专利名称：Spon2的新用途的制作方法
技术领域：
本发明涉及SP0N2的新用途。
背景技术：
前列腺癌是北美国家男性中最常见的恶性肿瘤之一，2008年美国新确诊为前列腺癌的患者占该年新确诊为恶性肿瘤患者的25%。在我国，随着人口结构逐步老龄化，前列腺癌的发病率也在逐年增高。肿瘤血清标志物的是目前研究的热点。理想的肿瘤血清标志物应该有如下的特点能够区分高危与健康人群，能够用于肿瘤的诊断，方法简单、成本低廉，能够用于肿瘤的临床分期评估，能够用于肿瘤的治疗效果评估，能够用于预测肿瘤的转移与复发。PSA是目前应用最为广泛的前列腺癌血清标志物。尽管PSA筛查带来了诸多好处， 但近年来也饱受争议和质疑。近些年来，发现PSA检测的对前列腺癌的特异性较差，良性前列腺增生和前列腺炎患者的血清PSA也会有所升高。除此之外，血清PSA水平在4 IOng/ ml之间属于灰区，难以区分前列腺的良性病变与恶性病变。还有一些标志物，或者临床应用较为局限，或者效果不是很理想。寻找能够替代PSA或弥补PSA缺陷的血清诊断标志物是十分必要的。脊椎蛋白2(SP0N2，Spondin-2，Mindin，DIL-l)属细胞外基质蛋白质类，因在癌变与非癌变的肺泡细胞中差异表达而得名。脊椎蛋白2的氨基酸序列为SEQ ID NO :1。前列腺特异性抗原(PSA)的氨基酸序列如SEQ ID NO 2所示。
发明内容
本发明的一个目的是提供一种抗脊椎蛋白2的抗体、检测脊椎蛋白2的试剂盒的新用途。抗脊椎蛋白2的抗体的新用途为抗脊椎蛋白2的抗体在制备用于辅助诊断前列腺癌的试剂盒中的应用。所述抗脊椎蛋白2的抗体为抗脊椎蛋白2的单克隆抗体和/或抗脊椎蛋白2的多克隆抗体；所述抗脊椎蛋白2的单克隆抗体为鼠来源的抗脊椎蛋白2的单克隆抗体；所述抗脊椎蛋白2的多克隆抗体为羊来源的抗脊椎蛋白2的多克隆抗体。上述抗体均是从商业途径得到的抗体，或经过细胞体外培养得到的抗体；羊来源的抗脊椎蛋白2的多克隆抗体具体可购自R&D公司，产品目录号为AF-2609 ；鼠来源的抗脊椎蛋白2的单克隆抗体具体可购自Abnova公司，产品目录号为H00010417-M01J。检测脊椎蛋白2的试剂盒的新用途是检测脊椎蛋白2的试剂盒在制备用于辅助诊断前列腺癌的试剂盒中的应用。检测脊椎蛋白2的试剂盒为检测脊椎蛋白2的酶联免疫试剂盒或检测脊椎蛋白2 的免疫组化试剂盒。
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脊椎蛋白2在设计和/或制备用于辅助诊断前列腺癌的试剂盒中的应用也属于本发明的保护范围。上述任一所述检测脊椎蛋白2的酶联免疫试剂盒在制备用于辅助诊断前列腺癌的试剂盒中的应用中，所述前列腺癌为如下1)或2)所示DGleason评分为4 6分的前列腺癌、Gleason评分为7分的前列腺癌、Gleason 评分为8分的前列腺癌或Gleason评分为9 10分的前列腺癌；2)前列腺特异性抗原阴性的前列腺癌；检测脊椎蛋白2的试剂盒检测脊椎蛋白2的免疫组化试剂盒在制备用于辅助诊断前列腺癌的试剂盒中的应用中，所述前列腺癌为如下I或II或III所示I、Gleason评分为7 8分的前列腺癌或Gleason评分彡6分的前列腺癌；II、WHO评分为2级的前列腺癌；
