂类环境内分泌干扰物产生化学发光的发光试剂此1、疆1104、聚 山梨酯-80，分别配制HC1、KMnO4、聚山梨酯-80溶液，装瓶，并在瓶上标示出A、B、C瓶以利 于操作人员使用；(2)选择能与杀菌剂类环境内分泌干扰物合成分子印迹溶胶凝胶的功能单体 4-乙烯基吡啶；(3)取六氯苯、代森锰锌、代森锰、代森联、代森锌、乙烯菌核利、福美锌、苯菌灵8 种模板分子，分别与功能单体4-乙烯基吡啶(4-VP)，交联剂N、N-亚甲基二丙烯酰胺，致孔 剂乙腈，引发剂偶氮二异丁腈，有机溶剂二氯甲烷按摩尔比为1 2 5 65 0. 15 30 混合均勻，分别得到8种杀菌剂类环境内分泌干扰物六氯苯、代森锰锌、代森锰、代森联、代 森锌、乙烯菌核利、福美锌、苯菌灵的分子印迹溶胶凝胶；(4)将所用微孔板用lmol/L NaOH超声波清洗，然后用二次蒸水彻底清洗数次，吹 干，利用层层修饰技术，将合成的8种杀菌剂类分子印迹溶胶凝胶按照代森锰、代森联、代 森锌、代森锰锌、福美锌、苯菌灵、六氯苯顺序从外到内修饰到微孔板内表面；(5)将修饰的微孔板用保鲜膜封存13小时；(6)将步骤(5)中晾干的修饰微孔板浸泡于甲醇溶液中洗脱120分钟，彻底清除 溶胶凝胶中的模板分子，然后用二次蒸水彻底清洗数次，吹干。可以一次性制作几块这样的 微孔板，室温放置就可以，等需要用时随时拿来使用。将微孔板的进样器端口分别插入步骤 (1)中制得的发光试剂溶液A、B、C中，得到同时检测痕量8种环境内分泌干扰物的试剂盒。将制得的同时检测痕量8种环境内分泌干扰物的试剂盒连接到微孔板多功能分 析仪，微孔板的进样器端口对A、B、C三种发光试剂自动进样，此时微孔中被测样品和A、B、C 三种试剂作用发光，分析仪测得发光值，然后转入下个微孔的检测，依次类推实现对8种环 境内分泌干扰物的同时测定，检测结果见表3。表3本发明同时检测痕量8种杀菌剂类环境内分泌干扰物的试剂盒检测结果 从表3中结果可以看出同时检测痕量8种杀菌剂类环境内分泌干扰物的试剂盒 具有较宽的线性范围、较高的灵敏度和较低的检测限。实施例4防腐剂类五氯酚、三丁基锡、三苯基锡同时检测痕量3种防腐剂类环境内分泌干扰物的试剂盒，其制备方法包括以下步 骤(1)选择能与防腐剂类环境内分泌干扰物产生化学发光的发光试剂此1、疆1104、聚 山梨酯-80，分别配制HC1、KMnO4、聚山梨酯-80溶液，装瓶，并在瓶上标示出A、B、C瓶以利 于操作人员使用；(2)选择能与防腐剂类环境内分泌干扰物合成分子印迹溶胶凝胶的功能单体 4-乙烯基吡啶；(3)取五氯酚、三丁基锡、三苯基锡3种模板分子，分别与功能单体4-乙烯基吡啶， 交联剂3，5_ 二(丙烯酰胺)苯甲酸，致孔剂甲醇，引发剂偶氮二异丁腈，有机溶剂二氯甲烷 按摩尔比为0.5 2 3 45 0. 1 4.0，混合均勻，得到五氯酚、三丁基锡、三苯基锡3 种杀菌剂类环境内分泌干扰物的分子印迹溶胶凝胶；(4)将所用微孔板用lmol/L NaOH超声波清洗，然后用二次蒸水彻底清洗数次，吹 干，利用层层修饰技术，将3种杀菌剂类环境内分泌干扰物的分子印迹溶胶凝胶按照三苯 基锡、三丁基锡、五氯酚的顺序从外到内修饰到微孔板内表面；(5)将修饰的微孔板用保鲜膜封存12小时；(6)将步骤(5)中晾干的修饰微孔板浸泡于甲醇溶液中洗脱120分钟，彻底清除 溶胶凝胶中的模板分子，然后用二次蒸水彻底清洗数次，吹干。