专利名称：一步检测i型鸭病毒性肝炎病毒的试纸条的制作方法
技术领域：
本实用新型涉及一种一步检测I型鸭病毒性肝炎病毒的试纸条。
背景技术：
鸭病毒性肝炎(Duck virus hepatitis,DVH)简称鸭肝炎，是由鸭病毒性肝炎病毒 引起的一种急性接触传染性疾病，以急性发病、病程短和高死亡率为特征。该病在我国多个 地区已多次爆发，且发病严重，流行区域广，损失巨大，严重威胁着我国的养鸭业。鸭肝炎可 由三种不同类型的病毒引起，称为I型、II型和III型鸭肝炎病毒。在我国据一些研究单 位报道，国内流行的鸭肝炎病原主要为I型鸭病毒性肝炎病毒，因此，建立I型鸭病毒性肝 炎病毒的试纸条有现实意义。胶体金免疫层析技术是20世纪80年代发展起来的一项新技术，具有简便、快速、 准确、费用低的特点，且由于为干试条形式，无需低温保存，储运也方便，但是目前尚未见有 检测I型鸭病毒性肝炎病毒的试纸条。
发明内容本实用新型的目的是提供一种一步检测I型鸭病毒性肝炎病毒的试纸条，它能满 足现有技术的上述需求。一种一步检测I型鸭病毒性肝炎病毒的试纸条，其特征在于有一底衬、该底衬上 面的中部粘帖一包被膜，该包被膜中部有一条包被鸭病毒性肝炎病毒VPl蛋白抗体的检测 线和一条包被抗鼠IgG抗体的控制线，包被膜的上面左右分别粘帖一涂覆金标抗体的玻璃 纤维膜和吸水纸；涂覆金标抗体的玻璃纤维膜上面粘贴一样品垫。本实用新型利用现代国际最先进的胶体金免疫层析技术，提供一种现地农户、基 层自测等用的检测鸭病毒性肝炎病毒的胶体金试纸条，该试纸条具有特异性强、灵敏度高、 检测速度快等优点，且不需使用仪器设备，成本低廉，操作简便。
附图为本实用新型的纵剖结构示意图。
具体实施方式
本实用新型一步检测I型鸭病毒性肝炎病毒的试纸条，如图所示，有一底衬1，该 底衬1上面的中部粘帖一包被膜4，该包被膜4中部有一条包被鸭病毒性肝炎病毒vpl蛋白 抗体的检测线6和一条包被抗鼠IgG抗体的控制线7，包被膜4的上面左右分别粘帖一涂覆 金标抗体的玻璃纤维膜3和吸水纸5 ；涂覆金标抗体的玻璃纤维膜3上面粘贴一样品垫2。制造本实用新型的步骤如下根据I型鸭病毒性肝炎病毒vpl序列构建表达载体，诱导产生vpl蛋白的包涵 体，破碎纯化，获得高纯度的鸭病毒性肝炎病毒vpl蛋白，免疫BALB/C小鼠，取其脾细胞与SP2/0细胞融合建立瘤细胞株，进行筛选，取瘤细胞注射于BALB/C小鼠腹腔，使其产生腹 水。提取小鼠腹水进行纯化筛选，获得能与产生中和反应的单克隆抗体用于胶体金标记。制备包被膜4时，将0. 05M、pH9. 6的碳酸盐缓冲液(PBS)用0. 22u膜过滤，制成 包被缓冲液。另将20g牛血清白蛋白(BSA)和20g脱脂奶溶于IOOOmlO. 01Μ、ρΗ7· 0的PBS 用0. 22u膜过滤，制成封闭工作液。调试喷膜机，用上述包被缓冲液稀释鸭病毒性肝炎病 毒vpl蛋白的单克隆抗体和抗鼠IgG多克隆抗体，分别在硝酸纤维膜中部上划线，两线间隔 5mm，应细致均勻，室温晾干20分钟，该两线用的液体分别渗入硝酸纤维膜中，即分别为检 测线6和控制线7。用上述封闭工作液将硝酸纤维膜于37°C封闭60分钟，取出后置于37°C 烘干处理两小时，制成包被膜4。制造涂覆金标抗体的玻璃纤维膜3时，将IOg氯金酸用IOOOml双蒸水溶解，配成 水溶液；将IOg柠檬酸三钠用IOOOml双蒸水溶解，配成水溶液；将13. 8g碳酸钾溶于IOOOml 双蒸水，用0. 