III、有转移灶的前列腺癌。上述任一所述检测脊椎蛋白2的酶联免疫试剂盒在制备用于辅助诊断前列腺癌的试剂盒中的应用中，所述前列腺特异性抗原阴性为血清中前列腺特异性抗原浓度小于等于 10ng/mlo上述任一所述检测脊椎蛋白2的酶联免疫试剂盒在制备用于辅助诊断前列腺癌的试剂盒中的应用中，所述检测脊椎蛋白2的酶联免疫试剂盒由鼠来源的抗脊椎蛋白2的单克隆抗体、羊来源的抗脊椎蛋白2的多克隆抗体、标准品溶液、包被缓冲液、封闭液、洗涤缓冲液、终止液、底物溶液和酶标抗体组成；所述包被缓冲液由碳酸钠、碳酸氢钠和水组成；所述碳酸钠在所述包被缓冲液中的浓度为1. 59g/L，所述碳酸氢钠在所述包被缓冲液中的浓度为2. 93g/L ；所述洗涤缓冲液由氯化钠、氯化钾、磷酸氢二钠、磷酸二氢钾、Tween 20和水组成； 氯化钠在所述洗涤缓冲液中的浓度是8g/L，氯化钾在所述洗涤缓冲液中的浓度是0. 2g/L， 磷酸氢二钠在所述洗涤缓冲液中的浓度是1. 44g g/L，磷酸二氢钾在所述洗涤缓冲液中的浓度是0. Mg/L，Tween 20在所述洗涤缓冲液中的浓度是0. 1 % (体积百分比)；所述封闭液由所述洗涤缓冲液和牛血清白蛋白组成，牛血清白蛋白在所述封闭液中的浓度为10g/L ；所述终止液为2M的硫酸水溶液；所述酶标抗体为HRP标记的山羊抗小鼠抗体；所述标准品溶液为所述封闭液与所述脊椎蛋白2组成脊椎蛋白2浓度不同的如下溶液100，50，25，12. 5,6. 3,3. 1 和 1. 6ng/ml。上述检测脊椎蛋白2的酶联免疫试剂盒和免疫组化试剂盒还可从商业途径得到； 上述检测脊椎蛋白2的免疫组化试剂盒具体可为山羊二步法免疫组化试剂盒，具体可以购自中杉金桥生物公司，产品目录号为PV-9003。上述任一所述检测脊椎蛋白2的酶联免疫试剂盒在制备用于辅助诊断前列腺癌的试剂盒中的应用中，所述检测脊椎蛋白2的酶联免疫试剂盒中，所述包被缓冲液与所述羊来源的抗脊椎蛋白2的多克隆抗体组成抗体浓度为630ng/ml的溶液；所述封闭液与鼠来源的抗脊椎蛋白2的单克隆抗体组成抗体浓度为5ug/ml的溶液；所述封闭液与酶标抗体组成酶标抗体浓度为80ng/ml的溶液；
所述脊椎蛋白2的氨基酸序列如SEQ ID NO 1所示；所述前列腺特异性抗原的氨基酸序列如SEQ ID NO 2所示。本发明的另一个目的是提供一种用于辅助诊断前列腺癌的酶联免疫试剂盒。本发明所提供的用于辅助诊断前列腺癌的酶联免疫试剂盒由以下物质组成上述任一所述抗脊椎蛋白2的抗体、标准品溶液、包被缓冲液、封闭液、洗涤缓冲液、终止液和酶标抗体。上述酶联免疫试剂盒中，所述抗体为鼠来源的抗脊椎蛋白2的单克隆抗体和羊来源的抗脊椎蛋白2的多克隆抗体；所述包被缓冲液由碳酸钠、碳酸氢钠和水组成；所述碳酸钠在所述包被缓冲液中的浓度为1. 59g/L，所述碳酸氢钠在所述包被缓冲液中的浓度为2. 93g/L ；所述洗涤缓冲液由氯化钠、氯化钾、磷酸氢二钠、磷酸二氢钾、Tween 20和水组成； 氯化钠在所述洗涤缓冲液中的浓度是8g/L，氯化钾在所述洗涤缓冲液中的浓度是0. 2g/L， 磷酸氢二钠在所述洗涤缓冲液中的浓度是1.44g g/L，磷酸二氢钾在所述洗涤缓冲液中的浓度是0. 24g/L, Tween 20在所述洗涤缓冲液中的浓度是0. (体积百分比)；所述封闭液由所述洗涤缓冲液和牛血清白蛋白组成，牛血清白蛋白在所述封闭液中的浓度为10g/L ；所述终止液为2M的硫酸水溶液；所述酶标抗体为HRP标记的山羊抗小鼠抗体；所述标准品溶液为所述封闭液与所述脊椎蛋白2组成脊椎蛋白2浓度不同的如下溶液100，50，25，12. 