可以一次性制作几块这样的 微孔板，室温放置就可以，等需要用时随时拿来使用。将微孔板的进样器端口分别插入步骤 (1)中制得的发光试剂溶液A、B、C中，得到同时检测痕量3种防腐剂类环境内分泌干扰物 的试剂盒。将制得的同时检测痕量3种防腐剂类环境内分泌干扰物的试剂盒连接到微孔板多功能分析仪，微孔板的进样器端口对A、B、C三种发光试剂自动进样，此时微孔中被测样 品和A、B、C三种试剂作用发光，分析仪测得发光值，然后转入下个微孔的检测，依次类推实 现对3种防腐剂类环境内分泌干扰物的同时测定，检测结果见表4。表4本发明同时检测痕量3种防腐剂类环境内分泌干扰物的试剂盒检测结果 从表4中结果可以看出同时检测痕量3种防腐剂类环境内分泌干扰物的试剂盒 具有较宽的线性范围、较高的灵敏度和较低的检测限。实施例5塑料增塑剂类邻苯三甲酸双(2-乙基)己酯，邻苯二甲酸苄酯，邻苯二甲酸二正 丁酯，邻苯二甲酸双环己酯，邻苯二甲酸双二乙酯、己二酸双-2-乙基己酯、邻苯二甲酸二 丙酯同时检测痕量7种塑料增塑剂类环境内分泌干扰物的试剂盒，其制备方法包括以 下步骤(1)选择能与除草剂类环境内分泌干扰物产生化学发光的发光试剂此1、疆1104、聚 山梨酯-80，分别配制HC1、KMnO4、聚山梨酯-80溶液，装瓶，并在瓶上标示出A、B、C瓶以利 于操作人员使用；(2)选择能与塑料增塑剂类环境内分泌干扰物合成分子印迹溶胶凝胶的功能单体 丙烯酸；(3)取邻苯三甲酸双(2-乙基)己酯，邻苯二甲酸苄酯，邻苯二甲酸二正丁酯，邻苯 二甲酸双环己酯，邻苯二甲酸双二乙酯、己二酸双-2-乙基己酯、邻苯二甲酸二丙酯7种模 板分子，分别与功能单体丙烯酸，交联剂二乙烯基苯(DVB)，致孔剂N，N-二甲基酰胺，引发 剂偶氮二异丁腈，有机溶剂二氯甲烷按摩尔比为0.7 2 3 60 0. 12 15，混合均 勻，得到7种塑料增塑剂类环境内分泌干扰物分子印迹溶胶凝胶；(4)将所用微孔板用lmol/L NaOH超声波清洗，然后用二次蒸水彻底清洗数次，吹 干，利用层层修饰技术，将7种塑料增塑剂类环境内分泌干扰物分子印迹溶胶凝胶按照己 二酸双-2-乙基己酯、邻苯二甲酸二丙酯、邻苯二甲酸二正丁酯、邻苯二甲酸双二乙酯、邻 苯二甲酸双环己酯、邻苯三甲酸双(2-乙基)己酯、邻苯二甲酸苄酯顺序从外到内修饰到微 孔板内表面；(5)将修饰的微孔板用保鲜膜封存12小时；(6)将步骤(5)中晾干的修饰微孔板浸泡于甲醇溶液中洗脱120分钟，彻底清除溶胶凝胶中的模板分子，然后用二次蒸水彻底清洗数次，吹干。可以一次性制作几块这样的 微孔板，室温放置就可以，等需要用时随时拿来使用。将微孔板的进样器端口分别插入步骤 (1)中制得的发光试剂溶液A、B、C中，得到同时检测痕量7种塑料增塑剂类环境内分泌干 扰物的试剂盒。