专利名称：一种检测液体奶维生素B<sub>2</sub>的简便方法
技术领域：
本发明涉及一种检测液体奶维生素4的简便方法，尤其是关于检测液体奶中维生素化的检测步骤的改进，属于化学成份检测的技术领域。
背景技术：
维生素4是各种黄酶辅基的组成成分，它具有可逆的氧化还原特性，可参与机体氧化还原过程。如果人体缺乏维生素氏会容易患上口角炎、唇干裂、舌炎、阴囊炎、结膜炎、 脂溢性皮炎等疾病，并且维生素化的缺乏症能导致食欲减退、腹泻等。人们摄取维生素B2 的主要食物来源为乳制品、瘦肉、肝、蛋黄、糙米及绿叶蔬菜，其中乳制品是维生素4最好的来源。食品安全国家标准GBM13. 12-2010《婴幼儿食品和乳品中维生素化的测定》为专门针对婴幼儿食品和乳品中维生素4的检测方法，该国标检测方法采用的是高效液相色谱法，在其进行试样处理的过程中需要除去样品中的蛋白质，因此需要将盐酸消化后的液体奶样品的PH值调至4. 0左右后，再加入淀粉酶和脂肪酶，摇勻后还需置于37°C培养箱中过夜，以通过酶解的办法来除去样品中的蛋白质，这样将导致整个检测的时间较长，不利于在急需得出检测结果的场合下使用。
发明内容
本发明提供了一种检测液体奶维生素4的简便方法，其可以避免酶解过程，提高检测速度，节省检测成本，保证检测结果。本发明的检测液体奶维生素4的简便方法，包括
(a)制备维生素4标准溶液，利用高效液相色谱仪对其检测，从而生成维生素化含量与峰面积之间对应的标准曲线；
(b)称取一定重量的液体奶，对其进行预处理从而形成液体奶样品，利用高效液相色谱仪在与步骤(a)相同的条件下对其进行检测，得到液体奶样品的检测峰面积；和
(C)将步骤(b)中获得的液体奶样品的检测峰面积与步骤(a)中得到的标准曲线进行比对，通过计算确定液体奶样品中的维生素化含量， 其特征在于，
步骤(b)中的预处理进一步包括
(ba)将液体奶样品用盐酸消解，得到消化液；
(bb)将步骤(ba)中的消化液冷却后，用乙酸钠溶液调节pH值到4.5，静置20min; (be)将步骤(bb)处理过的消化液定容，摇勻，过滤。在检测液体奶中维生素4方法的一种示意性实施方式中，步骤(ba)进一步包括 取混合均勻的液体奶25克于150mL三角瓶中，加入0. ImoL/L的盐酸50mL，充分摇勻，然后置于高压灭菌锅中，在121°C的温度下保持30min。通过上述步骤，可使液体奶样品的消化更充分，以提高检测的准确性。
在检测液体奶中维生素4方法的一种示意性实施方式中，乙酸钠溶液的摩尔浓度可以是2moL/L，以便更有利于液体奶样品的预处理。在检测液体奶中维生素4方法的一种示意性实施方式中，可取滤液经过0. 22um 水相滤膜进行过滤，用以增强过滤效果。在检测液体奶中维生素4方法的一种示意性实施方式中，可制备浓度分别为 0. 00 μ g/mL、0. 05 μ g/mL、0. 10 μ g/mL、0. 20 μ g/mL、0. 50 μ g/mLU. 00 μ g/mL 的维生素 B2 标准溶液，以提高检测的准确性。在液体奶样品预处理过程中，本发明通过乙酸钠溶液调节PH值到4. 5，利用蛋白质的等电点，通过沉淀除去液体奶中的蛋白质，而无需加入淀粉酶和脂肪酶，更无需将液体奶样品置于37°C培养箱中过夜，当天即可进行检测，节省检测时间约12小时，并且可以在保证检测结果准确性的同时，减少检测成本。
具体实施例方式
下面将结合具体实施方案对本发明的方法做更详细的说明。本领域技术人员应当理解，下述实施例均用于对本发明所要求保护的范围进行实例性的描述，以此概括本发明的各参数的相对范围，因而不能将之理解为对本发明的一种具体限制。1)仪器和设备
万分之一天平、150mL三角瓶、IOOmL容量瓶、高压灭菌锅、0.22um水相滤膜、配带荧光检测器的高效液相色谱仪。2)色谱条件
流动相0. 05 mol/L乙酸钠溶液(用冰乙酸调节pH值到4. 5)甲醇=65 :35。进样量20uL；
检测波长激发波长462nm，发射波长522nm ； 3)检测步骤
(a)维生素化标准溶液的制备
维生素化标准储备液O50 μ g/mL)称取25mg(精确至0. 1 mg)维生素化标准品，加入盐酸2mL，超声溶解后，立即用水转移并定容至100mL。置于棕色玻璃容器中在0°C 4°C 冰箱贮存，保存期为3个月。维生素4标准中间液准确吸取4. OOmL标准储备液，用水稀释并定容至100 mL, 此溶液中维生素4浓度为10 μ g/mL。临用前配制。维生素4标准溶液分别吸取维生素4标准中间液0. 00mL、0. 50mL、l. OOmL, 2. OOmL,5. OOmLUO. 00mL，用水溶解并定容至100mL。该标准溶液浓度分别为0. 00 μ g/mL、 0. 05 μ g/mL,0. 10 μ g/mL,0. 20 μ g/mL,0. 50 μ g/mL、1· 00 μ g/mL。临用前配制。绘制标准曲线