5,6. 3,3. 1 和 1. 6ng/ml。上述任一所述酶联免疫试剂盒中，所述包被缓冲液与所述羊来源的抗脊椎蛋白2 的多克隆抗体组成抗体浓度为630ng/ml的溶液；所述封闭液与鼠来源的抗脊椎蛋白2的单克隆抗体组成抗体浓度为5ug/ml的溶液；所述封闭液与酶标抗体组成酶标抗体浓度为 80ng/ml的溶液。实验证明，用检测SP0N2的酶联免疫试剂盒对13例正常人，4例良性前列腺增生， 72例前列腺癌患者血清中的SP0N2进行检测，结果前列腺癌患者中SP0N2的含量显著高于正常人或良性前列腺增生者，表明通过检测血清中SP0N2的含量可以诊断前列腺癌；尤其突出的是，SP0N2在Gleason评分4 6分的前列腺癌患者血清中的含量与正常人差异极显著，SP0N2在PSA水平小于lOng/ml前列腺癌患者血清中的含量与正常人差异极显著，证明用SP0N2诊断前列腺癌精确度更高更准确。实验还证明，用检测SP0N2的免疫组化试剂盒对10例正常和前列腺癌旁组织、19 例良性前列腺增生和44例前列腺癌组织检测。结果SP0N2在前列腺癌组织中明显比正常组织和良性前列腺增生组织中阳性率升高，表达增强；更突出的是，SP0N2在诊断Gleason 评分(7 8)、WH0分级2级的前列腺癌、发生转移的前列腺癌组织中染色增强更为显著，前列腺癌中SP0N2的染色强度与PSA呈正相关，但其表达与良性病变差异明显，远远优于PSA。 证明用SP0N2诊断前列腺癌精确度更高更准确。
图1为双夹心ELISA法检测SP0N2浓度的标准曲线。
图2为SP0N2在前列腺癌患者血清中较正常人和良性前列腺增生患者明显上调。 横线代表中位数值，差异用Willcoxon Two-Sample Test进行统计分析。图3为SP0N2有助于血清PSA水平小于lOng/ml前列腺癌患者的诊断。图4为半定量RT-PCR证实SP0N2仅在AR阳性的前列腺癌细胞系中表达。图5为胞外蛋白Wfestern Blot证实SP0N2仅在AR阳性的前列腺癌细胞系中表达。图6为前列腺癌患者的组织标本中PSA的染色强度和SP0N2的染色强度呈正相关。P值用Spearman相关进行计算。(r = Spearman相关系数)。图7为SP0N2和PSA在正常前列腺组织，良性前列腺增生组织和不同Gleason评分、不同WHO分级和 Μ分期的前列腺癌组织中的表达。用HE染色作为参照，照片所示为连续切片的组织芯片上同一个组织点的同一位置。
具体实施方式
下述实施例中所使用的实验方法如无特殊说明，均为常规方法。
下述实施例中所用的材料、试剂等，如无特殊说明，均可从商业途径得
下述实施例中使用的培养基、抗体、化学试剂如下
名称产地货号
氯化钠国产分析纯
氯化钾国产分析纯
磷酸氢二钠国产分析纯
磷酸二氢钾国产分析纯
Tween 20国产分析纯
HRP标记山羊抗小鼠中杉金桥ZB-2305
IgG(H+L)
SP0N2羊多克隆抗体R&D公司AF-2609
(Anti-human Mindin
Antibody)
山羊二步法免疫组化试剂盒中杉金桥生物PV-9003
免疫组化专用磷酸盐缓冲液中杉金桥生物ZLI-9061
(0. OlM PH = 7. 2 7. 4)
