专利名称：一种同时检测格列苯脲和格列齐特的双通道检测卡及其检测方法
技术领域：
本发明涉及一种检测降糖中药中非法添加西药成分的器具，特别是涉及一种同时 检测格列苯脲和格列齐特的双通道检测卡，属于中药非法添加西药成分检测技术领域。
背景技术：
格列苯脲和格列齐特都属于磺酰脲类降糖药物，主要通过促进胰岛素分泌而发 挥作用，此外，还可加强胰岛素与受体结合，解除受体被胰岛素抵抗的作用，使胰岛素作用 加强。疗效确切而且价格低廉，临床应用广泛，但也具有一定的毒副作用。格列苯脲可 造成低血糖症以及其它一系列如肾上腺皮质功能减退、致畸等严重不良反应。然而一些不 法厂家为了增强降糖效果，将其掺入降糖保健食品中，使患者在不知情的情况下大量服 用，造成严重后果。因此建立一种准确可靠的分析方法，对非法添加这些化学物质进行 检测是非常必要的。目前，现有技术对于格列苯脲和格列齐特的检测主要依赖色谱和质谱技术，这些 方法对实验仪器设备要求高，操作繁琐，对操作人员的专业知识要求高，费时费力。因此建 立一种准确可靠又快速方便的检测中药中西药成分的分析方法是非常必要的。
发明内容
本发明的目的在于提供一种能同时检测格列苯脲和格列齐特的器具，克服现有技 术操作繁琐、专业要求高的缺陷，用于查处伪劣产品，保证用药安全。本发明的技术方案一种同时检测格列苯脲和格列齐特的双通道检测卡，在长条 扁平薄壳状的检测卡外壳1中设置测试条2，检测卡外壳表面有检测窗孔3和加样孔4，测 试条是由支承背板5上粘贴五种元件组成支承背板中部粘贴硝酸纤维素膜6，支承背板一 端部上叠置粘贴吸水膜10，另一端部上叠置粘贴样品垫9，吸水膜内端与样品垫内端各自 分别与硝酸纤维素膜一端搭接，在样品垫与硝酸纤维素膜的搭接部，两者之间夹置粘贴两 段胶体金膜7、8，胶体金膜7、8依次是含抗格列苯脲单克隆抗体胶体金标记物、抗格列齐 特单克隆抗体胶体金标记物的玻璃纤维膜；硝酸纤维素膜上横向有三条间隔开的显示印迹 带一条是含格列苯脲蛋白质偶联物的检测带11，另一条是含格列齐特蛋白质偶联物的检 测带12，第三条是含抗兔抗体或抗鼠抗体的质控带13 ；测试条置入检测卡外壳内，样品垫 正对加样孔，硝酸纤维素膜正对检测窗孔。应用免疫学的方法直接检测样品中格列苯脲和格列齐特的含量，检测样品为胶 囊、片剂、药丸等降糖中药样品，处理方法如下
(1)随机采集一定量的待测样本，粉碎均勻。(2)称取5g粉碎后的样品，加入IOmL样品抽提液，充分搅拌混合5min以上，震荡 反应30min。抽提液配置如下在70mL甲醇中加入30mL蒸馏水。
(3)将步骤(2)所得溶液移入IOmL离心管，4000r/min离心lOmin，取离心后的上 清液；若上清液澄清，则按上清液样品稀释液为1 3的比例稀释，即取上清液100 μ L加 入300 μ L样品稀释液，混合均勻后测定；若上清液浑浊，则用滤纸过滤，取过滤后的上清液 按上清液100 μ L加入300 μ L样品稀释液进行稀释，混合均勻后测定。样品稀释液为ρΗ7. 6、IOmmoL PBST溶液。检测带11、12和质控带13同时显现棕红色印迹，表示检测结果为阴性，说明被检 测样品中格列苯脲和格列齐特均未超标。检测带11、12不显示颜色，只有质控带13显现棕红色印迹，检测结果为阳性，表明 被检测样品中格列苯脲和格列齐特均超标。检测带11不显示颜色，检测带12和质控带13同时显现棕红色印迹，检测结果为 阳性，表明被检测样品中格列苯脲超标，而格列齐特未超标。检测带12不显示颜色，检测带11和质控带13同时显现棕红色印迹，检测结果为 阳性，表明被检测样品中格列齐特超标，而格列苯脲未超标。检测带11、12和质控带13均不显色，则表明检测试条失效。本发明的优点是能同时检测出降糖中药样品中的格列苯脲和格列齐特，易于制备 且节省检测费用，使用方便，检测快速，灵敏度高，结果准确。