22u膜过滤，配制成碳酸钾水溶液；将20g BSA溶于IOOOml 0. 01M、pH7. 0的 PBS中，用0. 22u膜过滤配成标记洗涤液；将IOg BSA、5g脱脂奶粉、0. 5g叠氮钠(NaN3)和 Iml 吐温-20 (Tween-20)在 IOOOml 0. 01M、pH 7. OPBS 中溶解，用 0. 22u 膜滤过，配成金标 抗体保存液。用双蒸水将1 %氯金酸稀释成0. 01 %，置电炉煮沸，按每100毫升0. 01 %氯金 酸加入4毫升柠檬酸三纳，继续煮沸，直到液体呈亮红色即停止加热，冷却至室温后补 足失水。外观应纯净，透亮，无沉淀和漂浮物，即为烧制成的胶体金。用0. IM碳酸钾水溶液 调胶体金的PH值至7. 6，按10微克抗体/毫升胶体金加入抗鸭病毒性肝炎病毒vpl蛋白的 单克隆抗体，混勻，静置30分钟，以12000rpm离心30分钟，弃去上清液，将所得沉淀用标记 洗涤液洗涤两次，最后一次弃去上清液，将所得沉淀用十分之一初始胶体金体积的金标抗 体保存液溶解，配制成金标抗体。将上述标记好的标抗体均勻地涂敷在玻璃纤维膜上，每毫 升溶液涂敷铺10平方厘米，干燥，制得涂覆金标抗体的玻璃纤维膜3。所述底衬1、样品垫2和吸水纸5是本领域通用的材料。将上述包被膜4、涂覆金 标抗体的玻璃纤维膜3、底衬1、样品垫2和吸水纸5按照本实用新型的结构粘贴起来，得到 试纸板，最后将该试纸板切割成不同宽度的试纸条即可。使用实用新型时，在试纸条的检测线6和控制线7位置上各出现一条紫红色条带 为阳性结果；仅试纸条的控制线7位置上出现一条紫红色条带为阴性结果；在试纸条的检 测线6和控制线7位置上均未出现紫红色条带为无效结果。
权利要求一种一步检测I型鸭病毒性肝炎病毒的试纸条，其特征在于有一底衬(1)、该底衬(1)上面的中部粘帖一包被膜(4)，该包被膜(4)中部有一条包被鸭病毒性肝炎病毒vp1蛋白抗体的检测线(6)和一条包被抗鼠Ig6抗体的控制线(7)，包被膜(4)的上面左右分别粘帖一涂覆金标抗体的玻璃纤维膜(3)和吸水纸(5)；涂覆金标抗体的玻璃纤维膜(3)上面粘贴一样品垫(2)。
2.根据权利要求1所述的一步检测I型鸭病毒性肝炎病毒的试纸条，其特征在于所述 的检测线(6)中包被的鸭病毒性肝炎病毒vpl蛋白的抗体为高纯度的抗单克隆抗体和/或 多克隆抗体。
3.根据权利要求1所述的一步检测I型鸭病毒性肝炎病毒的试纸条，其特征在于所述 的涂覆金标抗体的玻璃纤维膜(3)中有由胶体金颗粒标记的抗鸭病毒性肝炎病毒vpl蛋白 的单克隆抗体。
专利摘要一种一步检测I型鸭病毒性肝炎病毒的试纸条，其特征在于有一底衬、该底衬上面的中部粘帖一包被膜，该包被膜中部有一条包被鸭病毒性肝炎病毒vp1蛋白抗体的检测线和一条包被抗鼠IgG抗体的控制线，包被膜的上面左右分别粘帖一涂覆金标抗体的玻璃纤维膜和吸水纸；涂覆金标抗体的玻璃纤维膜上面粘贴一样品垫。本实用新型利用现代国际最先进的胶体金免疫层析技术，提供一种现地农户、基层自测等用的检测鸭病毒性肝炎病毒的胶体金试纸条，该试纸条具有特异性强、灵敏度高、检测速度快等优点，且不需使用仪器设备，成本低廉，操作简便。
文档编号G01N33/544GK201628719SQ20102011721
公开日2010年11月10日 申请日期2010年2月12日 优先权日2010年2月12日
发明者凌红丽, 蒋贻海, 贾德强, 高亚东 申请人:青岛康地恩药业有限公司;青岛宝依特生物制药有限公司