柠檬酸盐抗原修复液(0.01中杉金桥生物ZLI9064
M PH = 6. 0)
DAB显色试剂盒中杉金桥生物ZLI-9031
前列腺癌组织芯片陕西超英生物科技(编号 PR807)
二甲苯国产分析纯
中性树胶国产分析纯
苏木素中杉金桥生物ZLI-9610
氨水国产分析纯
碳酸氢钠国产分析纯
牛血清清蛋白(BSA)美国Proliant公司RF101
可溶性单组分TMB底物溶天根科技PA107-01
液
浓硫酸国产分析纯
SP0N2鼠单克隆抗体AbnovaH00010417-M01J
(SP0N2 monoclonal
antibody (MOlJ), clone 3C6)
SP0N2 标准品(SP0N2AbnovaH00010417-P01
Recombinant Protein(POl))
PSA羊多克隆抗体R&D公司AF1344
(Anti-human Kallikrein
3/PSA Antibody)
下述实施例中使用的主要仪器设备如下
免疫组化笔中杉金桥生物ZLI-9305
96孔酶标板CorningCostar 9018
1X70荧光倒置显微镜Olympus
酶联检测仪Bio-Rad
实施例1、用于诊断前列腺癌的试剂盒
本实施例中，检测样本中SP0N2或PSA的含量值均用M(Qk)表示，M表示样本中
SP0N2含量的中位数表示样本中SP0N2含量的四分位数间距，即( =上四分位数值与下四分位数值之差的绝对值。一、试剂盒组成1、包被抗体羊来源的抗脊椎蛋白2的多克隆抗体(SP0N2羊多克隆抗体)。2、结合抗体鼠来源的抗脊椎蛋白2的单克隆抗体(SP0N2鼠单克隆抗体)。3、标准品脊椎蛋白2。封闭液与脊椎蛋白2组成脊椎蛋白2浓度不同的如下溶液100，50，25，12. 5,6. 3,3. 1 和 1. 6ng/ml。4、包被缓冲液由碳酸钠、碳酸氢钠和水组成；所述碳酸钠在所述包被缓冲液中的浓度为1. 59g/L，所述碳酸氢钠在所述包被缓冲液中的浓度为2. 93g/L ；5、洗涤缓冲液由氯化钠、氯化钾、磷酸氢二钠、磷酸二氢钾、Tween 20和水组成； 氯化钠在所述洗涤缓冲液中的浓度是8g/L，氯化钾在所述洗涤缓冲液中的浓度是0. 2g/L， 磷酸氢二钠在所述洗涤缓冲液中的浓度是1. 44g/L，磷酸二氢钾在所述洗涤缓冲液中的浓度是0. Mg/L，Tween 20在所述洗涤缓冲液中的浓度是0. 1 % (体积百分比)；6、封闭液由所述洗涤缓冲液和牛血清白蛋白组成，牛血清白蛋白在所述封闭液中的浓度为10g/L。7、终止液2M的硫酸水溶液；8、底物溶液的组成四甲基联苯胺(3，3，，5，5，-Tetramethylbenzidine, TMB)的水溶液。9、酶标抗体HRP标记的山羊抗小鼠抗体。10、如下溶液1)包被抗体的溶液由包被缓冲液与包被抗体组成，包被抗体在溶液中的浓度为630ng/ml ；2)结合抗体的溶液由封闭液与结合抗体组成，结合抗体在溶液中的浓度为5ug/ ml ；3)酶标抗体的溶液由封闭液与酶标抗体组成，酶标抗体在溶液中的浓度为 80ng/ml。二、试剂盒制备碳酸盐包被缓冲液按照如下方法配制向900ml去离子水中加入1. 59g碳酸钠和 2. 93g碳酸氢钠，去离子水定容至1L。ELISA洗涤缓冲液(PBST)按照如下方法配制向900ml蒸馏水中加入8g氯化钠， 0. 