图1格列苯脲和格列齐特的双通道检测卡及测试条在外壳内的安置图。1、外壳， 2、测试条，3、检测窗孔，4、加样孔。图2格列苯脲和格列齐特的双通道检测卡的检测试条结构示意图。5、支承背板， 6、硝酸纤维素膜，7、胶体金膜(含抗格列苯脲单克隆抗体胶体金标记物的玻璃纤维膜)，8、 胶体金膜(含抗格列齐特单克隆抗体胶体金标记物的玻璃纤维膜)，样品垫9，吸水膜10。图3检测试条的硝酸玻璃纤维膜上显示印迹示意图。6、硝酸纤维素膜，11、检测带 (含格列苯脲蛋白质偶联物)，12、检测带(含格列齐特蛋白质偶联物)，13、质控带。
具体实施例方式本发明结合具体实施例参见附图进一步说明如下 实施例1
一种格列苯脲和格列齐特的双通道检测卡，它是在检测卡外壳ι中设置测试条2，检测 卡外壳1的结构及测试条2的设置参见附图1和附图2，检测卡外壳1为长条扁平薄壳状壳 体，长7cm，宽2cm，厚0. 5cm，薄壳壁厚0. lcm，由工程塑料制成。检测卡外壳1由壳盖与壳 座两半联接构成，在检测卡外壳1壳盖上有检测窗孔3和加样孔4。测试条2放置在检测卡 外壳1的壳座内。测试条2是多层结构的窄条薄片，片长约6. Ocm，片宽约0. km，厚度小于2. 5mm。 测试条2是多层结构底层是支承背板5，为聚氯乙烯塑料薄片，厚约0. 5mm,长6. Ocm,宽 0. 4cm ；支承背板5中部叠置粘贴硝酸纤维素膜6，硝酸纤维素膜厚0. 5mm，长2_2. 5cm,宽 0. 4cm0硝酸纤维素膜6上有三条间隔开的横向显示印迹带，参见附图3，三条显示印迹带 中，一条是检测带11，含格列苯脲蛋白质偶联物，另一条是检测带12，含格列齐特蛋白质偶联物，第三条是质控带13，含抗兔抗体或抗鼠抗体。支承背板5 —端部上叠置粘贴吸水膜 10，支承背板5另一端部上叠置粘贴样品垫9，吸水膜10内端与样品垫9内端各自分别与硝 酸纤维素膜6 —端搭接，在样品垫9与硝酸纤维素膜6的搭接部，两者之间夹置粘贴两段胶 体金膜7、8，胶体金膜7是含抗格列苯脲抗体胶体金标记物的玻璃纤维膜，胶体金膜8是含 抗格列齐特抗体胶体金标记物的玻璃纤维膜。胶体金膜7和胶体金膜8厚0. 5-0. 8mm，长 0. 5-0. 6cm,宽 0. 4cm。样品垫 9 厚 0. 5-0. 8mm,长 2cm,宽 0. 4cm。吸水膜 10 厚 0. 5-0. 8mm, 长1. 6-2cm,宽0. 4cm0胶体金膜7、8、样品垫9及吸水膜10与硝酸纤维素膜搭接长度为 0. 1-0. 2cm。吸水膜10材料是吸水纸，样品垫9材料是吸水玻璃纤维膜。测试条2置入外壳1内，样品垫9正对加样孔4，硝酸纤维素膜6正对检测窗孔3。实施例2
检测样品为胶囊、片剂、药丸等降糖中药样品，处理方法如下
(1)随机采集一定量的待测样本，粉碎均勻；
(2)称取5g粉碎后的样品，加入IOmL样品抽提液，充分搅拌混合5min以上，震荡反应 30min ；
抽提液配置如下在70mL甲醇中加入30mL蒸馏水；
(3)将步骤(2)所得溶液移入IOmL离心管，4000r/min离心lOmin，取离心后的上清 液；若上清液澄清，则按上清液样品稀释液为1 3的比例稀释，即取上清液100 μ L加入 300 μ L样品稀释液，混合均勻后测定；若上清液浑浊，则用滤纸过滤，取过滤后的上清液按 上清液100 μ L加入300 μ L样品稀释液进行稀释，混合均勻后测定；
样品稀释液为ΡΗ7. 6、IOmmoL PBST溶液；
检测卡的主要反应是免疫学的抗原和抗体反应，在硝酸纤维素膜上迁移的胶体金标记 的抗体，在测试带上分别与含格列苯脲蛋白质偶联物、格列齐特蛋白质偶联物，以及质控带 抗兔抗体或抗鼠抗体反应，形成棕红色条带。若样品中有相应的待检格列苯脲和格列齐特 都高于允许值，当样品加入后即与相应的抗体发生反应，而不会与相应的检测带所含的格 列苯脲蛋白质偶联物、格列齐特蛋白质偶联物反应，从而不显色。主要反应的结果有以下5 种情况
检测带11、12和质控带13同时显现棕红色印迹，表示检测结果为阴性，说明被检测样 品中格列苯脲和格列齐特均未超标；
检测带11、12不显示颜色，只有质控带13显现棕红色印迹，检测结果为阳性，表明被检 测样品中格列苯脲和格列齐特均超标；
