专利名称：一种色谱法测定样品中挥发性麻醉药浓度的方法
技术领域：
本发明属于生物医学技术领域，具体涉及一种用自动顶空气相色谱法测定样品中挥发性麻醉药浓度的方法。
背景技术：
挥发性麻醉药与一般静脉麻醉药最后目的完全一样，但在吸入途径给药时，首先必须在麻醉环路系统内达到一定浓度以后，经过肺以浓度分压差吸收入血中，再经循环系统分布至周围组织，到达中枢神经系统发挥其麻醉作用，所以说测定血液中挥发性麻醉药如甲氧氟烷、安氟烷、异氟烷、七氟烷和地氟烷等的血药浓度是非常关键的指标。刘进、刘明政等(二次平衡法测定吸入麻醉药液/气分配系数.《中华麻醉药学杂志》，1996，16 (12) 604 607.)公开了一种用注射器顶空二次平衡法测定吸入麻醉药浓度的方法。该方法首先需配制及校正麻醉药标准气如异氟烷标准气，过程包括1、用注射器抽取血液5 7ml ;2、在37°C恒温水浴条件下振摇水浴1小时使异氟烷在血、气两相中达到第一次平衡(共约2. 5小时)；3、在37°C恒温水浴条件下振摇水浴使异氟烷在血、气两相中达到第二次平衡(1 1. 5小时)；4、通过气相色谱仪测定两次平衡的气相中的异氟烷浓度， 记录两次平衡前后注射器内气相和液相的体积；5、计算血中异氟烷浓度。该法测量准确，同时可计算出麻醉药的液/气分配系数，但样品前处理过程耗时较长，两次平衡时间累计3. 5小时，完全测定一个样品需时4小时，测定效率低，且在实际运用过程中，血制样品无法在注射器内长久储存，血液变性后会对测定的结果有影响，故该方法不适合进行大批量样品的测定处理，所以无法满足临床监测快速测定和批量处理的需要。
发明内容
本发明提供了一种用自动顶空气相色谱法测定挥发性麻醉药浓度的方法。该方法克服了现有技术中标准品制备及样品处理繁琐、测定时间长、存储不便的缺点，提供了一种简便，快速，高效，准确，且能广泛处理大批样品的挥发性麻醉药浓度测定的方法及在临床监测中的应用。本发明的目的是提供一种用自动顶空气相色谱法测定样品中挥发性麻醉药浓度的方法。具体地说，本发明提供了一种测定样品中挥发性麻醉药浓度的方法，其采用自动顶空气相色谱法对包含挥发性麻醉药的样品进行检测，这里，所述的样品为包含挥发性麻醉药的溶液，可选自含有挥发性麻醉药的有机溶剂和/或无机溶剂的溶液，或者离体的生物学样品，例如血液、尿液或组织液。在本发明的实施方案中，所述的挥发性麻醉药选自甲氧氟烷、安氟烷、异氟烷、七氟烷或地氟烷。在本发明的实施方案中，所述的自动顶空气相色谱法包括采用自动顶空进样器进样。在本发明的优选实施方案中，本发明提供了一种测定样品中挥发性麻醉药浓度方法，其采用自动顶空气相色谱法，包括如下步骤(1)色谱条件与系统适用性试验实验仪器为Agilent6890N气相色谱仪；色谱柱为极性毛细管柱，采用升序升温； 进样口温度为100 200°C，检测器为氢火焰离子化检测器(FID)，检查温度200 300°C ； 载气为氮气、氢气或氦气；待测挥发性麻醉药的色谱峰与杂质峰分离度大于2. 5 ；自动顶空进样，85°C保温30min，定量环与传输线温度90 150°C，进样量0. 5 Iml ；(2)标准曲线溶液的制备取挥发性麻醉药适量，精密称定，加溶剂溶解并稀释制成储备液，并用储备液稀释成6 10份不同浓度溶液作为标准曲线溶液，分别取0. 5 Iml置顶空瓶，封瓶即得；(3)供试品溶液的制备取待测溶液0. 5 Iml置顶空瓶，封瓶即得；(4)测定分别取标准曲线溶液与供试品溶液，用自动顶空进样器注入气相色谱仪测定、计算，即得。在本发明的实施方案中，其中，步骤(1)中色谱柱为极性毛细管柱，优选DB-WAX等以聚乙二醇为填充柱的毛细管柱。在本发明的实施方案中，其中，步骤(1)中优选进样口温度为100 200°C，检测器为氢火焰离子化检测器(FID)，检测器温度200 300°C ；采用升序升温；优选起始40 60°C维持2 lOmin，以5 10°C /min速度升至150 200°C，维持2 lOmin。在本发明的实施方案中，其中，步骤(1)中优选的载气为氮气，流速为1.0 3. Oml/min，分流比为 1 1 1 100。在本发明的实施方案中，其中，步骤O)中溶剂优选为水或含有体积比为10 100%的N，N-二甲基甲酰胺或二甲基亚砜的水溶液。