2g氯化钾，1. 44g磷酸氢二钠，0. 24g磷酸二氢钾，调PH值至7. 4，用蒸馏水定容至1L，高压灭菌后冷却至室温，加入0. (体积百分比)Tween 20试剂混勻后使用。ELISA封闭液向上述ELISA洗涤缓冲液加入IOg牛血清白蛋白(BSA)，用ELISA 洗涤缓冲液定容至1L。ELISA反应终止液2M硫酸水溶液。三、试剂盒的应用(一)SP0N2双夹心ELISA标准曲线的建立1、用碳酸盐包被缓冲液稀释SP0N2羊多克隆抗体(Anti-human Mindin Antibody) 630ng/ml，置于酶联板中每孔100 μ 1 4°C包被过夜；2、用ELISA洗涤缓冲液洗酶联板3次；3、加入 ELISA 封闭液 100 μ 1 每孔，37°C 2h ；4、用 ELISA 封闭液梯度稀释 SP0N2 标准品(SP0N2 Recombinant Protein(POl)) 浓度分别为100，50，25，12. 5，6. 3，3. 1和1. 6ng/ml，取未加标准品的ELISA封闭液作为空白对照，每个浓度做两个重复。每孔100 μ 1置于酶联板中，37°C 2h ；5、用ELISA洗涤缓冲液洗酶联板3次；6、用 ELISA封闭液稀释 SP0N2 鼠单克隆抗体(SP0N2monoclonal antibody (MOlJ)， clone 3C6)至 5μ g/ml，每孔 100 μ 1 置于酶联板中，37°C 2h ；7、用ELISA洗涤缓冲液洗酶联板3次；8、用ELISA封闭液稀释HRP标记山羊抗小鼠IgG (H+L)至80ng/ml，每孔100 μ 1置于酶联板中，37 °C 2h ；9、用ELISA洗涤缓冲液洗酶联板3次；10、每孔加入100 μ 1可溶性TMB单组分底物溶液，避光15_20min ；11、加入ELISA中止液每孔100 μ 1中止反应；12、读取每孔450nm光吸收读数，减去570nm光吸收读数，即为该孔读数，取两个孔的平均值作为该浓度的读数；13、每个浓度的读数减去空白对照读数后，取对数，与标准品浓度的对数拟合线性关系。获得的标准曲线如图1 所示。Y=L 5763x+2. 5237，R2 = 0. 9768.( 二)用建立的双夹心ELISA法检测患者血清检测89份人血清标本，包括13例正常老年人(Normal)，4例良性前列腺增生患者(BPH)，72例前列腺癌患者的血清(PCa)。血清标本的采取均经过患者和正常老年人的同
辰、ο检测方法如下1、用碳酸盐包被缓冲液稀释SP0N2羊多克隆抗体(Anti-human Mindin Antibody) 630ng/ml，置于酶联板中每孔100 μ 1 4°C包被过夜；2、用ELISA洗涤缓冲液洗酶联板3次；3、加入 ELISA 封闭液 100 μ 1 每孔，37°C 2h ；4、按待测血清ELISA封闭液=1 2稀释待测血清，取未加标准品的ELISA封闭液作为空白对照。