检测带11不显示颜色，检测带12和质控带13同时显现棕红色印迹，检测结果为阳性， 表明被检测样品中格列苯脲超标，而格列齐特未超标；
检测带12不显示颜色，检测带11和质控带13同时显现棕红色印迹，检测结果为阳性， 表明被检测样品中格列齐特超标，而格列苯脲未超标；
检测带11、12和质控带13均不显色，则表明检测试条失效。
权利要求
1.一种同时检测格列苯脲和格列齐特的双通道检测卡，其特征在于在长条扁平薄壳状 的检测卡外壳(1)中设置测试条(2)，检测卡外壳表面有检测窗孔(3)和加样孔(4);测试条 是由支承背板(5)上粘贴五种元件组成支承背板中部粘贴硝酸纤维素膜(6)，支承背板一 端部上叠置粘贴吸水膜(10)，另一端部上叠置粘贴样品垫(9)，吸水膜内端与样品垫内端 各自分别与硝酸纤维素膜一端搭接，在样品垫与硝酸纤维素膜的搭接部，两者之间夹置粘 贴两段胶体金膜(7)、(8)，胶体金膜(7)、(8)依次是含抗格列苯脲单克隆抗体胶体金标记 物、抗格列齐特单克隆抗体胶体金标记物的玻璃纤维膜；硝酸纤维素膜上横向有三条间隔 开的显示印迹带一条是含格列苯脲蛋白质偶联物的检测带(11)，另一条是含格列齐特蛋 白质偶联物的检测带(12)，第三条是含抗兔抗体或抗鼠抗体的质控带(13)；测试条置入检 测卡外壳内，样品垫正对加样孔，硝酸纤维素膜正对检测窗孔。
2.权利要求1所述的同时检测格列苯脲和格列齐特的双通道检测卡的检测方法，其特 征在于应用免疫学的方法直接检测样品中格列苯脲和格列齐特的含量，检测样品为胶囊、 片剂或药丸降糖中药样品，处理方法如下(1)随机采集一定量的待测样本，粉碎均勻；(2)称取5g粉碎后的样品，加入IOmL样品抽提液，充分搅拌混合5min以上，震荡反应 30min ；抽提液配置如下在70mL甲醇中加入30mL蒸馏水；(3)将步骤(2)所得溶液移入IOmL离心管，4000r/min离心lOmin，取离心后的上清 液；若上清液澄清，则按上清液样品稀释液为1 3的比例稀释，即取上清液100 μ L加入 300 μ L样品稀释液，混合均勻后测定；上清液浑浊，则用滤纸过滤，取过滤后的上清液按上 清液100 μ L加入300 μ L样品稀释液进行稀释，混合均勻后测定；样品稀释液为ΡΗ7. 6、IOmmoL PBST溶液；检测带11、12和质控带13同时显现棕红色印迹，表示检测结果为阴性，说明被检测样 品中格列苯脲和格列齐特均未超标；检测带11、12不显示颜色，只有质控带13显现棕红色印迹，检测结果为阳性，表明被检 测样品中格列苯脲和格列齐特均超标；检测带11不显示颜色，检测带12和质控带13同时显现棕红色印迹，检测结果为阳性， 表明被检测样品中格列苯脲超标，而格列齐特未超标；检测带12不显示颜色，检测带11和质控带13同时显现棕红色印迹，检测结果为阳性， 表明被检测样品中格列齐特超标，而格列苯脲未超标；检测带11、12和质控带13均不显色，则表明检测试条失效。
全文摘要
一种同时检测格列苯脲和格列齐特的双通道检测卡及其检测方法，属于中药非法添加西药成分检测技术领域。该检测卡外壳表面有检测窗孔和加样孔,壳内有测试条，支承背板中部粘贴硝酸纤维素膜，支承背板一端粘贴吸水膜，另一端粘贴样品垫，硝酸纤维素膜和样品垫之间夹置粘贴两段胶体金膜,胶体金膜分别是含抗格列苯脲和抗格列齐特单克隆抗体胶体金标记物的玻璃纤维膜；硝酸纤维素膜上横向有三条间隔开的显示印迹带一条是含格列苯脲蛋白质偶联物的检测带，另一条是含格列齐特蛋白质偶联物的检测带，第三条是含抗兔抗体或抗鼠抗体的质控带，样品垫正对加样孔，硝酸纤维素膜正对检测窗孔。本检测卡能同时检测一份降糖中药样品中非法添加的两种西药成分,节省检测费用，使用方便，检测快速，灵敏度高，结果准确。
文档编号G01N33/558GK102087281SQ20101060205
公开日2011年6月8日 申请日期2010年12月23日 优先权日2010年12月23日
发明者吴文晔, 周坚, 熊晓芳 申请人:无锡安迪生物工程有限公司