在本发明的实施方案中，其中，步骤⑷中优选的顶空预热条件为70 90°C保温 20 30min。本发明提供的检测方法，用自动顶空气相色谱法测定含有挥发性麻醉药样品的标准值和测量值(即标准曲线和样品曲线)，计算出样品中挥发性麻醉药浓度，及该方法在临床监测和实验室分析中的应用本发明的有益技术效果本发明为挥发性麻醉药的浓度测定提供了简便、快速，准确的通用方法。1、极大简化了样品处理过程，仅需在试验中抽取0. 5 Iml血液或其他液体样品至顶空瓶中压盖密封即可。2、标准曲线由配制挥发性麻醉药标准气该成较易稀释配制的标准液，结果同样精确。3、极大缩短了样品检测时间，如用注射器二次平衡做一个样品最低需耗时3小时，且一天同时测定样品受水浴箱限制不可能批量进行，而用自动顶空进样一天可测定 30 40个样品，且完全自动测定无需手动进样。4、使用顶空自动进样，可以避免生物样品带入的杂质对分析造成干扰，减少对色谱柱及进样口的污染从而确保分析结果的准确无误。
5、经稳定性考察，挥发性麻醉药如异氟烷能在顶空瓶中可保存7天之久，储存方便，结果见表1。表1异氟烷样品常温25°C条件下15天留样稳定性考察
权利要求
1.一种样品中挥发性麻醉药浓度的测定方法，其采用自动顶空气相色谱法对包含挥发性麻醉药的样品进行检测，这里，所述的样品为包含挥发性麻醉药的溶液，选自含有挥发性麻醉药的有机溶剂和/或无机溶剂的溶液，或者离体的生物学样品。
2.根据权利要求1所述的测定方法，其中，挥发性麻醉药选自甲氧氟烷、安氟烷、异氟烷、七氟烷或地氟烷。
3.根据权利要求1所述的测定方法，其中，所述离体的生物学样品，例如血液、尿液或组织液。
4.根据权利要求1所述的测定方法，其中，所述的自动顶空气相色谱法包括采用自动顶空进样器进样。
5.根据权利要求1至4中任一权利要求所述的测定方法，包括以下步骤(1)色谱条件与系统适用性试验检测仪为气相色谱仪；色谱柱为极性毛细管柱，采用程序升温；进样口温度为100 2000C，检测器为氢火焰离子化检测器，检查温度200 300°C，载气为氮气、氢气或氦气；待测挥发性麻醉药的色谱峰与杂质峰分离度应大于2. 5 ；自动顶空进样；(2)标准曲线溶液的制备取挥发性麻醉药适量，精密称定，加溶剂溶解并稀释制成储备液，并用储备液稀释成 6 10份不同浓度溶液作为标准曲线溶液，分别取0. 5 Iml置顶空瓶，封瓶即得；(3)供试品溶液的制备取待测溶液置顶空瓶，封瓶即得；(4)测定分别取标准曲线溶液与供试品溶液，用自动顶空进样器注入气相色谱仪测定、计算，即得。
6.根据权利要求5所述的测定方法，其中，步骤(1)中色谱柱为极性毛细管柱，优选 DB-WAX等以聚乙二醇为填充柱的毛细管柱。
7.根据权利要求5所述的检测方法，其中，步骤⑴中优选进样口温度为100 200°C， 检测器为氢火焰离子化检测器，检测器温度200 300°C ；采用升序升温；优选起始40 60°C维持2 lOmin，以5 10°C /min速度升至150 200°C，维持2 lOmin。
8.根据权利要求5所述的检测方法，其中，步骤(1)中载气为氮气，流速为1.0 3. Oml/min，分流比为 1 1 1 100。
9.根据权利要求5所述的检测方法，其中，步骤O)中溶剂选自水或含有体积比为 10 100% N, N-二甲基甲酰胺或者二甲基亚砜的水溶液。
10.根据权利要求5所述的检测方法，其中，步骤中顶空预热方式为70 90°C保温 20 30min。
全文摘要
本发明公开了一种自动顶空气相色谱法测定挥发性麻醉药浓度的方法。该方法适用于挥发性麻醉药，例如甲氧氟烷、安氟烷、异氟烷、七氟烷和地氟烷在样品中的浓度测定。样品可以为含有待测物的溶液，也可以为含有待测物的离体生物学样品，如血液、尿液、组织液中。该方法简便、快速、准确，适用于实验室样品测定分析，也适用临床监测大量样品结果测定。
文档编号G01N30/68GK102175780SQ20101060056
公开日2011年9月7日 申请日期2010年12月16日 优先权日2010年12月16日
发明者刘进, 张文胜, 易斌, 罗楠, 袁瑛 申请人:宜昌人福药业有限责任公司