每孔100μ 1置于酶联板中，37°C 2h ；5、用ELISA洗涤缓冲液洗酶联板3次；6、用 ELISA封闭液稀释 SP0N2 鼠单克隆抗体(SP0N2monoclonal antibody (MOlJ)， clone 3C6)至 5μ g/ml，每孔 100 μ 1 置于酶联板中，37°C 2h ；7、用ELISA洗涤缓冲液洗酶联板3次；8、用ELISA封闭液稀释HRP标记山羊抗小鼠IgG (H+L)至80ng/ml，每孔100 μ 1置于酶联板中，37 °C 2h ；9、用ELISA洗涤缓冲液洗酶联板3次；10、每孔加入100 μ 1可溶性TMB单组分底物溶液，避光15_20min ；11、加入ELISA中止液每孔100 μ 1中止反应；12、读取每孔450nm光吸收读数，减去570nm光吸收读数，即为该孔读数；13、每个孔的读数减去空白对照读数后，取对数，代入标准曲线，取3XlgH)(代入曲线所得值)即为血清SP0N2浓度。用Willcoxon Two-Sample Test统计分析正常群体中SP0N2的含量与前列腺癌患者群体中SP0N2的含量差异是否显著。结果如表1和图2所示。结果前列腺癌患者血清中SP0N2含量较正常人或所有的良性病变者有明显的上调(***，P小于0. 001)。应用Willcoxon Two-Sample Test确认其差异具有统计学意义。表明，可以用该试剂盒诊断前列腺癌。表1.应用双夹心ELISA检测SP0N2在正常人、良性增生者和前列腺癌患者血清中的差异表达(单位ng/ml)
权利要求
1.抗脊椎蛋白2的抗体在制备用于辅助诊断前列腺癌的试剂盒中的应用。
2.根据权利要求1所述的应用，其特征在于所述抗脊椎蛋白2的抗体为抗脊椎蛋白2 的单克隆抗体和/或抗脊椎蛋白2的多克隆抗体；所述抗脊椎蛋白2的单克隆抗体为鼠来源的抗脊椎蛋白2的单克隆抗体；所述抗脊椎蛋白2的多克隆抗体为羊来源的抗脊椎蛋白2的多克隆抗体。
3.检测脊椎蛋白2的试剂盒在制备用于辅助诊断前列腺癌的试剂盒中的应用； 或脊椎蛋白2在设计和/或制备用于辅助诊断前列腺癌的试剂盒中的应用。
4.根据权利要求1-3中任一所述的应用，其特征在于所述检测脊椎蛋白2的试剂盒为检测脊椎蛋白2的酶联免疫试剂盒或检测脊椎蛋白2的免疫组化试剂盒。
5.根据权利要求1-4中任一所述的应用，其特征在于所述检测脊椎蛋白2的试剂盒为检测脊椎蛋白2的酶联免疫试剂盒，所述前列腺癌为如下1)或2、所示DGleason评分为4 6分的前列腺癌、Gleason评分为7分的前列腺癌、Gleason评分为8分的前列腺癌或Gleason评分为9 10分的前列腺癌； 2)前列腺特异性抗原阴性的前列腺癌；所述检测脊椎蛋白2的试剂盒为检测脊椎蛋白2的免疫组化试剂盒，所述前列腺癌为如下I或II或III所示I、Gleason评分为7 8分的前列腺癌或Gleason评分彡6分的前列腺癌；II、WHO评分为2级的前列腺癌；III、有转移灶的前列腺癌。
6.根据权利要求1-5中任一所述的应用，其特征在于所述检测脊椎蛋白2的试剂盒为检测脊椎蛋白2的酶联免疫试剂盒，所述前列腺特异性抗原阴性为血清中前列腺特异性抗原浓度小于等于lOng/ml ；所述检测脊椎蛋白2的酶联免疫试剂盒由鼠来源的抗脊椎蛋白2的单克隆抗体、羊来源的抗脊椎蛋白2的多克隆抗体、标准品溶液、包被缓冲液、封闭液、洗涤缓冲液、终止液、 底物溶液和酶标抗体组成；所述包被缓冲液由碳酸钠、碳酸氢钠和水组成；所述碳酸钠在所述包被缓冲液中的浓度为1. 59g/L，所述碳酸氢钠在所述包被缓冲液中的浓度为2. 93g/L ；所述洗涤缓冲液由氯化钠、氯化钾、磷酸氢二钠、磷酸二氢钾、Tween 20和水组成；氯化钠在所述洗涤缓冲液中的浓度是8g/L，氯化钾在所述洗涤缓冲液中的浓度是0. 