将维生素化标准溶液在上述要求的色谱条件下进行色谱测定，记录色谱峰面积。以峰面积为纵坐标，浓度为横坐标，绘制标准曲线，得到标准曲线方程。(b)检测待测液体奶样品
取混合均勻的液体奶样品25克于150mL三角瓶中，加入0. ImoL/L的盐酸50mL，在高压灭菌锅中121°C消解30min;
将消解后的消化液冷却到室温后，用2moL/L的乙酸钠溶液调节pH值到4. 5，然后静置20min ；
将处理过的消化液定容到IOOmL容量瓶中，摇勻，用定量滤纸过滤，取滤液经0. 22um水相滤膜过滤后在上述要求的色谱条件下进行高效液相色谱仪的检测，得到液体奶样品的检测峰面积。(c)结果计算
从标准曲线中查得液体奶样品的进样浓度。计算公式为维生素4的含量=(CXVX 100) / m (单位ug/100g) 式中
c——试液的进样浓度，单位为微克每毫升(yg/mL)； V——试样定容体积，单位为毫升(mL)； m——试样质量，单位为克(g)。本领域技术人员应该可以理解，上述的条件和步骤为一种示意性实施方式，本领域技术人员还可以选择其他条件和步骤来实现本发明。下文将以麦香早餐奶和未来星牛奶为例，对上述检测步骤进行具体描述，其中举出的5个实施案例均在同一天进行前处理，同一天进行上机检测，标准曲线方程一样，标准曲线方程为y=4067980x+10070. 7，由于具体的检测步骤均与上文描述的步骤相同，故在下文中仅描述不同待测液体奶的试样质量、峰面积和试样的进样浓度等数值，对其他部分不再赘述。
实施例1
取麦香早餐奶ι样品分别用前述的检测方法和GBM13. 12国标方法进行检测， 利用本发明方法测得的试样质量m=25. 2236，定容体积V=IOOmL峰面积A=1339551，根据标准曲线方程可得到试液的进样浓度c=0. 3268，
利用GBM13. 12国标方法测得的试样质量m=25. 2856，定容体积V=IOOmL,峰面积A =1344495，根据标准曲线方程可得到试液的进样浓度c=0. 3280
检测结果为
权利要求
1.一种检测液体奶维生素4的简便方法，包括(a)制备维生素4标准溶液，利用高效液相色谱仪对其检测，从而生成维生素化含量与峰面积之间对应的标准曲线；(b)称取一定重量的液体奶，对其进行预处理从而形成液体奶样品，利用所述高效液相色谱仪在与步骤(a)相同的条件下对其进行检测，得到所述液体奶样品的检测峰面积； 和(c)将步骤(b)中获得的所述液体奶样品的检测峰面积与步骤(a)中得到的所述标准曲线进行比对，通过计算确定所述液体奶样品中的维生素B2含量，其特征在于，所述步骤(b)中的预处理进一步包括(ba)将液体奶样品用盐酸消解，得到消化液；(bb)将步骤(ba)中的所述消化液冷却后，用乙酸钠溶液调节pH值到4.5，静置 20min ；(be)将步骤(bb)处理过的消化液定容，摇勻，过滤。
2.如权利要求1所述的方法，其中，所述步骤(b)中的预处理进一步包括取混合均勻的液体奶25克于150mL三角瓶中，加入0. ImoL/L的盐酸50mL，充分摇勻， 然后置于高压灭菌锅中，在121°C的温度下保持30min，得到消化液。
3.如权利要求1所述的方法，其中，所述步骤(b)中的预处理中使用的所述乙酸钠溶液的摩尔浓度为2moL/L。
4.如权利要求1所述的方法，其中，所述步骤(b)中的预处理中的过滤操作进一步包括用定量滤纸过滤，取所得滤液再经过0. 22um水相滤膜进行过滤。
5.如权利要求1所述的方法，其中，所述步骤(a)中制备了浓度分别为0.00μ g/mL、 0. 05 μ g/mL、0. 10 μ g/mL、0. 20 μ g/mL、0. 50 μ g/mL、1. 00 μ g/mL 的维生素 B2 标准溶液。
全文摘要
本发明涉及一种检测液体奶维生素B2的简便方法，包括如下步骤制备维生素B2标准溶液，利用高效液相色谱仪在适当的条件下对其检测，从而生成标准曲线；预处理液体奶样品，利用高效液相色谱仪对预处理过的液体奶样品进行检测，得到液体奶样品的检测峰面积；将检测峰面积与标准曲线进行比对，通过计算确定液体奶样品中的维生素B2含量。其中预处理液体奶样品的步骤包括如下步骤将液体奶样品用盐酸消解，得到消化液；将所述消化液冷却后，用乙酸钠溶液调节pH值到4.5，静置20min；将处理过的消化液定容，摇匀，过滤。本发明所述检测方法可以避免酶解过程，提高检测速度，节省检测成本，并保证检测结果。
文档编号G01N30/02GK102346175SQ201010246139
公开日2012年2月8日 申请日期2010年8月6日 优先权日2010年8月6日
发明者刘卫星, 常建军, 李梅, 魏文平 申请人:内蒙古蒙牛乳业(集团)股份有限公司