将制得的同时检测痕量7种塑料增塑剂类环境内分泌干扰物的试剂盒连接到微 孔板多功能分析仪，微孔板的进样器端口对A、B、C三种发光试剂自动进样，此时微孔中被 测样品和A、B、C三种试剂作用发光，分析仪测得发光值，然后转入下个微孔的检测，依次类 推实现对7种塑料增塑剂类环境内分泌干扰物的同时测定，检测结果见表5。表5本发明同时检测痕量7种塑料增塑剂类环境内分泌干扰物的试剂盒检测结果 从表5中结果可以看出同时检测痕量7种塑料增塑剂类环境内分泌干扰物的试 剂盒具有较宽的线性范围、较高的灵敏度和较低的检测限。实施例6洗涤剂类C6烷基苯酚、壬基苯酚、4-辛基苯酚同时检测痕量3种洗涤剂类环境内分泌干扰物的试剂盒，其制备方法包括以下步 骤(1)选择能与洗涤剂类环境内分泌干扰物产生化学发光的发光试剂此1、疆1104、聚 山梨酯-80，分别配制HC1、KMnO4、聚山梨酯-80溶液，装瓶，并在瓶上标示出A、B、C瓶以利 于操作人员使用；(2)选择能与洗涤剂类环境内分泌干扰物合成分子印迹溶胶凝胶的功能单体甲基 丙烯酸；(3)取C6烷基苯酚、壬基苯酚、4-辛基苯酚3种模板分子，分别与功能单体甲基丙 烯酸(MAA)，交联剂季戊四醇三丙烯酸酯(PETRA)，致孔剂二甲基亚砜，引发剂偶氮二异丁 腈，有机溶剂二氯甲烷按摩尔比为1 2 1 55 0. 1 15混合均勻，得到3种洗涤剂 类环境内分泌干扰物的分子印迹溶胶凝胶；(4)将所用微孔板用lmol/L NaOH超声波清洗，然后用二次蒸水彻底清洗数次，吹干，利用层层修饰技术，将3种洗涤剂类环境内分泌干扰物分子印迹溶胶凝胶按照C6烷基 苯酚、4-辛基苯酚、壬基苯酚顺序修饰到微孔板内表面；(5)将修饰的微孔板用保鲜膜封存12小时；(6)将步骤(5)中晾干的修饰微孔板浸泡于甲醇溶液中洗脱120分钟，彻底清除 溶胶凝胶中的模板分子，然后用二次蒸水彻底清洗数次，吹干。可以一次性制作几块这样的 微孔板，室温放置就可以，等需要用时随时拿来使用。将微孔板的进样器端口分别插入步骤 (1)中制得的发光试剂溶液A、B、C中，得到同时检测痕量3种环境内分泌干扰物的试剂盒。将制得的同时检测痕量3种环境内分泌干扰物的试剂盒连接到微孔板多功能分 析仪，微孔板的进样器端口对A、B、C三种发光试剂自动进样，此时微孔中被测样品和A、B、C 三种试剂作用发光，分析仪测得发光值，然后转入下个微孔的检测，依次类推实现对3种环 境内分泌干扰物的同时测定，检测结果见表6。表6本发明同时检测痕量3种洗涤剂类环境内分泌干扰物的试剂盒检测结果 从表6中结果可以看出同时检测痕量3种洗涤剂类环境内分泌干扰物的试剂盒 具有较宽的线性范围、较高的灵敏度和较低的检测限。
权利要求
一种同时检测痕量多种环境内分泌干扰物的试剂盒，其特征在于采用以下步骤制成的(1)选择化学发光试剂，分别配制每种发光试剂的溶液，所述发光试剂为高锰酸钾、盐酸和聚山梨酯 80；(2)选择功能单体，所述功能单体能与环境内分泌干扰物合成分子印迹溶胶凝胶；(3)选用环境内分泌干扰物分子为模板分子，将模板分子、功能单体、交联剂、致孔剂、引发剂和有机溶剂按一定摩尔比混合均匀制成环境内分泌干扰物的分子印迹溶胶凝胶；(4)利用层层修饰技术，将分子印迹溶胶凝胶修饰到微孔板内表面上，用保鲜膜封存数小时；(5)将步骤(4)中晾干的修饰微孔板浸泡于洗脱剂中洗脱，清洗，吹干；(6)将步骤(5)中吹干的修饰微孔板的进样器端口分别插入步骤(1)中制得的发光试剂溶液中，得到所述同时检测痕量多种环境内分泌干扰物的试剂盒。