2g/L，磷酸氢二钠在所述洗涤缓冲液中的浓度是1.44g g/L，磷酸二氢钾在所述洗涤缓冲液中的浓度是0. 24g/L, Tween 20在所述洗涤缓冲液中的浓度是0. (体积百分比)；所述封闭液由所述洗涤缓冲液和牛血清白蛋白组成，牛血清白蛋白在所述封闭液中的浓度为10g/L ；所述终止液为2M的硫酸水溶液； 所述酶标抗体为HRP标记的山羊抗小鼠抗体；所述标准品溶液为所述封闭液与所述脊椎蛋白2组成脊椎蛋白2浓度不同的如下溶液:100,50,25,12. 5,6. 3,3. 1 和 1. 6ng/ml。
7.根据权利要求1-6中任一所述的应用，其特征在于所述检测脊椎蛋白2的酶联免疫试剂盒中，所述包被缓冲液与所述羊来源的抗脊椎蛋白2的多克隆抗体组成抗体浓度为630ng/ml的溶液；所述封闭液与鼠来源的抗脊椎蛋白2 的单克隆抗体组成抗体浓度为5ug/ml的溶液；所述封闭液与酶标抗体组成酶标抗体浓度为80ng/ml的溶液；所述脊椎蛋白2的氨基酸序列如SEQ ID NO 1所示；所述前列腺特异性抗原的氨基酸序列如SEQ ID NO :2所示。
8.一种用于辅助诊断前列腺癌的酶联免疫试剂盒，由以下物质组成抗脊椎蛋白2的抗体、标准品溶液、包被缓冲液、封闭液、洗涤缓冲液、终止液和酶标抗体。
9.根据权利要求8所述的酶联免疫试剂盒，其特征在于所述抗体为鼠来源的抗脊椎蛋白2的单克隆抗体和羊来源的抗脊椎蛋白2的多克隆抗体；所述包被缓冲液由碳酸钠、碳酸氢钠和水组成；所述碳酸钠在所述包被缓冲液中的浓度为1. 59g/L，所述碳酸氢钠在所述包被缓冲液中的浓度为2. 93g/L ；所述洗涤缓冲液由氯化钠、氯化钾、磷酸氢二钠、磷酸二氢钾、Tween 20和水组成；氯化钠在所述洗涤缓冲液中的浓度是8g/L，氯化钾在所述洗涤缓冲液中的浓度是0. 2g/L，磷酸氢二钠在所述洗涤缓冲液中的浓度是1.44g g/L，磷酸二氢钾在所述洗涤缓冲液中的浓度是0. 24g/L, Tween 20在所述洗涤缓冲液中的浓度是0. (体积百分比)；所述封闭液由所述洗涤缓冲液和牛血清白蛋白组成，牛血清白蛋白在所述封闭液中的浓度为10g/L ；所述终止液为2M的硫酸水溶液；所述酶标抗体为HRP标记的山羊抗小鼠抗体；所述标准品溶液为所述封闭液与所述脊椎蛋白2组成脊椎蛋白2浓度不同的如下溶液100，50，25，12. 5,6. 3,3. 1 和 1. 6ng/ml。
10.根据权利要求8或9所述的酶联免疫试剂盒，其特征在于所述包被缓冲液与所述羊来源的抗脊椎蛋白2的多克隆抗体组成抗体浓度为630ng/ml的溶液；所述封闭液与鼠来源的抗脊椎蛋白2的单克隆抗体组成抗体浓度为5ug/ml的溶液；所述封闭液与酶标抗体组成酶标抗体浓度为80ng/ml的溶液。
全文摘要
本发明公开了SPON2的新用途。该新用途是抗脊椎蛋白2的抗体在制备用于辅助诊断前列腺癌的试剂盒中的应用。实验证明，用检测SPON2的酶联免疫试剂盒或用检测SPON2的免疫组化试剂盒对前列腺癌进行诊断，诊断结果更精确和准确，优于现有的PSA诊断方法。
文档编号G01N33/577GK102346184SQ201010244440
公开日2012年2月8日 申请日期2010年8月3日 优先权日2010年8月3日
发明者周建光, 钱晓龙 申请人:中国人民解放军军事医学科学院生物工程研究所