2.根据权利要求1中所述的同时检测痕量多种环境内分泌干扰物的试剂盒，其特征在 于所述功能单体为丙烯酸、甲基丙烯酸或4-乙烯基吡啶；所述交联剂为三羟甲基丙烷三 甲基丙烯酸酯、N、N-亚甲基二丙烯酰胺、3，5_ 二(丙烯酰胺)苯甲酸、乙二醇二甲基丙烯酸 酯、二乙烯基苯或季戊四醇三丙烯酸酯；所述引发剂为偶氮二异丁腈；所述致孔剂为二氯 甲烷、氯仿、乙腈、甲醇、异丙醇、四氯化碳、N，N-二甲基酰胺或二甲基亚砜；所述有机溶剂 为二氯甲烷或四氯化碳。
3.根据权利要求1中所述的同时检测痕量多种环境内分泌干扰物的试剂盒，其特 征在于所述模板分子、功能单体、交联剂、致孔剂、引发剂和有机溶剂的摩尔比为0. 2 1 2 0.5 5 40 65 0. 1 0. 15 2. 0 30。
4.根据权利要求1中所述的同时检测痕量多种环境内分泌干扰物的试剂盒，其特征在 于将所述分子印迹溶胶凝胶修饰到微孔板内表面上包括以下步骤(a)将微孔板用NaOH超声波清洗，然后用水清洗，吹干；(b)将多种环境内分泌干扰物的分子印迹溶胶凝胶按照一定的顺序修饰于微孔板内表 面上。
5.根据权利要求1中所述的同时检测痕量多种环境内分泌干扰物的试剂盒，其特征在 于所述洗脱剂为甲醇。
6.根据权利要求1中所述的同时检测痕量多种环境内分泌干扰物的试剂盒，其特征在 于步骤(5)中制得的分子印迹溶胶凝胶修饰的微孔板可室温保存。
7.根据权利要求1中所述的同时检测痕量多种环境内分泌干扰物的试剂盒，其特征在 于步骤⑷中用分子印迹溶胶凝胶修饰的微孔板，用保鲜膜封存12小时。
8.—种权利要求1-7中任一项所述的同时检测痕量多种环境内分泌干扰物的试剂盒 在检测环境内分泌干扰物中的应用，其特征是包括以下步骤将按上述任意一种方法制得 的同时检测痕量多种环境内分泌干扰物的试剂盒连接到微孔板多功能分析仪，对环境样品 提取液中的环境内分泌干扰物进行检测。
全文摘要
本发明涉及环境内分泌干扰物检测领域，提供了一种同时检测多种环境内分泌干扰物的试剂盒及其应用。采用以下步骤制成分别配置高锰酸钾、HCL和聚山梨酯-80溶液；将模板分子、功能单体、交联剂、致孔剂、引发剂和有机溶剂按一定摩尔比混合均匀制成环境内分泌干扰物分子印迹溶胶凝胶；将分子印迹溶胶凝胶修饰到微孔板内表面，保鲜膜封存数小时；修饰微孔板浸泡于洗脱剂中洗脱；微孔板进样器端口分别插入发光试剂溶液中，得到同时检测痕量多种环境内分泌干扰物的试剂盒。将试剂盒连接到微孔板多功能分析仪，对环境样品提取液中的环境内分泌干扰物进行检测。本发明操作简单，试剂使用量少，经济实用，化学发光试剂廉价易得，灵敏度高，简单易操作。
文档编号G01N21/76GK101893574SQ20101021025
公开日2010年11月24日 申请日期2010年6月28日 优先权日2010年6月28日
发明者万夫伟, 于京华, 张丛丛, 葛慎光, 葛磊, 赵佩妮, 颜梅, 高伟强, 黄加栋 申请人:济南大学